反相高效液相色譜法測定煙葉提取物中茄尼醇含量

　　摘要：目的建立煙葉提取物中茄尼醇含量的測定方法。方法選擇甲醇-乙醇（1:1）為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長211 nm，柱溫30 ℃等條件測定茄尼醇的含量。結(jié)果在21.6～216.0 mg/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（r=0.999 9）。平均回收率為98.5%，RSD為0.68%。結(jié)論此方法簡單、迅速，可用于不同含量茄尼醇樣品的測定。
　　關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜；茄尼醇；含量
　　中圖分類號：R917文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1672-979X(2007)04-0018-02
　　Determination of Solanesol Extracted from Tobacco Leaves by Reversed-phase High-performance Liquid Chromatography
　　WANG Ting, XU Ji-yang*, ZHAO Fang
　　(Biochemistry Teaching and Research Section, China Pharmaceutical University， Nanjing 210009, China)
　　Abstract：Objective To establish a method for the determination of solanesol extracted from tobacco leaves. Methods The mobile phase was a mixture of methanol and alcohol (1:1) with a flow rate of 1.0 mL·min-1, the detection wavelength of 211nm and column temperature of 30 ℃. Results The regression curve was linear between 21.6~216 mg/L (r=0.9999). The average recovery was 98.5% and the RSD was 0.68%. Conclusion The method is simple, quick, and can be used in the determination of solanesol samples with different contents.
　　Key words：reversed-phase high-performance liquid chromatography; solanesol; content
　　
　　茄尼醇（solanesol）是九聚異戊二烯伯醇，四倍半萜烯醇，分子式為C45H74O，相對分子質(zhì)量為631。它是一種蠟狀白色固體，不溶于水，易溶于多種有機(jī)溶劑。茄尼醇廣泛存在于高等植物、哺乳動物和微生物體內(nèi)，如煙葉、馬鈴薯葉和桑葉中，尤其是煙葉中含量高達(dá)0.3%~3% [1] 。
　　茄尼醇是藥物合成的重要原料，是泛醌類藥物不可替代的關(guān)鍵中間體，即輔酶Q10和維生素K2的側(cè)鏈，也能直接作為藥物。測定茄尼醇的方法有薄層掃描法[2]、庫侖滴定法[3]、電噴質(zhì)譜法[4]、串聯(lián)質(zhì)譜法[5]、高效液相色譜法[6]等。高效液相色譜法應(yīng)用最為廣泛，但是反相高效液相色譜法應(yīng)用甚少。我們用反相高效液相色譜法測定樣品中茄尼醇的含量，以甲醇-乙醇（1:1）作為流動相。此法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。
　　
　　1實驗部分
　　
　　1.1儀器和試藥
　　1.1.1儀器島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測器，C-R6A色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)。
　　1.1.2試藥茄尼醇樣品：煙葉浸膏經(jīng)過皂化提取，有機(jī)溶劑提取，柱色譜，重結(jié)晶等所得，為淡黃色粉末狀晶體。茄尼醇對照品：自制，系樣品經(jīng)再次重結(jié)晶所得，為白色粉末狀晶體。經(jīng)紅外、核磁、質(zhì)譜表征結(jié)構(gòu)無誤，高效液相色譜檢測為單一峰，薄層色譜法用兩種不同展開劑均為單一斑點。甲醇、乙醇均為分析純。
　　1.2色譜條件
　　色譜柱：VP-ODS柱（250 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇-乙醇（1:1）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：211 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：2μL。
　　1.3實驗方法
　　1.3.1對照品溶液的配制精密稱取茄尼醇對照品10.8 mg，用甲醇溶解并定容至25 mL。分別取一定量的茄尼醇對照品溶液用甲醇制成濃度為21.6，43.2，86.4，129.6，172.8，216.0 mg/L的系列對照品溶液。
　　1.3.2樣品溶液的配制精密稱取茄尼醇樣品1.0 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后作為測定樣液。
　　
　　2結(jié)果與討論
　　
　　2.1色譜條件的選擇
　　考察了不同比例的甲醇-乙醇溶液，經(jīng)過對保留時間和峰對稱性的比較，選擇甲醇-乙醇（1:1）作為流動相。茄尼醇的最大吸收波長為200 nm，考慮儀器的穩(wěn)定性等因素，選擇211 nm作為檢測波長。茄尼醇對照品和茄尼醇樣品的色譜圖見圖1，茄尼醇的保留時間為8.5 min，理論板數(shù)為2.5×103。
　　
　　2.2線性關(guān)系
　　分別取對照品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積。以峰面積Y對濃度X（mg/L）作線性回歸，回歸方程為Y=5687.5X－2474.2，r =0.999 9。結(jié)果表明，濃度在21.6～216.0 mg/L時線性關(guān)系良好。
　　2.3精密度實驗
　　取同一樣品溶液，分別進(jìn)樣6次，測定其峰面積，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.41%。
　　2.4重復(fù)性實驗
　　按照1.3.2的方法重復(fù)5次，測定其峰面積，考察方法的可重復(fù)性，結(jié)果見表1。
　　2.5回收率實驗
　　取已知茄尼醇含量的樣品6份，精密稱定，分別加入茄尼醇對照品0.2，0.4，0.6 mg，按照1.3.2處理，測定峰面積，計算回收率，結(jié)果見表2。
　　
　　
　　2.6樣品測定
　　精密稱取經(jīng)過一系列步驟提取的煙葉浸膏的非皂化物、有機(jī)溶劑沉淀物、柱色譜洗脫物、結(jié)晶等樣品適量，用甲醇溶解后定容至10 mL，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后測定其含量，結(jié)果見表3。
　　
　　
　　參考文獻(xiàn)
　　[1]王非，鄭珩，余永柱，等. 高純度茄尼醇的現(xiàn)狀與市場前景[J]. 浙江化工, 2005, 36（5）： 25-27.
　　[2]李烈，馬振元，錢秋霞，等. 薄層掃描法測定煙葉中茄尼醇的含量[J]. 中草藥，2002，33（5）：420-421.
　　[3]劉快之，李德亮，陳伯森，等. 庫侖滴定法測定煙葉提取物中茄尼醇[J]. 化學(xué)研究，1997，8（3）：56-59.
　　[4]Tucker S P, Pretty J R. Identification of oxidation products of solanesol produced during air sampling for tobacco smoke by electrospray mass spectrometry and HPLC[J]. Analyst, 2005, 130(10): 1414-1424.
　　[5]Watson C, McCraw J, Polzin G, et al. Development of a method to assess cigarette smoke intake[J]. Environ Sci Technol, 2004, 38(1): 248-253.
　　[6]張明時，黃俊學(xué). 高效液相色譜法測定煙葉提取物中茄尼醇的含量[J]. 色譜，2001，19（5）：470-471.

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