1例Rh弱D15型的血清學(xué)及基因定型研究

　　中圖分類號：R394                                    文獻標(biāo)識碼：B                                DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.05.071
　　文章編號：1006-1959（2018）05-0189-02
　　Rh血型系統(tǒng)中D抗原免疫原性最強，是臨床上引起溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病的重要抗原。D抗原除了正常的D抗原外，還存在多種變異型：部分D、弱D和DEL。在臨床輸血工作中，極少能發(fā)現(xiàn)RhD變異型的患者，現(xiàn)報告如下。
　　1材料與方法
　　1.1一般資料  患者男性，77歲，2016年9月住院檢查出肺陰影，術(shù)前做血型鑒定，在我科用戴安娜血型卡常規(guī)做血型后由第二個工作人員復(fù)核血型時發(fā)現(xiàn)RhD表達偏弱的，送本地血液中心血型室確認此患者的RhD血型，其采用血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法檢測出此患者為RhD變異型。
　　1.2試劑與儀器  選用抗-D試劑 1號IgM抗-D單克隆抗體（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號：20151816）;2號戴安娜微柱凝膠血型卡（批號：15023.02）;3號IgM+IgG 抗-D（Milli-pore，批號：BMG-1102A）;戴安娜Coombs卡（批號：15143.01）;全血 DNA 提取試劑盒： 購自 TIANGEN;人類紅細胞 RhD 陰性鑒定基因檢測試劑盒（PCRSSP）： 購自天津秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司;Baso 2005-2醫(yī)用低溫離心機;戴安娜WADIANA-COMPACT全自動配血及血型分析儀。
　　1.3方法  ①血清學(xué)方法：IgM抗-D用試管法和血型卡，IgG抗-D用Coombs卡，按試劑使用說明書操作。②DNA提�。� 按全血 DNA提取試劑盒試劑使用說明書操作。③RhD 基因檢測： 按人類紅細胞 RhD 陰性鑒定基因檢測試劑盒使用說明書操作， 根據(jù)結(jié)果格局判定結(jié)果。
　　2結(jié)果
　　2.1試管法IgM抗-D強度為3+（混合凝集外觀）。
　　2.2血型卡IgM抗-D強度為3+。
　　2.3 IgG抗-D強度為4+。
　　2.4 PCR-SSP 凝膠成像檢測，結(jié)果判定，為弱D15型，見表1。
　　3討論
　　在紅細胞35個血型系統(tǒng)中，Rh血型系統(tǒng)是最具復(fù)雜性和多態(tài)性的血型系統(tǒng)，在輸血醫(yī)學(xué)中的重要性僅次于ABO血型系統(tǒng)[1]。Rh血型系統(tǒng)抗原總數(shù)約有45種之多，主要抗原有D、C、E、c和e五種抗原，由于D抗原的抗原性最強，具有高免疫性而最具臨床意義[2]。近年來通過研究發(fā)現(xiàn)，RhD抗原分為D陽性、D陰性和D變異型。D變異型又可分為：①部分D（partial D）：D抗原表達不完整，其質(zhì)量發(fā)生變異，和某些抗D試劑不發(fā)生凝集反應(yīng)。②弱D（week D）：D抗原表達完整但是強度減弱，由RhD基因編碼區(qū)堿基突變造成。③DEL型：極弱表達的D抗原，且質(zhì)量也發(fā)生變化，只有通過吸收放散的方法才能檢測到，稱為DEL抗原。
　　以前的觀點認為RhD變異型人群作為受血者應(yīng)視為RhD陰性，輸RhD陰性紅細胞[2]。但是，進一步了解了RhD血型基因的分子生物學(xué)基礎(chǔ)后，得知應(yīng)根據(jù)RhD變異型不同的發(fā)生機制選擇不同的輸血方案，已達到節(jié)約RhD陰性血液資源的目的。RhD變異型的產(chǎn)生原理有：①基因交換：由于RhD基因和RhCE基因在Rh座位上方向相反，兩個同源基因之間容易發(fā)生交換，即部分D。②堿基變異：包括突變、缺失、mRNA拼接位點變異等，若在剪切點周圍發(fā)生突變往往是DEL型，蛋白編碼區(qū)突變往往是弱D發(fā)生的分子機制。對于RhD變異型個體，既要警惕他們的血液可能使受血者產(chǎn)生抗體，又要避免不加區(qū)分地一律給他們輸注陰性血液。有關(guān)RhD血型的輸血方案有如下總結(jié)：①RhD陰性：即RhD全基因缺失者，作為受血者應(yīng)接受RhD全基因缺失的供血者血液;作為供血者可供血給任何RhD亞型的受血者;②部分D：即RhD部分基因被RhCE基因替換融合者，作為受血者應(yīng)接受RhD全基因缺失或相同部分D亞型的供血者血液;作為供血者可供血給相同部分D亞型和RhD陽性受血者;③弱D：弱D作為受血者可當(dāng)作RhD陽性對待，接受RhD陽性血液，作為供血者應(yīng)當(dāng)作RhD陽性對待;④DEL型：作為受血者可當(dāng)作RhD陽性對待，接受RhD陽性血液，作為供血者應(yīng)當(dāng)作RhD陽性對待。
　　為了避免RhD變異型的漏檢，采用DNA分型技術(shù)篩選檢測RhD變異型已成為一項輔助工具。傳統(tǒng)的血清學(xué)方法存在很多缺陷，如步驟復(fù)雜繁瑣;不同的商品化的抗D試劑與D抗原決定簇結(jié)合位點不同，即使對同一抗原決定簇反應(yīng)，其結(jié)合能力也有差別[2];并且對人員操作經(jīng)驗要求高，就如我科這例RhD變異型患者，在首次判讀結(jié)果時漏檢而在復(fù)核結(jié)果時由另一人員發(fā)現(xiàn)。分子生物學(xué)方法可直接檢測RhD基因型，簡便快捷，可操作性強，結(jié)果準(zhǔn)確。
　　本文中的患者手術(shù)順利，沒有輸血。理論上弱 D 因為只是抗原位點數(shù)減少，在輸入RhD陽性的血后不會產(chǎn)生抗-D 抗體，即不會造成再次輸血困難。
　　綜上所述，臨床上用血清學(xué)方法檢測出的RhD表達減弱，應(yīng)進一步采取分子生物學(xué)方法確定其基因型，以選擇合適的輸血方案，避免RhD陰性血液的浪費。
　　參考文獻：
　　[1]孫國棟，王曉平.Rh血型系統(tǒng)弱D及部分D研究進展[J].臨床輸血與檢驗，2007，9（2）：183-185.
　　[2]師巧紅，樊紅.D變異型受血者輸RhD陰性血1例[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，09（20）：123-124.

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