吳茱萸及其習(xí)用品藥材中7個(gè)成分的HPLC含量測(cè)定

　　[摘要]建立HPLC同時(shí)測(cè)定吳茱萸及其習(xí)用品藥材中檸檬苦素、吲哚類生物堿（14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿和吳茱萸次堿）及喹諾酮類生物堿（1-甲基-2-正十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿）含量的方法。采用YMC C18 （4.6 mm ×250 mm，5 μm） 色譜柱；流動(dòng)相為乙腈（A）-四氫呋喃（B）-5 mmol·L^-1醋酸銨緩沖液（pH 3.8）（C），梯度洗脫；流速1.0 mL·min^-1；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長220，250 nm。7個(gè)成分的分離度良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線在檢測(cè)范圍內(nèi)均呈良好線性，r=0.999 9。加樣回收率平均值為96.69%～102.4%，RSD為1.4%～3.1%。該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好。對(duì)5種18批吳茱萸類藥材進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果顯示7個(gè)被測(cè)成分在5種藥材中均有分布，但含量差異很大。16批正品吳茱萸中7個(gè)成分的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)在9.46～69.9 mg·g^-1，平均為28.2 mg·g^-1。密果吳萸中7個(gè)成分的總含量為25.8 mg·g^-1，在正品含量范圍內(nèi)，略低于平均值；臭辣吳萸中7個(gè)成分的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.69 mg·g^-1，低于正品的含量下限。密果吳萸和臭辣吳萸與正品吳茱萸相比，主要成分一致，含量總體低于正品吳茱萸。
　　[關(guān)鍵詞]吳茱萸；檸檬苦素；生物堿；含量測(cè)定；高效液相色譜法
　　吳茱萸為傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品。其性味辛、苦，熱，有小毒；具散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉的功效。主要用于治療厥陰頭痛，寒疝腹痛，寒濕腳氣等^[1]。1977～2010年版《中國藥典》均收載吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.） Benth.，石虎E. rutaecarpa（Juss.） Benth. var. officinalis （Dode） Huang或疏毛吳茱萸E. rutaecarpa（Juss.） Benth. var. bodinieri （Dode） Huang的干燥近成熟果實(shí)。這3種吳茱萸在中國秦嶺以南各地均有分布，是商品藥材中的主流品種。同屬的密果吳萸E.compacta Hand.-Mazz.和臭辣吳萸E. fargesii Dode也是民間重要藥材。密果吳萸為土家族民間常備藥，對(duì)治療胃痛、頭痛、心腹氣痛有良效^[2]。湖北民間有用臭辣吳萸的果實(shí)做吳茱萸代用品，也有認(rèn)為本種的果與吳茱萸具有相同藥效^[3]。吳茱萸的基源多樣性及分布廣泛性造成了各地吳茱萸的質(zhì)量差異。關(guān)于密果吳萸和臭辣吳萸的主要成分與正品吳茱萸相比是否一致，未見相關(guān)報(bào)道。
　　吳茱萸的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究報(bào)道很多，但所選指標(biāo)基本集中于吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素^[4-5]。2010年版《中國藥典》將這3個(gè)成分作為藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)成分。吳茱萸主要含生物堿類（吲哚類和喹諾酮類）、檸檬苦素類、黃酮類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分^[6]。Zhao Meng-yao等測(cè)定了12批吳茱萸中去氫吳茱萸堿等6個(gè)吲哚類生物堿的含量^[7]。除吳茱萸堿等吲哚類生物堿外，喹諾酮類生物堿同樣是吳茱萸中含量較高的一類有效成分，存在于提取物的脂溶性部位。文獻(xiàn)報(bào)道吳茱萸中喹諾酮類生物堿具有抗幽門螺桿菌^[8]，抑制白三烯生物合成^[9]，抑制血管緊張素Ⅱ受體結(jié)合等作用^[10]，與吳茱萸的傳統(tǒng)功效具有相關(guān)性。因此，喹諾酮類生物堿也應(yīng)是吳茱萸的藥效成分之一，而該類成分因?qū)φ掌啡狈Χ�被忽略，其含量測(cè)定研究僅零星報(bào)道，如Wu Chang-chuang等測(cè)定了33批市售吳茱萸樣品中11個(gè)喹諾酮類生物堿的含量^[11]。為了全面評(píng)價(jià)吳茱萸及其主要習(xí)用品的質(zhì)量，本文以《中國藥典》收錄的吳茱萸3種正品、臭辣吳萸、密果吳萸5種18批樣品為研究對(duì)象，以檸檬苦素，吲哚類生物堿（14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿），喹諾酮類生物堿（1-甲基-2-正十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿、二氫吳茱萸卡品堿）7個(gè)主要成分的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)目前我國吳茱萸主產(chǎn)地藥材和2批習(xí)用品藥材進(jìn)行系統(tǒng)比較，以探討其品質(zhì)差異，為進(jìn)一步完善吳茱萸的國家標(biāo)準(zhǔn)提供基礎(chǔ)性研究證據(jù)。
　　1材料
　　島津LC-20AT高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元梯度洗脫泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和二極管陣列檢測(cè)器（日本島津公司），KQ-250DBX型數(shù)控超聲波清洗儀（ 昆山市超聲儀器有限公司），XS105型1/10萬電子天平（ 瑞士梅特勒-托利多有限公司）。FW100高速萬能粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司）。
　　檸檬苦素（批號(hào)110800-200404，純度大于95%） 對(duì)照品購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用。14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-甲基-2-十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿對(duì)照品為作者自制，并經(jīng)MS，NMR鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC檢測(cè)，面積歸一化法計(jì)算純度均大于98%。甲醇、乙腈、四氫呋喃為色譜純（美國Fisher公司），水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。
　　實(shí)驗(yàn)用藥材共18批見表1。密果吳萸由湖南中醫(yī)藥大學(xué)林麗美副教授采集于衡山并鑒定。其余樣品由作者實(shí)地采集或購買，實(shí)地采集的樣品均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所林余霖研究員鑒定，購買的4批商品藥材由作者根據(jù)性狀、產(chǎn)地、化學(xué)成分等信息進(jìn)行鑒定。標(biāo)本保存于中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中心。
　　2方法與結(jié)果
　　2.1色譜條件 YMC C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-四氫呋喃（B）- 5 mmol·L^-1醋酸銨緩沖液（pH 3.8）（C）；梯度洗脫（0～10 min，21%～23%A，10%B；10～30 min，23%～24%A，10%B；30～45 min，24%～26%A，10%B；45～50 min，26%A，10%B；50～53 min，26%～60%A，10%B；53～68 min，60%A，10%B；68～70 min，60%～80%A，10%B；70～80 min，80%A，10%B）；流速1.0 mL·min^-1；柱溫30 ℃； 檢測(cè)波長220，250 nm。在上述色譜條件下，樣品中檸檬苦素、14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿、1-甲基-2-十一烷基-4（1H）-喹諾酮、吳茱萸卡品堿和二氫吳茱萸卡品堿色譜峰的保留時(shí)間與對(duì)照品一致，7個(gè)成分的色譜峰能達(dá)到較好的分離，且純度檢查符合要求，樣品其他成分對(duì)欲測(cè)成分的測(cè)定無干擾。吳茱萸樣品（貴州余慶）色譜圖見圖1。密果吳萸及臭辣吳萸的色譜圖見圖2。

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