8種中藥材及其免煎顆粒對2種眼表菌的抑制作用的研究

　　摘要：目的 比較8種中藥材（五倍子、黃連、五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲）及其免煎顆粒對2種眼表菌的抑菌效果的研究。方法 根據(jù)中藥抗菌藥的相關(guān)研究，選取了8種中藥水煎劑和其相應(yīng)的免煎顆粒，取從患者眼表分離出的兩種細菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌）置于血平板中，采用常規(guī)的中藥藥敏紙片瓊脂擴散法，進行抑菌試驗，測量抑菌圈長度，比較各組的抑菌結(jié)果。結(jié)果 黃連、五倍子抑制金黃色葡萄球菌的效果明顯好于五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲抑制金黃色葡萄球菌的效果（P<0.05）;僅五倍子對銅綠假單胞菌為中介作用;五味子、山茱萸，柴胡、杜仲對銅綠假單胞菌無明顯抑菌作用。對于相同藥物的水煎劑組和中藥免煎顆粒組，各個藥物的組間比較無明顯差異（P>0.05）;對于抑制銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的比較，每一組間，對于抑制金黃色葡萄球菌的效果明顯好于抑制銅綠假單胞菌的效果（P<0.05）。結(jié)論 （1）黃連、五味子抗菌效果最好;（2）中藥煎出液和中藥免煎顆粒的抗菌效果差距不大。
　　關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌;銅綠假單胞菌;中藥免煎顆粒;中藥煎出液
　　中圖分類號：R285.5 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2019）04-0073-03
　　在當今的醫(yī)療條件和醫(yī)療水平的制約下，各種常用的抗生素在對抗菌方面的作用已經(jīng)產(chǎn)生了耐藥性。在醫(yī)療方面、食品衛(wèi)生方面均對人類的安全造成危害。在眼科中，細菌感染導致眼表炎是各種眼表手術(shù)術(shù)后最可怕的并發(fā)癥，一旦發(fā)生，會對患者造成災(zāi)難性打擊。尋求更好的辦法預(yù)防眼科手術(shù)術(shù)前眼表炎的發(fā)生，一直是眼科研究的熱點。中草藥作為天然的抑菌藥物，在其生長成熟過程中即不斷和細菌抗爭，因此其耐藥性和毒副作用都很小。而現(xiàn)今的對于眼科常用的抗菌素依然以傳統(tǒng)的抗生素為主。由于長期使用，傳統(tǒng)抗生素的不良反應(yīng)以及耐藥性在日益增多。傳統(tǒng)中藥對于常見眼表菌的抑制作用的研究，在已進行的研究中很少涉及。中醫(yī)藥對眼表菌的抑制作用不失為今后一個誘人的發(fā)展方向。
　　1 材料
　　1.1 中藥水煎劑 本實驗所選取的中藥飲片（五倍子、黃連、五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲）均購置于遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥劑科。
　　1.2 中藥顆粒劑 本實驗所選用的中藥免煎顆粒（五倍子、黃連、五味子、金銀花、山茱萸、柴胡、白頭翁、杜仲）（江蘇江陰天江制藥有限公司）均購置與遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥劑科顆粒藥局。
　　1.3 菌株來源 本實驗所選用的菌株，均是于2018年3月—2018年7月來源于沈陽市第四人民醫(yī)院眼科門診及病房所收集的眼表分泌物分離出的金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌。
　　1.4 儀器與實驗材料 萬古霉素藥敏紙片（Oxoid公司，含藥量10 ug）、亞胺培南藥敏紙片（Oxoid公司，含藥量30 mg）、分析天平、0.5麥氏單位的硫酸鋇濁度標比濁管、MH肉湯培養(yǎng)基（濟南安貝卡有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（MMM-55L，德國）、干熱滅菌器（MMM-55L，德國）、超凈操作臺（ESCO，韓國）等。
　　2 方法
　　2.1 中藥水煎液的制備方法 參照周小楠等[a]提供的方法并進行改良制備生藥濃度1 g/mL的中藥水煎液：用電子天平稱取干燥的中藥飲片50 g置于砂鍋中，加10倍量水（500 mL）泡過夜，武火加熱至藥液沸騰后改用文火煎30 min，4層紗布趁熱過濾，濾渣另加8倍量水，同法煎煮30 min，過濾后，合并2次濾液于同一燒杯中，混合均勻后，加熱蒸發(fā)使藥液濃縮至50 mL，后放涼至室溫，并置于50 mL容量瓶中定容，再倒入輸液瓶，蓋薄膜，壓膠塞和鋁蓋，高壓（表壓：0.7 kg/cm2，溫度：115 ℃，時間30 min）滅菌，取出放涼，即得1 mL相當于原藥材1 g（1：1）的中藥煎劑溶液。
　　2.2 中藥免煎顆粒無菌溶液的制備 中藥顆粒劑溶液的制備用分析天平準確稱取5種中藥顆粒劑適量（相當于原中藥飲片50 g），分別置于燒杯中，用蒸餾水溶解，并在50 mL量筒中定容，再倒入無菌帶蓋容器中，高壓（表壓：0.7 kg/cm2，溫度：115 ℃，時間：30 min）滅菌，取出放涼即得1 mL相當于原藥材1 g（1：1）的中藥顆粒劑溶液。
　　2.3 菌液的制備 將鑒定后的金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌在血平板上分純，于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)后取出細菌以生理鹽水校正濃度至0.5麥氏濁度（相當于l08 CFU/mL）以備用。
　　2.4 無菌濾紙片的制備 將濾紙片用打孔器打成5 mm的小紙片，放置備用。將打孔器制成的小紙片（直徑為5 mm）放入平皿中，利用高壓滅菌器（表壓：0.7 kg/cm2，溫度：115 ℃，時間：30 min）進行高溫高壓滅菌，30min后取出放涼，即得實驗用的無菌小紙片，放置備用。
　　2.5 體外抑菌試驗的操作方法 采用藥敏紙片瓊脂擴散法進行體外抑菌試驗。用無菌接種環(huán)將0.5麥氏濁度的菌液均勻涂布于MH平板，中間選取一個抗菌藥物紙片做陽性對照（金黃色葡萄球菌萬古霉素，銅綠假單胞菌選取亞胺培南），用無菌鑷子在平板四周貼6片無菌的小紙片（5 mm），左右兩邊各3片，靜置10 min，左邊3片用校準過的加樣槍加入1 g/mL中藥水煎劑溶液10 ug。右邊3片同校準過的加樣槍加入1 g/mL中藥免煎顆粒溶液10 ug。于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，用游標卡尺測量抑菌圈的直徑，分別求出其均值。
　　2.6 判定標準中草藥對病原菌的抑菌效果目前國內(nèi)外尚無統(tǒng)一標準，以現(xiàn)有的同類型實驗[1]作為判定標準：抑菌圈直徑>20 mm為敏感，10-19 mm為中度敏感，<10 mm為不敏感。

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