中藥材中農(nóng)藥殘留提取方法比較研究

　　摘要：目的 比較加速溶劑萃取、超聲提取和索氏提取法3種常用提取方法對(duì)中藥材中殘留農(nóng)藥的提取差異。方法 用加速溶劑萃取、超聲提取和索氏提取分別對(duì)含有已知農(nóng)藥殘留的中藥材進(jìn)行殘留農(nóng)藥提取，經(jīng)濃硫酸磺化、弗羅里硅土柱凈化和凝膠滲透色譜3種凈化方法，采用HP-5毛細(xì)管色譜柱分離樣品，氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器測(cè)定其農(nóng)藥殘留的含量，外標(biāo)法定量。結(jié)果 超聲提取的提取率顯著低于索式提取、加速溶劑萃取（P<0.05），加速溶劑萃取與索式提取的提取率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），3種凈化方法回收率兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 加速溶劑萃取的提取率最高，其次為索氏提取，超聲提取最低。檢測(cè)者應(yīng)根據(jù)需要選取不同的提取方法。
　　關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留；加速溶劑萃��；超聲提取法；索氏提取法；中藥材
　　中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2014）04-0089-04
　　中藥質(zhì)量的認(rèn)識(shí)、評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制是保證中藥安全性和有效性的重要手段，在中藥研究、生產(chǎn)及臨床應(yīng)用過程中具有非常重要的作用。中藥農(nóng)藥殘留污染具有普遍性，尤其是有機(jī)氯農(nóng)藥，農(nóng)藥殘留超標(biāo)事件對(duì)中藥出口造成了嚴(yán)重的不良影響。所以應(yīng)該加快殘留農(nóng)藥檢測(cè)方法和限量標(biāo)準(zhǔn)的研究工作，及時(shí)制訂管理法規(guī)，加大管理執(zhí)法力度，使相關(guān)企業(yè)重視并主動(dòng)避免農(nóng)藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象出現(xiàn)[1]。
　　各種標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)[2-6]中檢測(cè)農(nóng)藥殘留的提取方法各不相同，目前大多數(shù)檢測(cè)方法采用添加回收率[7-12]來衡量目標(biāo)農(nóng)藥是否提取完全，但添加的農(nóng)藥和藥材本身吸收的農(nóng)藥狀態(tài)差異很大，采用添加回收的方法不能明確地反映對(duì)藥材本身吸收的農(nóng)藥的提取率。本研究以含有已知農(nóng)藥殘留的中藥材為研究對(duì)象，選取常用的3種提取方法和3種凈化手段進(jìn)行不同的組合，對(duì)同一樣品進(jìn)行不同前處理方法的農(nóng)藥殘留檢測(cè)，以此對(duì)比加速溶劑萃取（ASE）、超聲提取（USE）、索氏提取（UE）3種不同方法間的提取率差異，從而為不同檢測(cè)目的工作人員選擇提取方法提供依據(jù)。
　　1 儀器與試藥
　　美國(guó)Agilent 7890氣相色譜儀-電子捕獲檢測(cè)器（GC-ECD），HP-5石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）與DB1701石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 ?m）；美國(guó)Dionex ASE-350加速溶劑萃取儀，萃取池體積10 mL；德國(guó)LCTech GPC-Ultra凝膠滲透色譜儀，凈化柱：400 mm×25 mm glass column，填料50 g Bio-Beads Type S-X3 200-400；浙江省永康市金穗機(jī)械制造廠的JSP-750A高速萬(wàn)能粉碎機(jī)；瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司PL203/01電子天平；北京天鵬有限公司T-150超聲波清洗器；Heidolph公司LABORATA-4000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司SHB-B型循環(huán)水式多用真空泵。
　　人參（產(chǎn)地吉林，批號(hào)bzrs201008-50）、黃芪（產(chǎn)地內(nèi)蒙，批號(hào)bzhq201010-45）、白菊（產(chǎn)地河北，批號(hào)bzbj201003-38），購(gòu)于亳州藥材市場(chǎng)。Florisil硅土柱（1000 mg，6 mL，美國(guó)Agilent公司），正己烷（色譜純，F(xiàn)isher公司），乙酸乙酯、石油醚、丙酮、無水硫酸鈉、正己烷、濃硫酸（分析純，北京化工廠），乙腈（分析純，北京化工廠）。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：六六六（BHC）的3個(gè)異構(gòu)體α-BHC（批號(hào)9085027）、β-BHC（批號(hào)9086033）、γ-BHC（批號(hào)9088040），六氯苯（hexachlorobenzene，批號(hào)1912585），五氯硝基苯（quintozine，批號(hào)200903），pp’-DDE（批號(hào)9081019），反式氯菊酯（trans-permethrin，批號(hào)80104），純度均>99.0%，購(gòu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。
　　2 方法
　　2.1 提取方法
　　將樣品在自然條件下陰干后粉碎，過0.24 mm孔徑的樣品篩，待用。
　　2.1.1 加速溶劑萃取 準(zhǔn)確稱取樣品1.0 g、硅藻土1.0 g（硅藻土起到分散劑的作用），混勻，置于10 mL的萃取池中，待測(cè)。ASE系統(tǒng)壓力1500 psi，溫度100 ℃，加熱時(shí)間5 min，靜態(tài)萃取時(shí)間5 min，沖洗體積為60%，氮吹60 s，循環(huán)2次。提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃水浴中濃縮至近干，待凈化。
　　2.1.2 超聲提取 準(zhǔn)確稱取1.0 g樣品與1.0 g無水硫酸鈉，混勻，置于100 mL具塞三角瓶中，加入提取溶劑30 mL，冰浴提取15 min，將提取液過濾至100 mL茄形瓶中，重復(fù)提取1次，合并提取液并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃水浴中濃縮至近干，待凈化。
　　2.1.3 索氏提取 準(zhǔn)確稱取樣品1.0 g與無水硫酸鈉1.0 g，混勻，置于濾紙包中，放入索氏提取器中，加80 mL提取溶劑（索氏提取器中30 mL，100 mL圓底燒瓶中50 mL），65 ℃水浴提取30 min，約回流6次，將提取液轉(zhuǎn)移至100 mL茄形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃水浴中濃縮至近干，待凈化。
　　2.2 凈化方法
　　2.2.1 磺化法 將濃縮后的殘?jiān)�用正己烷定量轉(zhuǎn)移至具塞刻度試管中，定容至5 mL，再用移液槍加入1 mL濃硫酸，渦旋1 min，3000 r/min離心10 min，取上清液，進(jìn)氣相色譜儀測(cè)定。
　　2.2.2 固相萃取法 將濃縮后的殘?jiān)�，加�? mL正己烷溶解，將裝有1 mL左右高度無水硫酸鈉的弗羅里硅土柱置于固定架上，先用10 mL正己烷-乙酸乙酯（85∶15）進(jìn)行淋洗，當(dāng)淋洗液近干時(shí)快速移入樣品濃縮液，用2 mL淋洗液多次充分洗脫茄形瓶并轉(zhuǎn)入柱中，用50 mL茄形瓶收集洗脫液20 mL，在40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)濃縮至近干。加入1 mL正己烷（色譜純）溶解，進(jìn)氣相色譜儀測(cè)定。

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