神經網絡結合灰色關聯度法對氣滯胃痛顆粒復方藥材抗炎活性譜效關系研究
發(fā)布時間:2019-08-28 來源: 感恩親情 點擊： 
[摘要] 目的：建立氣滯胃痛顆粒抗炎活性的譜效關系分析方法，為中藥復方的質量控制和藥效評價奠定基礎。方法：在建立氣滯胃痛顆粒全時段多波長融合指紋圖譜分析方法的基礎上，采用拉丁超立方法對氣滯胃痛顆粒中6味藥材隨機采樣成不同比例組，測定各組對LPS誘導的RAW264.7細胞釋放TNF-α，IL-6，NO的抑制率，將藥效信息與各組HPLC指紋圖譜化學信息用灰色關聯度分析得出各色譜峰對抗炎活性的影響程度，再用BP神經網絡進行擬合，建立譜效關系。結果：有25個色譜峰與抗炎活性密切相關，采用3層BP神經網絡，以這25個色譜峰量化峰面積作為輸入項，建立了氣滯胃痛顆�？寡姿幮У纳窠浘W絡模型。結論：該模型預測誤差小于7%，能較好的擬合復方中復雜的非線性關系，可以應用于復方中藥譜效關系研究。通過譜效研究建立了評價氣滯胃痛顆�？寡谆钚缘男路椒ǎ侵兴帍头劫|量控制和尋找藥效物質基礎的有效途徑，具有一定實際意義。
[關鍵詞]氣滯胃痛顆粒；抗炎；譜效關系；神經網絡；灰色關聯度法
[稿件編號] 20121025006
[基金項目] 國家自然科學基金項目（81241111）；國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項（2010ZX09401-304-201）
[通信作者] *孟憲生，Tel：（0411）87406496，E-mail： mxsvvv@126.com
[作者簡介] 許雯雯，碩士研究生，Tel：（0411）87406496，E-mail：xww159@sina.com
氣滯胃痛顆粒為《中國藥典》收載的非處方中成藥，由柴胡、延胡索（炙）、枳殼、香附（炙）、白芍、炙甘草6味藥材組成，有舒肝理氣，和胃止痛之效[1]，臨床上可用于治療肝郁氣滯，胸痞脹滿，胃脘疼痛等癥，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗?jié)儭⒋傥竸恿?個主要作用[2-3]�！吨袊幍洹�2010年版一部主要采用高效液相色譜法測定芍藥苷含量。中藥復方化學指紋圖譜對化學成分定性定量起到質量控制的作用，但不能全面反映中藥復方的真實藥效。本實驗將氣滯胃痛顆粒中6味道地藥材通過拉丁超立方法[4]隨機采樣成不同比例組后提取，進行體外抗炎活性的實驗研究，采用綜合評分法[5]對3個考察指標做了進一步數學處理，使之更加科學化，將藥效學信息與各組HPLC指紋圖譜的化學信息用灰色關聯度分析[6]軟件進行相關性分析，得出與抗炎活性密切相關的化學成分，并運用BP神經網絡建立了抗炎活性的預測模型，以便更好地評價氣滯胃痛顆粒抗炎的真實藥效。
1 材料
1.1 儀器與設備 Agilent-1100高效液相色譜儀（Agilent 1100泵、Agilent 1100光電二級陣列檢測器、Agilent 1100色譜工作站，美國安捷倫科技公司）；Sartorius CP225D電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）；NUAIRETM US AUTOFLOW型CO2培養(yǎng)箱（德國NUAIRE公司）；AE31型倒置相差顯微鏡（德國Motic公司）；SUNRISE酶標儀（瑞士TECAN公司）；血球計數板（上海求精生化儀器廠）；96孔無菌培養(yǎng)板（美國Costar公司）。
1.2 藥材與試劑 柴胡、延胡索、白芍、甘草、香附、枳殼藥材均由遼寧本溪三藥有限公司提供，經遼寧中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定，分別為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根、罌粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖、毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根、豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖、莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖、蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種的干燥未成熟果實；氣滯胃痛顆粒（遼寧本溪三藥有限公司，批號20111123）；對乙酰氨基酚對照品（批號018-8905，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，TEDIA公司）；甲酸（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）； DMEM培養(yǎng)基（美國GIBCO公司）；胎牛血清（美國GIBCO公司）；小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）試劑盒、小鼠一氧化氮（NO）試劑盒、小鼠白細胞介素-6（IL-6）試劑盒（上海源葉生物科技有限公司）。
1.3 細胞株 小鼠單核巨噬細胞株RAW264.7由中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心提供。
1.4 動物 健康SD大鼠，體重（200±20） g，雌性，由大連醫(yī)科大學實驗動物中心提供，動物許可證號SCXK（遼）2011-0002。
2 方法與結果
2.1 供試樣品的制備 拉丁超立方采樣（LHS）屬于分層采樣，是一種有效地用采樣值反映隨機變量的整體分布方法，其目的是要保證所有的采樣區(qū)域都能夠被采樣點覆蓋[7]。使用Isight軟件對各藥材量進行拉丁超立方采樣，柴胡、甘草、延胡索、枳殼、香附均按0～10 g，白芍按0～15 g抽樣，進行20次實驗，結果見表1。
表1 拉丁超立方隨機抽樣結果
Table 1 Results of LHSg
將20組藥材分別混勻，置圓底燒瓶中，20倍量水回流提取2 h，搖勻，濾過，揮干，均定容到250 mL量瓶中，取藥液用95%乙醇沉至醇濃度為90%，靜置24 h，濾過，揮干，均定容到250 mL量瓶中，取2 mL供試品溶液，加入對乙酰氨基酚對照品200 μL（0.229 9 g·L-1）作為內標液，再用直徑為0.22 μm的微孔濾膜過濾除菌，置于4 ℃保存待用。其余供試品溶液置水浴鍋中揮干后計算出膏率，備用，留做藥效實驗。
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