連翹藥材及其配方顆粒中連翹酯苷A和連翹苷含量比較

　　摘要：目的 比較連翹藥材及其配方顆粒中連翹酯苷A和連翹苷的含量。方法 采用高效液相色譜梯度洗脫法。色譜柱：SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5 ? m）；流動相A為乙腈，流動相B為0.4%冰醋酸溶液；流速：1.0 mL/min；檢測波長：277 nm；柱溫：30 ℃。對連翹藥材及其配方顆粒中連翹酯苷A和連翹苷的含量進行測定，比較二者含量的差異。結(jié)果 連翹配方顆粒中連翹酯苷A的含量低于原藥材中的含量，與所標(biāo)示的濃縮倍數(shù)不符；配方顆粒中連翹苷的含量與原藥材一致。結(jié)論 原配方顆粒的生產(chǎn)工藝需要改進，配方顆粒需要建立完善的質(zhì)量控制方法和合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　關(guān)鍵詞：連翹；配方顆粒；連翹酯苷A；連翹苷；含量測定
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.027
　　中圖分類號：R284.1 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-5304（2014）11-0088-04
　　連翹為木犀科植物連翹Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl的干燥果實，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、疏散風(fēng)熱之功效，用于癰疽、瘰疬、乳痛、丹毒、風(fēng)熱感冒、溫病初起、溫?zé)崛霠I、高熱煩渴、神昏發(fā)斑、熱淋澀痛等[1]。連翹屬植物化學(xué)成分多樣，目前已從連翹屬植物中分離出150個化合物，其中苯乙醇苷類20個、木脂素類32個、黃酮類12個、萜類20個、C6～C2天然醇類17個，還有生物堿類、甾醇類、苯甲醇類、苯丙烯苷類、神經(jīng)酰胺類、揮發(fā)油及其他成分。其中，以連翹酯苷A和連翹苷2種活性成分的含量最高。連翹酯苷A對認知障礙及短暫性腦缺血有神經(jīng)保護作用，具有改善學(xué)習(xí)記憶障礙、舒張血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解熱、抗DNA損傷、防護耳毒性等廣泛的藥理作用[2-4]。連翹配方顆粒以連翹藥材為原料，經(jīng)水提取、濃縮、噴霧干燥而制成的顆粒，臨床供配方用。目前，對于連翹配方顆粒是否具有與連翹藥材等同的藥效以及能否取代藥材用于配方，具有較大的爭議。本研究以連翹酯苷A和連翹苷為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜（HPLC）梯度洗脫方法，測定連翹藥材及其配方顆粒中連翹酯苷A和連翹苷的含量，比較二者含量的差異，為連翹配方顆粒的生產(chǎn)和使用提供試驗依據(jù)。
　　1 儀器與試藥
　　DIONEX Ultimate3000高效液相色譜儀（低壓四元梯度泵、自動進樣器、多波長紫外檢測器、柱溫箱）， 美國賽默飛公司；變色龍色譜工作站（v6.8），美國賽默飛公司；SunFire C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美國Waters；TP150超聲清洗機，北京天鵬科技公司；GWA-10超純水機，北京普析通用；AUW120D電子天平（十萬分之一），日本島津；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。
　　連翹酯苷A對照品（批號111810-201304，94.3%）、連翹苷對照品（批號110821-200711，98.9%）均由中國食品藥品檢定研究院提供。連翹藥材（批號120701、130112、130824）由廣東廣州某醫(yī)藥股份公司提供，為該廠生產(chǎn)配方顆粒的原藥材，經(jīng)湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院黃良永副教授鑒定，均為木犀科植物連翹Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl的干燥果實（老翹）；連翹配方顆粒（廣東廣州某醫(yī)藥股份公司，批號1302002S、1307003S、1311001S，1 g相當(dāng)于連翹藥材10 g）。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 對照品溶液的制備
　　精密稱取連翹酯苷A對照品21.4 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得807.208 μg/mL的連翹酯苷A對照品儲備液；精密稱取連翹苷對照品20.6 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得407.468 μg/mL的連翹苷對照品儲備液。再分別精密量取連翹酯苷A和連翹苷對照品儲備液5.0、0.5 mL，置同一10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得每1 mL含連翹酯苷A 403.604 μg、連翹苷20.373 4 μg的混合對照品溶液。
　　2.2 供試品溶液的制備
　　精密稱取連翹藥材粉末（過5號篩）約0.5 g（配方顆粒研成細粉，精密稱取約0.05 g），置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇15 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
　　2.3 色譜條件
　　色譜柱：SunFire C18（4.6 mm×250 ㎜，5 μm）；流動相A為乙腈，流動相B為0.4%冰醋酸溶液，按表1程序進行梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：277 nm；進樣量：10 μL[1]。結(jié)果在樣品色譜圖中連翹酯苷A峰、連翹苷峰和相鄰的雜質(zhì)峰分離好，無干擾。色譜圖見圖1。
　　2.4 線性關(guān)系考察
　　精密量取連翹酯苷A對照品儲備液1、2、5、7.5、10 mL，分別用甲醇稀釋至10 mL，在“2.3”項色譜條件下進樣10 μL測定；精密量取連翹苷對照品儲備液0.1、0.2、0.5、1、2 mL，用甲醇分別稀釋成10 mL，在“2.3”項色譜條件下進樣10 μL測定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，連翹酯苷A和連翹苷進樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，進行線性回歸。結(jié)果連翹酯苷A和連翹苷進樣質(zhì)量分別在0.807 2～8.072 μg和0.040 75～0.814 9 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，回歸方程分別為連翹酯苷A S=0.130 8C+0.454 1（r=0.999 5，n=5）， 連翹苷S=0.108 2C+0.014 4（r=0.999 9，n=5）。
　　2.5 精密度試驗

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