ＨＰＬＣ測(cè)定白頭翁藥材中白頭翁皂苷Ｂ４的含量

　　摘要 目的：建立白頭翁藥材白頭翁皂苷B₄的含量測(cè)定方法。方法：運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定，色譜柱為Inertsil ODS-3 C₁₈（5μm 250×4．6mm），流動(dòng)相為乙腈-0．1%磷酸溶液(29:71),流速0．8ml·min^-1,柱溫為常溫;檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。結(jié)果：白頭翁皂苷B?4在0．60～7．2μg之間線性關(guān)系良好,r=0．9 999。平均回收率為98．5%，RSD小于2．0%。結(jié)論：本法方便、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好，可以用于白頭翁藥材的質(zhì)量控制。?
　　關(guān)鍵詞 白頭翁 白頭翁皂苷B₄含量測(cè)定 高效液相色譜法??
　　
　　白頭翁為毛莨科植物白頭翁pulsatilla chinensis（Bge．）Regel的干燥根。味苦，寒，歸胃、大腸經(jīng)。白頭翁始載于《本經(jīng)》具有清熱解毒，涼血止痢之功效，可用于熱毒血痢，陰癢帶下，阿米巴痢等［1、2］。其主要有效成分為皂苷類成分，白頭翁皂苷B₄為其主要有效成分之一，其含量也較高［3］，故建立高效液相色譜法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)白頭翁藥材或制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究具有很重要的意義。本實(shí)驗(yàn)在確定了測(cè)定方法后，對(duì)白頭翁藥材中的白頭翁皂苷B₄進(jìn)行了含量測(cè)定。?
　　
　　1 儀器與材料?
　　
　　Waters高效液相色譜儀（515 HPLC Pump，Waters 2 478 Dualλ紫外檢測(cè)器，威馬龍色譜數(shù)據(jù)工作站）；實(shí)驗(yàn)用乙腈為色譜純，水為重蒸餾水；白頭翁皂苷B?4對(duì)照品購于長(zhǎng)沙拓康生物制品有限公司（HPLC歸一法測(cè)定純度大于98%）；白頭翁藥材均購于各藥材公司。?
　　
　　2 方法與結(jié)果?
　　
　　2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為Inertsil ODS-3 C₁₈（5μm 250×4．6mm）;流動(dòng)相為乙腈-0．1%磷酸溶液(29:71);流速0．8ml·min^-1;檢測(cè)波長(zhǎng)203nm; 進(jìn)樣量對(duì)照品、供試品分別進(jìn)樣10μl、20ul；柱溫為常溫。在此色譜條件下，理論塔板數(shù)不小于3000，分離度大于1．5,峰形較好。對(duì)照品與樣品的色譜圖見附圖1?
　　附：HPLC測(cè)定白頭翁皂苷B₄色譜圖
　　?
　　2．2 對(duì)照品溶液制備 取白頭翁皂苷B₄對(duì)照品6mg,精密稱定,加流動(dòng)相溶解成每1ml含白頭翁皂苷B₄對(duì)照品0．6 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。?
　　2．3 供試品溶液的制備 精密稱取白頭翁藥材粉末（過3號(hào)篩）0．2g，加甲醇10 ml，密塞，超聲處理30分鐘（功率150W頻率40KHz），放冷，濾過，取濾液1ml置蒸發(fā)皿中水浴揮干，放冷，加流動(dòng)相轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，揺勻，過0．45μm濾膜，即得。?
　　2．4 線性關(guān)系考察 精密吸取白頭翁皂苷B₄對(duì)照品溶液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0、12．0、14．0μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以白頭翁皂苷B₄進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y=?326 273．1 846X+7 558．5 482，r=0．9 999。結(jié)果表明白頭翁皂苷B4在0．60~7．2μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系（數(shù)據(jù)見表1）。
　　
　　2．5 精密度試驗(yàn) 精密吸取白頭翁皂苷B?4對(duì)照品溶液10μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,記錄峰面積,結(jié)果精密度良好，RSD為0．80%（結(jié)果見表2）。?
　　
　　2．6重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取5份同一批藥材粉末（過3號(hào)篩）0．2g，同2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣分析，計(jì)算白頭翁皂苷B?4的含量，結(jié)果重復(fù)性良好，RSD為1．57% 。（結(jié)果見表3）??
　　
　　2．7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取白頭翁藥材粉末（過3號(hào)篩）0．2g, 同2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分別進(jìn)樣20μl分析，計(jì)算白頭翁皂苷B?4的含量，結(jié)果穩(wěn)定性良好，RSD為1．61%（結(jié)果見表4）。?
　　
　　2．8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批已知含量的白頭翁藥材粉末（過3號(hào)篩）0．1 g,共6份(分別按相當(dāng)于藥材含量的80%、100%、120%加入白頭翁皂苷B?4對(duì)照品溶液) ，同2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣分析，由測(cè)得量與加入量計(jì)算回收率，結(jié)果表明回收率良好（結(jié)果見表5）。
　　
　　2．9 樣品測(cè)定 對(duì)購買到的白頭翁藥材按供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備樣品溶液,進(jìn)樣分析,以外標(biāo)法計(jì)算其含量(結(jié)果見表6)。?
　　
　　3 討論?
　　
　　3．1 提取條件的確定 實(shí)驗(yàn)過程中比較了回流和超聲兩種常用方便的提取方法，超聲提取法明顯好于回流提取法（可能高溫的影響）；對(duì)水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作為提取溶劑進(jìn)行考察，結(jié)果甲醇好于其它溶劑。?
　　3．2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選取 經(jīng)用紫外分光光度法測(cè)定，白頭翁皂苷B₄在202±1nm處有著最強(qiáng)吸收，經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定，在波長(zhǎng)203nm下效果較好，故選擇203nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。?
　　3．3 流動(dòng)相組成的確定 在實(shí)驗(yàn)過程中筆者考察過CH?3OH-H?2O（不同比例），CH?3OH-0．1%H?3PO?4（不同比例），CH?3CN-CH?3OH-H?2O(不同比例)，CH?3CN-0．1%H?3PO?4（30：70），分離效果均不如CH?3CN-0．1%H?3PO?4（29：71）。?
　　3．4 因不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間、不同貯存時(shí)間長(zhǎng)短有別，不同藥材的含量有一定的差異，須建立統(tǒng)一的有效成分含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)建立了白頭翁藥材中白頭翁皂苷B₄的含量測(cè)定方法，為白頭翁藥材的質(zhì)量控制規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化提供了依據(jù)。?
　　
　　參考文獻(xiàn)?
　　1 中國(guó)藥典［S］，一部，2005：68.?
　　2 江蘇新中醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊(cè)）［M］.上海：上�？茖W(xué)技術(shù)出版社，1977：704.?
　　3 丁林生，唐元軍，王勇等.白頭翁湯有效成分檢查和測(cè)定［J］.中成藥，1992，14（9）；34.?
　　(收稿日期：2007年6月22日)
　　
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