云南產(chǎn)青葉膽及其習用品藥材中5種成分的HPLC含量測定

　　[摘要] 目的：建立1種用于測定青葉膽及習用品藥材中獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和紅白金花內(nèi)酯含量的HPLC方法，并研究5種成分在青葉膽及習用品藥材中的分布。方法：Thermo BDS Hypersil C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流動相0.1%磷酸溶液甲醇，梯度洗脫，流速0.7～ 1.0 mL· min-1，柱溫32 ℃，檢測波長為250，260，225 nm。結(jié)果：5種成分的分離度良好，標準曲線在檢測范圍內(nèi)均呈良好線性，r=0.999 7～0.999 9，平均回收率97.03%～102.7%，RSD為1.8%～6.2%。對8種30份青葉膽測定結(jié)果顯示8個青葉膽品種中5種成分的有無及含量存在差異；彌勒獐牙菜、麗江獐牙菜等獐牙菜苦苷含量高達34.47～118.05 mg·g-1；西南獐牙菜中龍膽苦苷含量最高，紫紅獐牙菜中獐牙菜苷的含量較高；根據(jù)獐牙菜苦苷及龍膽苦苷與獐牙菜苷含量之和的比較可以鑒別小青葉膽和大青葉膽；根據(jù)龍膽苦苷與5成分總和的比值可以區(qū)別西南獐牙菜。結(jié)論：本研究建立的方法操作簡單、結(jié)果準確，具有較好的重復性和穩(wěn)定性，可用于青葉膽類藥材的鑒定及質(zhì)量評價。
　　[關(guān)鍵詞] 青葉膽；HPLC；獐牙菜苦苷；龍膽苦苷；獐牙菜苷；芒果苷；紅白金花內(nèi)酯
　　[稿件編號] 20121129008
　　[基金項目] 國家自然科學基金云南省聯(lián)合基金重點項目（U0832603）；國家杰出青年科學基金項目（81025023）；植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室自主課題項目（P2010ZZ08）；中國科學院西部之光“西部博士”啟動項目
　　[通信作者] *陳紀軍，Tel/Fax：（0871）5227197，Email： chenjj@mail.kib.ac.cn；*蔡少青，Tel/Fax： （010） 82801693，Email： sqcai@ bjmu.edu. cn
　　[作者簡介] 李耀利，博士，從事生藥學研究，Email： liyaoli123456@163.com
　　青葉膽來源于龍膽科獐牙菜屬植物彌勒獐牙菜Swertia mileensis T. N. Ho et W. L. Shi的干燥全草，為云南特有藥材，紅河州少數(shù)民族用其治療肝炎有著較悠久的歷史，自1977 年起收入《中國藥典》，具有清肝利膽、清熱利濕的作用，用于肝膽濕熱、黃疸尿赤、膽脹脅痛、熱淋澀痛[12]。但據(jù)文獻記載[25]和作者實際調(diào)查，彌勒獐牙菜僅分布于彌勒、開遠和蒙自等地，資源量少；而獐牙菜屬的多種植物，在云南不同地區(qū)的民間和制藥企業(yè)中用作青葉膽。本研究組多年來收集到青葉膽藥材多份，經(jīng)鑒定來源于獐牙菜屬植物斜莖獐牙菜S. patens、紫紅獐牙菜S. punicea、麗江獐牙菜S. delavayi、西南獐牙菜S. cincta、大籽獐牙菜S. macrosperma和顯脈獐牙菜S. nervosa等。來源于紫紅獐牙菜的干燥全草稱為紫紅青葉膽，被2005年版《云南省中藥材標準》所收載，用途和用法與青葉膽相同[6]。斜莖獐牙菜的全草以小兒腹痛草之名也收入2005年版《云南省中藥材標準》，主治胃痛、腹痛和牙痛等，但在實際中常以青葉膽出售和使用。
　　現(xiàn)代藥理研究表明，獐牙菜屬植物含有的環(huán)烯醚萜類（獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷）、NFDE8酮類成分和齊墩果酸等具有保肝利膽作用[712]。本課題組最新研究結(jié)果顯示紅白金花內(nèi)酯對肝炎病毒表面抗原和肝炎病毒e抗原分泌以及乙型肝炎病毒（HBV） DNA復制均顯示較強的抑制活性，具有較強的抗HBV活性[13]。獐牙菜屬植物尚做藏茵陳和當藥使用[14]，故已有不少含量測定報道。高光躍等[15]建立了云南產(chǎn)11種獐牙菜屬植物中獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷及當藥醇苷的高效液相色譜定量分析方法；結(jié)果顯示，11種獐牙菜均含有獐牙菜苦苷；西南獐牙菜、紫紅獐牙菜、大籽獐牙菜中獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷含量以龍膽苦苷最高，獐牙菜苷最低；顯脈獐牙菜中獐牙菜苷和龍膽苦苷含量較高；但該研究建立的方法流動相復雜，未涉及青葉膽、斜莖獐牙菜、云南獐牙菜和麗江獐牙菜，未測定芒果苷和紅白金花內(nèi)酯。紀蘭菊等[16]報道了15種獐牙菜屬植物中9種成分的含量，涉及獐牙菜苦苷、龍膽苦苷和芒果苷在西南獐牙菜、顯脈獐牙菜、斜莖獐牙菜及大籽獐牙菜中的含量；但該研究中樣品水浴回流提取時間長達2 h；未見青葉膽、云南獐牙菜、麗江獐牙菜和紫紅獐牙菜中各化合物的含量，未測定獐牙菜苷和紅白金花內(nèi)酯。以上2個研究中每種獐牙菜樣品僅只有1份，代表性不足。夏從龍等 [17]也對該屬一些種的多個成分進行了測定。但是，迄今未見2010年版《中國藥典》收載青葉膽的含量測定項；未見云南獐牙菜S. yunnanensis中除芒果苷之外的成分含量測定研究和紅白金花內(nèi)酯在該屬植物中的含量報道；未見青葉膽中芒果苷和斜莖獐牙菜中獐牙菜苷的含量報道。
　　針對以往研究報道中的這些不足，本研究建立了同時測定青葉膽及習用品種中獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和紅白金花內(nèi)酯含量的HPLC方法，并對云南產(chǎn)青葉膽、斜莖獐牙菜、紫紅獐牙菜、麗江獐牙菜、西南獐牙菜、大籽獐牙菜、顯脈獐牙菜和云南獐牙菜共30份樣品進行了含量測定，在比較8個青葉膽品種含量測定結(jié)果的同時，建立了鑒定大青葉膽、小青葉膽、西南獐牙菜和紫紅獐牙菜的方法。研究結(jié)果將為青葉膽及其習用品種的鑒定和質(zhì)量評價提供科學資料。
　　1 材料
　　Agilent 1100 型高效液相色譜儀，DAD二極管陣列檢測器，Agilent Chemistation化學工作站；MilliQ超純水儀（美國Millipore公司）；XS205 dual range 1/10萬電子天平（瑞士梅特勒托利多儀器有限公司）；KQ500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；WB100型小型高速粉碎機（北京市微博創(chuàng)機械設(shè)備有限公司）。

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