蟾蜍類藥材中吲哚生物堿和蟾毒配基類成分的含量

　　[摘要]目的：建立蟾蜍類藥材中吲哚生物堿和蟾毒配基類成分的HPLC含量測定法，并對蟾酥、蟾皮、蟾衣中2類成分進行分析。方法：吲哚生物堿類，Nucleosil C18柱，乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液（6∶94，磷酸調(diào)pH 3.2）為流動相，流速0.8 mL·min^-1，檢測波長275 nm，柱溫30 ℃；蟾毒配基類，Alltima C18柱，乙腈（A）-0.3%乙酸溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～15 min，28%～54%A；15～35 min，54%A），流速0.6 mL·min^-1，檢測波長296 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果：五羥色胺、N-甲基五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺、蟾蜍噻嚀依次在0.079 6～0.796，0.097 2～1.945，0.074 4～0.744，0.103～2.05，0.067 2～0.672 μg線性關(guān)系良好；五羥色胺和N-甲基五羥色胺的平均加樣回收率依次為98.6 %和91.3 %；日蟾毒它靈、蟾毒它靈、蟾毒靈、華蟾酥毒基、脂蟾毒配基依次在0.004 83～0.614，0.007 9～1.006，0.007 95～1.016，0.009 7～1.24，0.009 6～1.22 μg線性關(guān)系良好；平均加樣回收率依次為101.6%，102.5%，101.0%，99.1%，98.9%。結(jié)論：蟾酥中吲哚生物堿和蟾毒配基類成分含量均較高，蟾皮中含量次之，蟾衣中含量最低甚至檢測不到。
　　[關(guān)鍵詞]蟾酥；蟾皮；蟾衣；吲哚生物堿；蟾毒配基；HPLC
　　蟾酥、蟾皮（干蟾）和蟾衣分別來源于蟾蜍科動物中華大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider皮膚腺和耳后腺干燥分泌物、除去內(nèi)臟的干燥表皮（全體）和自然褪下的角質(zhì)衣膜。蟾蜍類中藥材中化學(xué)成分主要包括吲哚生物堿和蟾毒配基2類，目前已從中分離得到蟾毒配基類化合物103個，吲哚生物堿類12個[1]；關(guān)于該類藥材的質(zhì)量分析多集中于蟾毒配基類成分，關(guān)于吲哚生物堿類成分的含量測定較少[2-3]。本實驗建立了蟾蜍類藥材中5種吲哚生物堿（五羥色胺、N-甲基五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺、蟾蜍噻嚀）和5種蟾毒配基類化合物（日蟾毒它靈、蟾毒它靈、蟾毒靈、華蟾酥毒基、酯蟾毒配基）的HPLC測定法，比較了蟾酥、蟾皮、蟾衣中兩類成分的含量差異，為蟾蜍類藥材的全面質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。
　　1材料
　　Shimadzu LC-20A高效液相色譜儀，包括LC-20AT溶液傳輸單元，SIL-20A自動進樣器，SPD-M20A二極管陣列檢測器，LC Solution色譜工作站（日本島津公司），色譜甲醇和乙腈（Fisher公司），其他試劑為分析純，娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。
　　五羥色胺鹽酸鹽[阿法埃莎（天津）化學(xué)有限公司，純度為99%]，N-甲基五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺、日蟾毒它靈、蟾毒它靈、蟾毒靈為鮮蟾酥中分離制備，蟾蜍噻嚀為干蟾皮中分離得到，面積歸一化法測定純度（N，N-二甲基五羥色胺、蟾蜍噻嚀、蟾毒它靈和蟾毒靈均大于98%，N-甲基五羥色胺96.5%，N，N，N-三甲基五羥色胺96.3%，日蟾毒它靈92.9%），華蟾酥毒基（批號110803-200605）和酯蟾毒配基（批號110718-200507）購于中國食品藥品檢定研究院。
　　蟾酥、蟾皮、蟾衣樣品分別收集或采集于山東菏澤、江蘇南通等主產(chǎn)區(qū)。
　　2方法與結(jié)果
　　2.1吲哚生物堿類成分
　　2.1.1色譜條件Nucleosil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，Macherey-Nagel），Brava C18-BDS保護柱（4.6 mm×7.5 mm，5 μm，GRACE），流動相為乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液（6∶94，磷酸調(diào)pH 3.2），流速0.8 mL·min^-1，檢測波長275 nm，柱溫30 ℃。對照品和樣品的HPLC圖見圖1。
　　2.1.2對照品溶液的制備精密稱取五羥色胺鹽酸鹽和N，N-二甲基五羥色胺對照品各適量，甲醇溶解，得質(zhì)量濃度為0.398 g·L^-1的五羥色胺鹽酸鹽和0.595 g·L^-1的N，N-二甲基五羥色胺對照品溶液；精密稱取蟾蜍噻嚀對照品適量，50%乙醇溶解，得0.168 g·L^-1的蟾蜍噻嚀對照品溶液；依次精密量取上述3種對照品溶液適量，混合、稀釋定容，得質(zhì)量濃度分別為79.6，67.2，74.4 mg·L^-1的五羥色胺鹽酸鹽、蟾蜍噻嚀和N，N-二甲基五羥色胺混合對照品溶液，上述混合對照品溶液再次稀釋得質(zhì)量濃度分別為39.8，33.6，37.2 mg·L^-1的混合對照品溶液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　分別精密稱取N-甲基五羥色胺和N，N，N-三甲基五羥色胺適量，甲醇溶解，得質(zhì)量濃度分別為0.778，0.410 g·L^-1的2種對照品溶液；依次精密量取上述2種對照品溶液適量，混合、稀釋定容，得質(zhì)量濃度分別為194，205 mg·L^-1的N-甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺混合對照品溶液；上述混合對照品溶液依次稀釋得到一系列質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，分別為N-甲基五羥色胺97.3，77.8，48.6，38.9，24.3，19.5，9.72 mg·L^-1，N，N，N-三甲基五羥色胺103，82.0，51.5，41.0，25.7，20.5，10.3 mg·L^-1，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　2.1.3線性關(guān)系精密吸取五羥色胺鹽酸鹽、蟾蜍噻嚀和N，N-二甲基五羥色胺混合對照品溶液2，4，6，8，10，15，20 μL進樣分析，以進樣質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進行回歸處理，得五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺和蟾蜍噻嚀的回歸方程及線性范圍。精密吸取N-甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺系列混合對照品溶液各10 μL，進樣分析，以質(zhì)量濃度（g·L^-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進行回歸處理，得N-甲基五羥色胺和N，N，N-三甲基五羥色胺的回歸方程及線性范圍，見表1。

相關(guān)熱詞搜索：吲哚 生物堿 蟾蜍 含量 成分