低次煙葉蛋白質(zhì)—多酚復(fù)合物的成分及抗氧化性分析

　　摘要：采用堿溶酸沉法從烤煙低次煙葉中提取蛋白質(zhì)-多酚復(fù)合物，檢測(cè)其中蛋白質(zhì)含量為350 mg/g，多酚成分包括綠原酸、莨菪葶、蕓香苷，其含量分別為2.1、0.5、2.9 mg/g。對(duì)蛋白質(zhì)-多酚復(fù)合物進(jìn)行抗氧化性檢測(cè)。結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)，DPPH·自由基與OH·自由基的清除率隨復(fù)合物濃度的增加而升高；對(duì)蛋白質(zhì)-多酚復(fù)合物中蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解，酶解產(chǎn)物的抗氧化性測(cè)試結(jié)果表明，隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，復(fù)合物對(duì)DPPH·自由基與OH·自由基的清除活性均呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明蛋白質(zhì)與多酚結(jié)合狀態(tài)下才能保持蛋白質(zhì)-多酚復(fù)合物的抗氧化性，而且其抗氧化性可能主要來(lái)源于復(fù)合物中的多酚。
　　關(guān)鍵詞：低次煙葉；蛋白質(zhì)-多酚復(fù)合物；酶解；抗氧化性
　　中圖分類(lèi)號(hào)：S572 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）03-0531-04
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.03.035
　　Analysis of Composition and Antioxidant Activity of Protein-polyphenol Complex from Discarded Tobacco Leaves
　　XU Chun-ping1，RAN Pan-pan1，ZENG Ying1，TAN Lan-lan2，SHENTU Hong-qian2，MA Kuo-yan3，DAI Ya3
　　（1.College of Food and Biological Engineering， Zhengzhou University of Light Industry， Zhengzhou 450002，China；
　　2.Technical Center of China Tobacco Chuanyu Industrial Co. Ltd.， Chengdu 610066，China；
　　3.Technical Center of China Tobacco Chongqing Industrial Co. Ltd.， Chongqing 400060，China）
　　Abstract： The protein-polyphenol complex was extracted from discarded tobacco leaves by alkali-solution and acid-isolation method. The protein content was detected as 350 mg/g and polyphenol components including chlorogenic acid， scopoletin and rutin， and their contents were 2.1 mg/g， 0.5 mg/g， and 2.9 mg/g， respectively. The antioxidant tests of protein-polyphenol complex showed that in a certain range， the scavenging rate of DPPH· radical and OH· radical increased with the increase of the concentration. The scavenging activity of DPPH· radical and OH· radical was decreased with the time of enzymatic hydrolysis. The results indicated that the antioxidant activity of protein-polyphenol can maintain with the binding stage of protein and polyphenol， and the main source of antioxidant activity could be from polyphenols.
　　Key words： discarded tobacco； protein polyphenol complex； enzymatic hydrolysis； antioxidant activity
　　中國(guó)是煙草種植大國(guó)，也是卷煙生產(chǎn)大國(guó)，同時(shí)每年產(chǎn)生的低次煙葉也數(shù)量龐大，有效利用這些廢料既可以保護(hù)環(huán)境，減輕環(huán)境負(fù)擔(dān)，也能創(chuàng)造更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。煙葉蛋白質(zhì)是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源，作為食用蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)它比雞蛋、乳酪和牛奶更適合人體吸收利用，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值[1]。Kung等[2]、Lowe[3]對(duì)煙葉FI蛋白質(zhì)進(jìn)行了提純。趙謀明等[4]使用堿溶酸沉法工藝對(duì)煙葉蛋白質(zhì)進(jìn)行提取。研究表明，提取出的蛋白質(zhì)是一種蛋白質(zhì)多酚復(fù)合物[5]，其中多酚成分對(duì)其生物活性有較大影響。林曉婕等[5]從煙葉中提取出色素蛋白質(zhì)復(fù)合物，表明其中多酚物質(zhì)對(duì)其抗紫外活性起主要作用。王潔[6]研究表明，蛋白質(zhì)與多酚以非共價(jià)形式結(jié)合。本試驗(yàn)對(duì)提取的蛋白質(zhì)-多酚復(fù)合物的組成進(jìn)行分析，檢測(cè)其抗氧化活性，并分析其組成對(duì)抗氧化活性的影響，以期為煙葉蛋白質(zhì)的應(yīng)用提供參考。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料、試劑與儀器
　　低次烤煙葉粉末（2013年河南襄縣產(chǎn)豫煙10號(hào)X3L等級(jí)煙葉）。濃鹽酸、Tris、無(wú)水乙醇、磷酸、DPPH、鄰二氮菲、PBS磷酸鹽、硫酸亞鐵、H2O2（30%）以上試劑均為分析純；甲醇、乙酸為色譜級(jí)；綠原酸、蕓香苷、莨菪葶為標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma公司）；中性蛋白酶（200 000 U/g）、堿性蛋白酶（200 000 U/g）（江蘇銳陽(yáng)生物科技有限公司）；考馬斯亮藍(lán)G-250、牛血清白蛋白（西安國(guó)安生物科技有限公司）；回流裝置、水浴鍋、低速離心機(jī)（湘儀TDZ5-WS型）、紫外分光光度計(jì)（UV1700PC型）、Agilent 1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）、色譜柱為Waters Symme-try C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

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