安徽省知母藥材質(zhì)量研究

　　摘要 [目的]研究安徽產(chǎn)知母藥材中知母皂苷BⅡ和芒果苷的含量。[方法]知母皂苷BⅡ采用Diamonsil C18 柱（ 250 mm×4.6 mm，5 μm）、乙腈-水等度洗脫（25∶75），流速1.0 ml/min、ELSD檢測(cè)器漂移管溫度60 ℃、載氣流速3.0 ml/min、柱溫為室溫（25 ℃）；芒果苷采用Diamonsil C18 柱（ 150 mm×4.6 mm，5 μm）、乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15∶85）等度洗脫，流速1.0 ml/min。[結(jié)果]知母皂苷BⅡ在 1.036～10.360 μg范圍內(nèi)（r=0.999 6）進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值與峰面積的對(duì)數(shù)值呈良好的線性關(guān)系，芒果苷在0.05～1.00 μg范圍內(nèi)（r=0.999 4）進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性；知母皂苷BⅡ平均回收率為 99.7%，RSD=1.19%；芒果苷平均回收率為 100.3 %，RSD=1.42%。[結(jié)論]安徽省知母藥材中知母皂苷BⅡ與芒果苷含量均符合2010版藥典含量標(biāo)準(zhǔn)。
　　關(guān)鍵詞 知母；知母皂苷BⅡ；芒果苷；質(zhì)量分析
　　中圖分類(lèi)號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）35-12467-02
　　知母為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根莖[1]，為常用中藥，具有滋陰降火、潤(rùn)腸滑燥、止渴除煩、利大小便等作用。知母的化學(xué)成分主要為甾體皂苷、雙苯吡酮類(lèi)，知母皂苷 BⅡ是知母甾體總皂苷提取物中的主要皂苷成分，樣品測(cè)定結(jié)果顯示，該成分的含量可達(dá) 50%以上[2]�！吨袊�(guó)藥典》規(guī)定知母皂苷 BⅡ（timosaponin BⅡ）和芒果苷（mangiferin）為質(zhì)量控制成分。目前野生資源減少，栽培是知母藥材的主要來(lái)源。安徽亳州是栽培知母的傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)和主要產(chǎn)區(qū)，大規(guī)模人工栽培已經(jīng)有30多年的歷史，種植面積每年保持在2 666.7～3 333.3 hm2，且各種外界環(huán)境條件、采收時(shí)間對(duì)栽培藥材質(zhì)量均有影響[3-4]。筆者采用藥典方法測(cè)定了 2013 年在安徽亳州采集的 10 批知母樣品中知母皂苷 BⅡ 和芒果苷的含量，以了解目前安徽產(chǎn)栽培知母藥材的質(zhì)量現(xiàn)狀。
　　1 材料與方法
　　1.1 儀器 Waters Alliance 2695高效液相色譜儀；Waters 2424 ELSD檢測(cè)器；AL204-IC電子分析天平、XSl05型電子天平（METTLER TOLEDO公司）；KQ-500DE超聲清洗器（昆山市超聲儀器公司）。
　　1.2 試驗(yàn)材料 知母皂苷BⅡ（批號(hào)136656-07-0）和芒果苷（批號(hào)111607-200402）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；該試驗(yàn)10批知母藥材樣品均購(gòu)自安徽亳州藥材市場(chǎng)。
　　1.3 化學(xué)試劑
　　乙腈（色譜純，Honeywell）、甲醇（分析純，北京化工廠）、乙酸（分析純，西隴化工股份有限公司）、丙酮（分析純，北京化工廠）、水（超純水）。
　　1.4 試驗(yàn)方法
　　1.4.1 色譜條件。
　　1.4.1.1 知母皂苷BⅡ。Diamonsil C8色譜柱（ 250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫為室溫；流速為1.0 ml/min；ELSD檢測(cè)器漂移管溫度為60 ℃，載氣流速3.0 ml/min ；乙腈-水（25∶75）等度洗脫；進(jìn)樣10 μl。
　　1.4.1.2 芒果苷。Diamonsil C18 色譜柱（ 150 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)258 nm；柱溫為室溫（25 ℃）；流速1.0 ml/min；進(jìn)樣量10 μl；流動(dòng)相與洗脫條件為乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15∶85）等度洗脫。
　　1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。
　　精密稱(chēng)定知母皂苷BⅡ?qū)φ掌?.59 mg，加30%丙酮定容，配制成0.518 mg/ml的對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)定芒果苷對(duì)照品1.50 mg，加稀乙醇配制成濃度為50 μg/ml的對(duì)照品溶液。
　　1.4.3 供試品溶液的制備。
　　1.4.3.1 知母皂苷BⅡ。取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.15 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%丙酮25 ml，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率400 W，頻率40 kHz） 30 min，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用30%丙酮補(bǔ)足減失的重量，搖勻。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
　　1.4.3.2 芒果苷。取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇（50.0%）25 ml，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率400 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
　　1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。 吸取知母皂苷 BⅡ?qū)φ掌啡芤?、4、8、10、15、20 μl注入液相色譜儀，按“1.4.1.1”色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣質(zhì)量的對(duì)數(shù)值lnM為橫坐標(biāo)（X）、峰面積的對(duì)數(shù)值lnS為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取芒果苷對(duì)照品溶液2、4、8、10、15、20 μl注入液相色譜儀，按“1.4.1.2”色譜條件測(cè)定，以芒果苷的峰面積為縱坐標(biāo)、芒果苷的質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　2 結(jié)果與分析
　　2.1 線性關(guān)系考察
　　經(jīng)分析，知母皂苷 BⅡ的回歸方程為Y=1.437 2X +1.546 6（r=0.999 6），可見(jiàn)知母皂苷 BⅡ在進(jìn)樣量為1.036～10.360 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；芒果苷的回歸方程為Y=1 838 915X -54 731（r=0.999 4），表明芒果苷在0.05～1.00 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
　　2.2 精密度試驗(yàn)
　　2.2.1 知母皂苷。取同一樣品（1號(hào)）溶液連續(xù)進(jìn)樣6次（n=6），注入10 μl進(jìn)行 HPLC-ELSD 測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)知母皂苷BⅡ的峰面積RSD值為 1.76%，符合精密度要求；連續(xù)進(jìn)樣 3 d，每天6次，記錄峰面積，以上指標(biāo)成分日間精密度 RSD為 2.87%，表明精密度良好。

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