安徽道地藥材斷血流的愈傷組織誘導(dǎo)條件研究

　　摘要 [目的]研究不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加的植物生長調(diào)節(jié)劑濃度對斷血流愈傷組織的誘導(dǎo)效果。[方法]通過配制不同的培養(yǎng)基，選擇適宜誘導(dǎo)斷血流愈傷組織的培養(yǎng)基;然后選用適宜的培養(yǎng)基，研究不同濃度的6-BA及NAA對斷血流愈傷組織誘導(dǎo)的影響。[結(jié)果]MS、N6、B5、RM、Miller 5種基本培養(yǎng)基中，適合斷血流愈傷組織誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基為MS;研究不同的生長素NAA及細(xì)胞分裂素6-BA濃度時發(fā)現(xiàn)，NAA為0.1 mg/L和6-BA為1.0 mg/L時，斷血流組培效果較好。[結(jié)論]斷血流組培效果最好的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基中NAA為0.1 mg/L和6-BA為1.0 mg/L。
　　關(guān)鍵詞 斷血流;培養(yǎng)基;植物生長調(diào)節(jié)劑;誘導(dǎo);愈傷組織
　　中圖分類號 S567 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）33-11667-02
　　Research on the Condition of Calls Induction of Genuine Clinopodii polycephali of Anhui
　　CHEN Yu1， WANG Fang1， LI Yao-ting2*
　�。�1. Xishan Biotechnology Company Ltd of Lu’an， Lu’an， Anhui 237005; 2.Plant Cell Engineering of West Anhui University Engineering Research Center of Anhui， Lu’an， Anhui 237012）
　　Abstract [Objective] The research aimed to study the effect of the media types and the concentration of plant growth regulator on the callus induction of Clinopodii polycephali. [Method] Choose the suitable culture medium from the preparation of different kinds of medium. In the appropriate culture medium cases， the effect of the different concentration of 6-BA and NAA on inducing callus of Clinopodii polycephali were studied.[Result]MS was best to induce callus of Clinopodii polycephali among MS， N6， B5， RM， Miller.The research of the different concentrations of auxin NAA and cytokinin 6-BA found that when NAA was 0.1 mg/L and 6-BA was 1.0 mg/L， the effect on inducing callus of Clinopodii polycephali was better. [Conclusion]The best suitable medium was MS with NAA 0.1 mg/L and 6-BA 1.0 mg/L.
　　Key words Clinopodii polycephali;Medium; Plant growth regulator; Induction; Callus
　　基金項(xiàng)目 安徽省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（12010402083）。
　　作者簡介 陳宇（1988- ），女，山東棗莊人，碩士，從事中藥材病蟲害防治研究。*通訊作者，工程師，博士，從事中藥材組培及栽培技術(shù)研究。
　　收稿日期 2014-10-15
　　斷血流是1970年從安徽民間發(fā)掘出來的止血藥，為皖西大別山道地中藥，是唇形科植物風(fēng)輪菜Clinopodium chinensis或蔭風(fēng)輪Clinopodium polycephalum的干燥地上部分;風(fēng)輪菜載于1406年的《救荒本草》，蔭風(fēng)輪載于1848年的《植物明實(shí)圖考》。風(fēng)輪菜分布于浙江、江西、福建、廣東、廣西、貴州等地;蔭風(fēng)輪主要分布于江蘇、安徽、廣西、貴州、云南、四川等地。皖西大別山斷血流年產(chǎn)量300 t左右，藥材微苦、味澀、辛涼，其功能為涼血止血。2005版藥典一部收載的斷血流即為上述2種原植物。臨床上應(yīng)用于吐血、咯血、尿血、崩漏、外傷出血等[1-4]，用處較廣，市場潛力良好。筆者通過試驗(yàn)研究不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及添加的植物生長調(diào)節(jié)劑濃度對斷血流愈傷組織的誘導(dǎo)效果，為進(jìn)一步的誘導(dǎo)育種和斷血流皂苷A的工業(yè)化生物合成奠定基礎(chǔ)。
　　1 材料與方法
　　1.1 試驗(yàn)材料
　　六安霍山采集的斷血流。
　　1.2 培養(yǎng)條件
　　在無菌室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度控制在（25±2）℃，光照強(qiáng)度 1 800～2 000 lx，每天光照 12 h。
　　1.3 試驗(yàn)方法
　　1.3.1 不同基本培養(yǎng)基對斷血流愈傷組織誘導(dǎo)的影響。
　　1.3.1.1 培養(yǎng)基的配制。
　　以MS、N6、B5、RM、Miller為基本的培養(yǎng)基，附加蔗糖30 g/L、瓊脂4 g/L、細(xì)胞分裂素6-BA（1.0 mg/L）和生長素NAA（0.1 mg/L）。將做好的培養(yǎng)基攪拌均勻，并用氫氧化鈉將pH調(diào)整至5.8～6.0。
　　1.3.1.2 培養(yǎng)基的滅菌。將配制好的培養(yǎng)基分裝到組培瓶中，用蓋子封好，分裝，封口、 標(biāo)明培養(yǎng)基種類和日期，放入高壓滅菌鍋滅菌。

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