同時(shí)測(cè)定黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷和黃芪甲苷的方法建立

　　【摘 要】目的：分析應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃芪兩種成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的可行性。方法：取黃芪藥材研末后制備成甲醇供試液，然后制備兩種成分的對(duì)照品溶液，以乙腈-水作為流動(dòng)相，分別在210nm和260nm進(jìn)行測(cè)定。分析該方法測(cè)定兩種成分的線性關(guān)系、重復(fù)性和含量狀況。結(jié)果：毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的含量同峰面積具有較好的線性關(guān)系，毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量為0.029%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.217，黃芪甲苷含量為0.031%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.265。結(jié)論；應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃芪兩種成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷具有較高的可行性和可重復(fù)性，且操作便捷，線性關(guān)系較好。
　　【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；含量；黃芪；線性關(guān)系；重復(fù)性
　　【中圖分類號(hào)】R36.25 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）08--02
　　由于中藥材中所含組分具有多樣性和復(fù)雜性，單次僅測(cè)定一種組分的檢驗(yàn)方法效率較低，無(wú)法滿足質(zhì)檢和藥廠等機(jī)構(gòu)實(shí)際應(yīng)用需求，因此近年來(lái)研究多集中于同時(shí)檢測(cè)中藥材中所含多種組分的方法[1]。隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展和新型儀器的出現(xiàn)，多種檢測(cè)技術(shù)逐漸應(yīng)用于中藥質(zhì)量的檢測(cè)控制中[2]。黃芪中多含的毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷是判斷其質(zhì)量的主要成分，因此本研究分析應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃芪兩種成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的可行性，從而為分析黃芪藥材的質(zhì)量提供依據(jù)。
　　1 試劑和器材
　　本研究試劑包含乙腈、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品、甲醇與黃芪甲苷對(duì)照品，選取高效液相色譜儀Agilent、檢測(cè)儀G1315B和色譜站作為檢測(cè)器材。
　　2 方法
　　取黃芪藥材大約3g進(jìn)行研末后精密稱量，制備成體積為50mL的甲醇溶液，再進(jìn)行超聲溶解1h混勻，加入減少重量的甲醇并混合均勻，對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾后作為供試液備用。然后，制備兩種成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的對(duì)照品溶液，精密稱量后與甲醇腈混勻。將10μL的對(duì)照品溶液、供試液加入色譜柱，選取色譜柱規(guī)格為250mm×4.6mm，以甲醇-乙腈-水作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，分別在210nm和260nm條件下進(jìn)行測(cè)定，在前20min設(shè)置波長(zhǎng)為260nm，然后調(diào)整波長(zhǎng)為210nm。分析該方法測(cè)定兩種成分的線性關(guān)系、重復(fù)性和含量狀況。線性關(guān)系分析：分別取不同體積（0.5mL、1mL、2mL、5mL和10mL）的對(duì)照品溶液，用甲醇分別配制成10mL溶液，再取各溶液20μL分別加入色譜柱測(cè)定各溶液中兩種成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的含量并得出峰面積和成分含量的方程式，分析兩者的線性關(guān)系。
　　重復(fù)性分析：分別取6份同種待測(cè)黃芪藥材，分別指標(biāo)成供試液并進(jìn)行檢測(cè)，將6份的平均值作為最終黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的含量，并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值。
　　3 結(jié)果
　　毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的含量同峰面積具有較好的線性關(guān)系，其中前者的線性方程式為Y=14.0×105X+128.25，相關(guān)系數(shù)r=0.998，后者的線性方程式為Y=15.9×105X+625.80，相關(guān)系數(shù)r=0.998，毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量為0.029%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.217，黃芪甲苷含量為0.031%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.265，對(duì)照品溶液和供試液的色譜圖見圖1。
　　4 討論
　　本研究在測(cè)試試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，采用乙腈-水作為流動(dòng)相能夠基線分離黃芪藥材中所含的兩種待測(cè)成分，分離效果良好，且同王俊等[3]的研究中所采用的甲醇-乙腈、甲酸兩種流動(dòng)相相比，該流動(dòng)相的檢測(cè)經(jīng)濟(jì)成本較低，因此本研究最終選取該流動(dòng)相，成英等[4]的文獻(xiàn)研究中也選取乙腈-水作為流動(dòng)相，與本研究一致。另外，測(cè)定試驗(yàn)初期將不同超聲溶解時(shí)間下所測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，得出在1h時(shí)兩種組分的含量最高，即超聲溶解1h混勻時(shí)能夠保證供試液中所含的成分被有效地提取，因此本研究選取超聲溶解時(shí)間為1h。在本研究的結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷的含量同峰面積具有較好的線性關(guān)系，毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量為0.029mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.217，黃芪甲苷含量為0.031mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.265，可見應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃芪兩種成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷具有較高的可行性和可重復(fù)性，且操作便捷，線性關(guān)系較好。通過(guò)同時(shí)測(cè)定黃芪藥材中多種組分，能夠有效地提高質(zhì)檢效率，保證較高的質(zhì)檢精確度，節(jié)省藥材檢測(cè)等待時(shí)間，為中藥廠投入生產(chǎn)和藥材進(jìn)行銷售奠定基礎(chǔ)。另外，高效液相色譜法還可測(cè)定中藥飲片[5]、中成藥[6]中所含各成分的含量，今后還需進(jìn)一步分析黃芪藥材中其他成分和中成藥的檢測(cè)。
　　綜上所述，應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃芪兩種成分毛蕊異黃酮葡萄糖苷與黃芪甲苷具有較高的可行性和可重復(fù)性，且操作便捷，線性關(guān)系較好。
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