不同規(guī)格鹿茸商品藥材中氨基酸含量分析

　　[摘要] 目的：測定不同規(guī)格鹿茸商品藥材中氨基酸的含量，從氨基酸含量方面對不同規(guī)格鹿茸進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　方法：采用柱前衍生化法，利用氨基酸自動分析儀對樣品中18種氨基酸含量進(jìn)行測定。
　　結(jié)果：18種氨基酸線性方程r均大于0.997，平均回收率均在99.1%～108.1%，RSD均小于2.0%；39個不同品種規(guī)格鹿茸藥材中均含有17種氨基酸及7種人體必需氨基酸，臘片氨基酸含量較高，頭茬茸較二茬茸氨基酸含量高，與傳統(tǒng)分類相一致。
　　結(jié)論：該方法可用于鹿茸藥材氨基酸含量測定及質(zhì)量控制。
　　[關(guān)鍵詞] 鹿茸；氨基酸；含量測定
　　鹿茸Cornu Cervi Pantotrichum為鹿科動物梅花鹿Cervus nippon Temminck或馬鹿C. elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，具有壯腎陽，益精血，強筋骨，調(diào)沖任，托瘡毒的功效^[1]。由于鹿茸的商品藥材可按采收時間（頭茬茸、二茬茸）、生長年限（二杠、單門、三岔、蓮花、四岔等）、藥用部位（主枝、側(cè)枝）、飲片切制的部位（臘片、粉片、紗片和骨片）、加工過程（排血、不排血）等不同方面分為若干等^[2]，市場上鹿茸的規(guī)格多達(dá)40余種。在鹿茸所含的各類成分中氨基酸是其主要且含量較高的成分，近年來對于鹿茸不同規(guī)格的藥材氨基酸含量的測定也有所報道^[3-6]，但都是針對規(guī)格的某一個方面，為有效控制鹿茸不同規(guī)格藥材的質(zhì)量，本實驗收集了39個不同規(guī)格的鹿茸藥材，利用氨基酸自動分析儀，采用柱前衍生化法對其中的18種氨基酸含量進(jìn)行了測定，以期從氨基酸含量方面對鹿茸商品藥材的規(guī)格劃分及質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。
　　1 材料
　　1.1 儀器
　　P230Ⅱ氨基酸自動分析儀，UV230Ⅱ紫外-可見檢測器，P230Ⅱ高壓恒流泵，QT-330色譜柱溫箱，EC2006色譜數(shù)據(jù)處理工作站（大連依利特分析儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；AR2140電子分析天平（METTLE公司）；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）。
　　1.2 試劑
　　Elite-AAK氨基酸對照品[天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、絲氨酸（Ser）精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、蘇氨酸（Thr）、脯氨酸（Pro）、丙氨酸（Ala）、纈氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、半胱氨酸（Cys）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）色氨酸（Trp）苯丙氨酸（Phe）、組氨酸（His）、賴氨酸（Lys）每種5 mg，酪氨酸（Tyr）2.5 mg]；氨基酸衍生化試劑（2，4-二硝基氟苯）；衍生緩沖溶液固體組分A、衍生緩沖溶液固體組分B、平衡緩沖溶液固體組分A、平衡緩沖溶液固體組分B、流動相固體組分B（以上試劑均由大連依利特分析儀器有限公司提供）；乙腈為色譜純（Oceanpak Alexative Chemical公司） ；水為超純水，其他試劑均為分析純。
　　1.3 藥材
　　39個不同規(guī)格的鹿茸商品藥材分別購于各藥材市場，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定分別為鹿科動物梅花鹿C. nippon或馬鹿C. elaphus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，見表1。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件
　　色譜柱為依利特公司氨基酸分析專用ODS柱及保護(hù)柱；流動相A為乙腈-水（1∶1），流動相B相按依利特公司試劑說明配制，二元梯度洗脫；總流速 1.2 mL·min^-1；柱溫 27 ℃；檢測波長 360 nm；進(jìn)樣量 10 μL；梯度洗脫程序見表2。
　　2.2 溶液配制
　　衍生緩沖溶液、平衡緩沖溶液按試劑說明配置。
　　2.3 對照品溶液的制備
　　將Elite-AAK氨基酸對照品用衍生緩沖溶液定容至250 mL量瓶中，4 ℃冷藏，備用。
　　2.4 供試品溶液的制備
　　分別取表1中樣品粉末約0.04 g（過40目篩），精密稱定，置于10 mL具塞試管中，加入5 mL 6 mol·L^-1鹽酸，放入烘箱中110 ℃水解24 h。將水解后樣品多次用水洗滌轉(zhuǎn)入蒸發(fā)皿，80 ℃水浴蒸干。用衍生緩沖溶液多次洗滌蒸發(fā)皿，洗液轉(zhuǎn)入25 mL量瓶中，并用衍生緩沖溶液定容。過濾，備用。
　　2.5 對照溶液品和供試品溶液的衍生化
　　精密量取 2.4項下供試品溶液2 mL和3 mL衍生緩沖溶液置25 mL棕色量瓶中，或取對照品溶液5 mL置25 mL棕色量瓶中，分別加入2.5 mL衍生化試劑，混勻，用封口膜封口。放入60 ℃水浴中，暗處反應(yīng)60 min。反應(yīng)完畢，取出冷卻至室溫，用平衡緩沖溶液稀釋至刻度，靜置15 min，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。
　　2.6 方法學(xué)考察
　　2.6.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取 2.5項下對照品溶液5，8，10，15，20 μL注入氨基酸自動分析儀，按 2.1項下色譜條件測定峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程，見表3。
　　2.6.2 精密度試驗 取同一份樣品供試液，按 2.5項下方法制備，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10 μL，分別測定峰面積，結(jié)果18種氨基酸峰面積RSD均小于2.4%。
　　2.6.3 重復(fù)性試驗 精密稱取同一供試樣品5份，
　　每份0.04 g，按 2.4，2.5項下方法制備成供試品溶液，精密吸取10 μL，在上述色譜條件下進(jìn)樣測定峰面積并分別計算18種氨基酸含量，結(jié)果18種氨基酸含量的RSD均小于1.6%。

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