中藥材秦艽主要吸收成分群研究

　　[摘要] 該研究通過制備大鼠外翻腸囊模型，并對其轉(zhuǎn)運(yùn)活性進(jìn)行了確認(rèn)，以秦艽中的馬錢苷酸、當(dāng)藥苦苷、龍膽苦苷、以及當(dāng)藥苷為檢測指標(biāo)，用HPLC對經(jīng)腸囊主動轉(zhuǎn)運(yùn)吸收后被吸收進(jìn)入漿膜層的秦艽提取物中的主要成分群進(jìn)行了分析，探討了中藥材主要吸收成分群的研究方法。結(jié)果表明所采用的大鼠外翻腸囊模型，在實(shí)驗(yàn)45 min內(nèi)，組織結(jié)構(gòu)完整，轉(zhuǎn)運(yùn)活性良好；HPLC的專屬性和線性關(guān)系良好，精密度的RSD<5.5%；樣品的萃取回收率均在90%以上；在室溫條件下，樣品的穩(wěn)定性良好。秦艽提取物經(jīng)腸囊主動轉(zhuǎn)運(yùn)后，在漿膜液樣品中，檢測到了8種主要成分；提取物的濃度對主要成分的吸收具有極其顯著影響，而不同腸段對主要成分吸收的影響沒有顯著差異。由此可見，大鼠外翻腸囊技術(shù)可用于某些中藥材的吸收成分群的研究，是一種探討中藥材活性成分的有效方法。
　　[關(guān)鍵詞] 中藥材；秦艽；外翻腸囊；HPLC；吸收成分群
　　[收稿日期] 2013-06-04
　　[基金項(xiàng)目] 國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2009ZX09308-003，2009ZX09301-005，2009ZX09502-021）；中央級公益性科研究院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（22070833）
　　[通信作者] 朱晶晶，E-mail：zhujj15@163.com
　　中醫(yī)藥是我國傳統(tǒng)文化的瑰寶，長期中藥研究實(shí)踐表明中藥具有成分眾多、作用機(jī)制復(fù)雜的特點(diǎn)。如何從紛雜的成分中甄別主要有效成分，是中藥臨床實(shí)踐中不可或缺的一個(gè)關(guān)鍵步驟。基于中藥材可能存在著化學(xué)成分群>>吸收成分群>有效成分群的原則，中藥材經(jīng)胃腸道消化，并通過小腸吸收后的成分群將會直接影響著中藥材的臨床效果，因此，對于經(jīng)口服方式發(fā)揮作用的中藥來說，其消化性是決定該中藥臨床療效的前提和基礎(chǔ)，而對該中藥經(jīng)小腸吸收后的主要成分的定性、定量研究，是值得借鑒的中藥材有效成分研究和評價(jià)的方法。本研究采用大鼠外翻腸囊（everted gut sac， EGS）模型[1-2]，并對腸囊的轉(zhuǎn)運(yùn)活性進(jìn)行了確認(rèn)；以中藥材秦艽為研究對象，以其中的馬錢苷酸、當(dāng)藥苦苷、龍膽苦苷、和當(dāng)藥苷為監(jiān)測指標(biāo)，用HPLC對秦艽提取物經(jīng)空腸和回腸腸段主動轉(zhuǎn)運(yùn)吸收后，進(jìn)入漿膜層一側(cè)樣品中的主要成分進(jìn)行了分析，指認(rèn)了吸收成分群中的部分主要成分。研究結(jié)果表明，大鼠外翻腸囊模型可以用來作為中藥材吸收成分群研究與評價(jià)的有效方法。
　　1 材料
　　Wistar大鼠，雄性，體重（200±20）g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供。合格證號SCXK-（京） 2009-0017，上述動物均以標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料飼養(yǎng)。
　　Agilent1260高效液相色譜系統(tǒng)（包括四元泵、柱溫箱、自動進(jìn)樣器、DAD檢測器和Agilent ChemStation 工作站，Agilent公司）；Agilent6320 HPLC-MS質(zhì)譜儀（Agilent公司）；BF-2000氮吹儀，PSAN-8氮?dú)獍l(fā)生器（北京中惠普分析技術(shù)研究所）；混合氧氣瓶（95%O₂，5%CO₂）。
　　氯化鉀，氯化鈉，碳酸氫鈉，磷酸二氫鈉，葡萄糖，氯化鎂，氯化鈣（分析純，北京化學(xué)試劑公司），乙腈（色譜純，Dikma公司），甲醇（色譜純，Dikma公司），純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司），乙酸（分析純，北京化工廠）。
　　對照品龍膽苦苷（gentiopicroside，110770-201013）、當(dāng)藥苷（sweroside，111742-200501）、馬錢苷酸（loganic acid，110770-201013），由中國食品藥品檢定研究院提供。當(dāng)藥苦苷（swertiamarian），由成都普思生物科技有限公司提供，純度均大于98%。
　　秦艽（QinJiao， Genitana Macrophyllae Radix， GMR）藥材，購自甘肅省天水，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)吳立宏副研究員鑒定為Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.的干燥根，符合《中國藥典》（2010年版）秦艽項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)容。
　　2 方法
　　2.1 樣品制備
　　2.1.1 臺氏液的制備 分別精密稱取NaCl 8.0 g，KCl 0.28 g，NaHCO₃ 1.0 g，NaH₂PO₄ 0.05 g，MgCl₂ 0.1 g，溶于500 mL蒸餾水中，密閉冷藏；精密稱取CaCl₂ 0.2 g，溶于500 mL蒸餾水中，密閉冷藏；臨用前，在不斷攪拌下，將后者與前者均勻混合，加入葡萄糖 1.0 g，調(diào)節(jié)pH 7.4即得。
　　2.1.2 混合對照品溶液的制備 分別精密取各對照品，用甲醇制備成一系列不同濃度的混合對照品溶液，對每個(gè)濃度的對照品，分別取200 μL混合溶液，加入200 μL臺氏液；振蕩混勻后，用氮?dú)獯蹈�，�?00 μL甲醇，超聲溶解；移取上清液，用0.22 μm濾膜濾過，備用�；旌蠈φ掌啡芤褐�，各對照品的質(zhì)量濃度分別為馬錢苷酸（8.78，70.14，175.4，350.7，701.4 mg·L^-1）、當(dāng)藥苦苷（2.83，5.66，11.32，22.64，11.32 mg·L^-1）、龍膽苦苷（10.01，50.05，100.1，200.2，2 002 mg·L^-1）、當(dāng)藥苷（2.83，5.66，11.32，22.64，56.6 mg·L^-1）。
　　2.1.3 供試樣品的制備 將經(jīng)氮?dú)獯蹈珊蟮墓┰嚇悠罚��?00 μL甲醇，超聲5 min，溶解，移取上清液，用0.22 μm濾膜濾過，備用。
　　2.2 大鼠外翻腸囊模型構(gòu)建

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