余甘子葉藥材的HPLC指紋圖譜研究

　　[摘要] 目的 建立余甘子葉的指紋圖譜。 方法 采用高效液相色譜法測定，乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，流速1.0 ml/min，柱溫25℃，紫外檢測波長218 nm。 結(jié)果 余甘子葉中有15個共有峰被確定為指紋峰，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版》計算機軟件評價10批余甘子葉指紋圖譜的相似性，其結(jié)果均>0.9。 結(jié)論 該方法簡便，穩(wěn)定，精密度高，重現(xiàn)性好，可用于余甘子葉的鑒別，作為質(zhì)量控制方法。
　　[關(guān)鍵詞] 余甘子葉；高效液相色譜法；指紋圖譜
　　[中圖分類號] R284.1[文獻標識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）06（b）-0011-04
　　
　　Study on HPLC fingerprint analysis of Phyllanthus emblica L.
　　MAO Jian1 LIU Zhen-jie2▲
　　1.Department of Clinical medicine,People′s Hospital of Fuchuan County in Hezhou City of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Fuchuan 542700,China;2.Conservation Center,Guangxi Institute of Medicinal Plant,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530023,China
　　[Abstract] Objective To establish a method of fingerprint analysis on Phyllanthus emblica L. by HPLC. Methods The chromatographic finger-prints were obtained by HPLC.The detective wave-length was set at 218 nm;the flow rate was 1.0 ml/min and the column temperature was maintained at 25℃. Results 15 co-possessing peaks were selected as the fingerprint peaks of Phyllanthus emblica L. and good similarities with correlation coefficients higher than 0.9 were found in fingerprints between the different samples of Phyllanthus emblica L. and the standard fingerprint. Conclusion The method with good reproducibility is simple and accurate,it can be used as an effective quality control method for Phyllanthus emblica L.
　　[Key words] Phyllanthus emblica L.;High performance of liquid chromatography;Fingerprint
　　余甘子葉（Phyllanthus emblica L.）系大戟科（Euphorbiaceae）葉下珠屬（Phyllanthus）余甘子Phyllanthus emblical L.落葉小喬木或灌木的葉[1]，余甘子樹在我國資源豐富，收載于1978年版《藏藥標準》、1974年出版的《云南省藥品標準》和多版《中華人民共和國藥典》，別名有橄欖、滇橄欖、油甘子、山油甘、庵摩勒、牛甘子、喉甘子、楊甘等,余甘子果果實生食酸甜酥脆，初食味酸澀，后回味甘甜爽口，故名余甘[2]。余甘子味甘、酸、澀、性涼，具有化痰止咳，健胃消食，清熱生津，保肝解毒等功效[3]。主治感冒發(fā)熱、咳嗽、咽喉痛、白喉、煩熱口干、消化不良、腹痛、慢性肝炎、高血壓、肥胖癥、高脂血癥、濕熱性水腫、尿頻、血病、赤巴病、培根病、肝病、心臟病，以治療血熱血瘀引起的血病為長[4]。近年研究表明余甘子具有抗菌[5]、抗腫瘤[6]、抗氧化[7]、抗動脈粥樣硬化[8-9]、抗乙型肝炎病毒[10]、保肝[11]、增強免疫[12-13]等作用。余甘子有多種化學成分，藥理活性研究主要集中在多酚類成分上，槲皮素、沒食子酸為其有效成分[14-15]。本實驗對余甘子葉進行指紋圖譜研究，以期對其質(zhì)量控制和評價提供有效方法。
　　1 實驗材料
　　1.1 儀器
　　Agilent1100高效液相色譜儀；含在線真空脫氣機；高壓四元梯度泵；可變波長檢測器；二極管陣列檢測器Agilent1100；Series色譜工作站（美國安捷倫科技公司）；SB3200T超聲波清洗儀（上海能信超聲有限公司）；BP211D電子分析天平（德國賽多利斯）。
　　1.2 試劑
　　甲醇、乙腈為色譜純，乙酸乙酯、磷酸及其他試劑均為分析純。水為超純水。槲皮素對照品和沒食子酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（槲皮素對照品批號：110081-200406；沒食子酸對照品批號：110831-200302）。
　　1.3 藥材
　　實驗所用余甘子葉藥材于廣西各地及云南玉溪收集，產(chǎn)地和采收時間見表1，經(jīng)廣西中醫(yī)學院藥用植物教研室劉壽養(yǎng)副教授鑒定為余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥葉。
　　
　　表1 余甘子葉產(chǎn)地和批號
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 供試品溶液制備
　　取余甘子葉粗粉1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 ml，密塞，稱重量。靜置1 h，超聲30 min后放冷，補重，濾過，精密量取續(xù)濾液20 ml，揮干，殘渣用25 ml水溶解至分液漏斗中，加入乙酸乙酯振搖提取3次，每次25 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液為供試品溶液。
　　2.2 提取溶劑的考察
　　比較水、無水乙醇、甲醇等提取溶劑，結(jié)果表明以甲醇、無水乙醇提取時，所得的色譜圖中的色譜峰數(shù)較多；余甘子葉的現(xiàn)代研究表明，沒食子酸和槲皮素為余甘子葉的有效成分，所以以其沒食子酸和槲皮素含量計算，用甲醇為溶劑，藥材中沒食子酸和槲皮素提取較完全[16]。經(jīng)綜合考慮，選定提取溶劑為甲醇。
　　2.3 超聲時間的考察
　　樣品分別超聲20、30、40 min，結(jié)果表明，超聲的時間為30 min以上，以其沒食子酸和槲皮素含量計算，藥材提取較完全。故選定提取時間為超聲30 min。
　　2.4 色譜條件
　　色譜柱：Thermo Hypersil BDS C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫（表2）；柱溫25℃；檢測波長218 nm；進樣量5 μl。
　　
　　表2 流動相梯度洗脫程序
　　
　　
　　
　　
　　2.5 方法學考察
　　2.5.1 精密度試驗取批號為200701藥材，制備供試品溶液，連續(xù)進樣5次，各色譜峰的相對保留時間RSD<1.42%，相對峰面積RSD<2.94%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

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