烤煙煙葉胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶分離條件的優(yōu)化

　　摘要：通過不同流動(dòng)相、測(cè)定溫度、流速的對(duì)比，優(yōu)化了分離煙葉總DNA中胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的高效液相色譜法�？緹煙熑~DNA采用CTAB法提取，高氯酸水解，用KOH調(diào)節(jié)pH到3－5，取上清液測(cè)定。色譜柱為Nucleosil C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)。優(yōu)化后測(cè)定條件為：流動(dòng)相采用甲醇：5mmol／L戊烷磺酸鈉(10:90，V／V)，流速0.7ml／min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)273nm，進(jìn)樣量20μl。該方法簡(jiǎn)化了流動(dòng)相的配制，縮短了分離時(shí)間，胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的加標(biāo)回收率分別為103.50％和96.67％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.35％和2.80％。用該方法研究烤煙煙葉發(fā)育過程中總DNA胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的含量，效果良好，符合煙葉生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律。
　　關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜；烤煙煙葉；5－甲基胞嘧啶；胞嘧啶
　　中圖分類號(hào)：S572－34　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A　文章編號(hào)：1001－4942(2010)06－0094－04

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