3種中藥材對(duì)番茄根圍土壤線蟲影響及對(duì)根結(jié)線蟲的毒力

　　摘要：研究３種中藥材天南星、半夏和商陸對(duì)番茄根際根結(jié)線蟲數(shù)量、土壤線蟲群落組成的影響，并測定這３種中藥材對(duì)根結(jié)線蟲２齡幼蟲殺線蟲活性。盆栽試驗(yàn)表明，在施入中藥材的土壤中，植物寄生性線蟲的個(gè)體數(shù)量明顯減少，非植物寄生性線蟲的數(shù)量明顯增加，土壤線蟲群落結(jié)構(gòu)更利于植物生長。對(duì)３種中藥材的甲醇－乙醇提取物的生物學(xué)測定結(jié)果表明，３種中藥材提取物對(duì)根結(jié)線蟲均有一定毒殺作用。天南星、商陸和半夏２４ ｈ的ＥＣ５０分別為０．４７、１．９８、３．９１ ｇ／Ｌ，４８ ｈ的ＥＣ５０分別為０．２４、０．５２和２．５０ ｇ／Ｌ。３種中藥材中，天南星可作為一種有潛力的植物源殺線蟲劑資源加以利用。
　　關(guān)鍵詞：中藥材；番茄根圍；根結(jié)線蟲；土壤線蟲；毒力
　　中圖分類號(hào)：Ｓ１５４．３８＋６；Ｓ４３６．４１２．２＋９ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）14－2870-03
　　
　　Effects of Three Kinds of Chinese Herbal Medicine on Soil Nematode of Tomato Rhizosphere Soil and Its Toxicity to the Root-knot Nematode
　　
　�。祝粒危� Ｒｏｎｇ，ＳＨＩ Ｌｉ－ｂｏ，ＷＵ Ｈａｉ－ｙａｎ
　　 （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔａｉ’ａｎ ２７１０１８， Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
　　
　�。粒猓螅簦颍幔悖簦� Ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ａｒｉｓａｅｍａ ｅｒｕｂｃｓｃｅｎｓ （ＴＮＸ）， Ｐｉｎｅｌｌｉａ ｔｅｒｎａｔａ （ＢＸ）， Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｃｉｎｏｓａ Ｒｏｘｂ （ＳＬ） ｏｎ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｒｏｏｔ－ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｉｌ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ， ｔｈｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｎ the second instar larvae of ｒｏｏｔ-ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｕｔ ｎｏｎ－ｐｌａｎｔ ｐａｒａｓｉｔｉｃ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐｏｗｄｅｒ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｓｏｉｌ ｎｅｍａｔｏｄｅ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｔｏ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ． Ｂｙ ｔｈｅ ｂｉｏａｓｓａｙ ｏｆ ｃａｒｂｉｎｏｌ－ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔion ｆｒｏｍ ｔｈｅ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｙ ａｌｌ ｈａｄ ｆａｔａｌ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｒｏｏｔ-ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ． ＥＣ５０ ｏｆ ＴＮＸ， ＳＬ ａｎｄ ＢＸ ｗａｓ ０．４７， １．９８， ３．９１ ｇ／Ｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎ ２４ ｈ． ＥＣ５０ ｏｆ ＴＮＸ， ＳＬ ａｎｄ ＢＸ ｗａｓ ０．２４， ０．５２和２．５0 ｇ／Ｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎ ４８ ｈ． ＴＮＸ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｔｒｅａｔｅｄ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｌａｎｔ ｓｏｕｒｃｅ ｆｏｒ ｂｉｏ－ｎｅｍａｔｉｃｉｄｅ．
　�。耍澹� ｗｏｒｄｓ： Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ； tomato rihizosphere soil； ｒｏｏｔ－ｋｎｏｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ； ｓｏｉｌ ｎｅｍａｔｏｄｅ； ｔｏｘｉｃｉｔｙ
　　
　　近年來，隨著保護(hù)地蔬菜種植面積的擴(kuò)大，受保護(hù)地密閉、高溫、高濕和復(fù)種指數(shù)增加等因素影響，蔬菜根結(jié)線蟲病發(fā)生呈逐年加重趨勢，在黑龍江、山東、遼寧、北京、河南、湖北、江蘇、云南和海南等地都有根結(jié)線蟲病嚴(yán)重發(fā)生和流行的報(bào)道，一般可造成作物減產(chǎn)１０％～２０％，嚴(yán)重可達(dá)３０％～４０％，甚至絕產(chǎn)［１］。番茄根結(jié)線蟲病已上升為番茄生產(chǎn)上的重要病害，但目前國內(nèi)尚無大面積推廣應(yīng)用的抗根結(jié)線蟲病的番茄品種，防治主要依靠化學(xué)殺蟲和栽培措施，由于環(huán)境安全和食品安全問題，殺線蟲劑的使用受到諸多限制，番茄根結(jié)線蟲病的防治缺乏有效措施，需要開發(fā)無公害的殺線蟲劑用以防治番茄根結(jié)線蟲，其中植物源農(nóng)藥是較好的選擇。在研發(fā)植物源殺線蟲劑時(shí)，除研究殺線蟲功效外，還研究其對(duì)土壤中線蟲群落結(jié)構(gòu)的影響，可為研制開發(fā)新型植物源殺線蟲劑提供依據(jù)。
　�。辈牧吓c方法
　�。保�１試驗(yàn)材料
　　番茄品種為毛粉８０２，３種中藥材為天南星（ＴＮＸ）、半夏（ＢＸ）和商陸（ＳＬ）。取染根結(jié)線蟲病的番茄根在組織搗碎機(jī)中搗碎，過３２５目、５００目篩收集根結(jié)線蟲蟲卵，體視顯微鏡下計(jì)數(shù)，制備１ ０００個(gè)／ｍＬ的線蟲卵懸液。
　�。保�２盆栽試驗(yàn)
　　盆直徑為１１ ｃｍ、高９ ｃｍ，每盆土樣１００ ｇ，供試土壤取自菜園０～４０ ｃｍ土層，均勻混合，營養(yǎng)狀況見表１。每盆用中藥材粉２ ｇ，與土壤充分混勻。每盆移入２～４葉期番茄苗１株，將線蟲卵懸液澆于番茄根部。試驗(yàn)共５個(gè)處理：天南星＋線蟲卵５ ０００個(gè)（ＴＮＸ）、半夏＋線蟲卵５ ０００個(gè)（ＢＸ）、商陸＋線蟲卵
　　５ ０００個(gè)（ＳＬ）、對(duì)照１無中藥材僅線蟲卵５ ０００個(gè)（ＣＫ＋Ｎ）、對(duì)照２不接種線蟲不用中藥材（ＣＫ），每處理２０盆。３個(gè)重復(fù)。接種后１５、３０、４５、６０ ｄ取土樣，采用烘干法測定土壤含水量［２］，折算干土質(zhì)量。同時(shí)采用淘洗過篩重糖離心法收集土壤線蟲，６０ ℃水浴殺死，用ＴＡＦ固定液固定［３］。在Ｏｌｙｍｐｕｓ光學(xué)顯微鏡和Ｍｏｔｉｃ體視解剖鏡下進(jìn)行土壤線蟲的計(jì)數(shù)和鑒別，土壤中線蟲數(shù)折算為１００ ｇ干土中所含線蟲數(shù)。接種后１５ ｄ和４５ ｄ進(jìn)行土壤樣品中線蟲的鑒別。接種后３０、４５、６０ ｄ測定番茄植株的地上和地下部分的鮮重和干重。
　�。保�３中藥材殺蟲活性檢測
　�。保�３．１供試線蟲清水洗凈感染南方根結(jié)線蟲的番茄植株根，解剖鏡下挑取卵囊，卵囊用０．２％次氯酸鈉溶液消毒３ ｍｉｎ，無菌水沖洗５次，無菌水中孵化，２齡幼蟲用于毒力測定。
　　１．３．２中藥材提取液稱取各種中藥材１０ ｇ溶于１００ ｍＬ甲醇∶乙醇體積比１∶１的混合液中，２６ ℃浸泡４８ ｈ后抽濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)甲醇和乙醇獲提取物，用無菌水稀釋成０．０５、０．５、５ ｇ／Ｌ提取液，置于４ ℃冰箱備用。
　　１．３．３毒殺試驗(yàn)配制每１５０ μＬ含３０條南方根結(jié)線蟲的線蟲懸浮液。在酶聯(lián)板加樣孔中每孔加１５０ μＬ線蟲懸浮液后加１５０ μＬ的各濃度提取物稀釋液，以清水為對(duì)照，每處理２個(gè)重復(fù)，檢查２４ ｈ和４８ ｈ后的存活情況，記錄死亡線蟲條數(shù)。線蟲死亡率＝死亡線蟲數(shù)／供試線蟲數(shù)×１００％，線蟲校正死亡率＝（處理線蟲死亡率－對(duì)照線蟲死亡率）／（１－對(duì)照線蟲死亡率）×１００％。

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