多種藥材與制劑中大黃酚與大黃素含量測定改進方法

　　[摘 要]目的：改進大黃酚與大黃素的測定方法。方法：通過甲醇提取與酸水解同步進行，用高效液相色譜法簡便、快捷、準確地測定了多種藥材與制劑中大黃酚與大黃素含量。色譜條件為：sihmadzuvP一ODS C18l：（150mmx4.6mm，5μm）為色譜柱，甲醇一0.1%磷酸（85：15）為流動相，流速：1.0mL·min-1，檢測波長為254nm。結(jié)果：通過方法學考察，大黃酚的進樣量在0.022一0.32μg（r=0.9999），大黃素的進樣量在0.015一0.22μg（r=0.9999）范圍內(nèi)，呈良好的線性關系。大黃酚與大黃素的平均回收率（n=3）分別為96.10%一101.7%和96.75%一100.9%。結(jié)論：改進方法檢測效率高，檢測成本低，環(huán)境污染輕。
　　[關鍵詞]藥材；制劑；大黃酚；大黃素；改建方法
　　中圖分類號：U879 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）10-0356-01
　　傳統(tǒng)大黃酚與大黃素含量測定所選用的方法比較煩瑣，也浪費時間，同時還存在著比較大的誤差，因此需要對這兩種物質(zhì)含量測量進行改進，可以將甲醇、酸水等有機融合起來，不再進行氯仿萃取、蒸干的環(huán)節(jié)，此種方法不僅簡單，花費的時間也比較少，同時還不會受到溫度等因素的干擾。大量的實踐證明，應用改進后的方法來對上述兩種物質(zhì)進行含量測量，效果比較好，同時還能夠減少環(huán)境污染，為操作人員的生命健康也提供了一定的保證。
　　一、材料、儀器與試藥
　　痛風舒片（批號：050401，0.49·片-1）、碧云砂乙肝膠囊（批號：050711，0.59·粒-1）由承德燕峰藥業(yè)股份有限公司提供；三黃片（批號：0505201，0.259·片-1）為河北省藥品檢驗所留樣。藥用大黃（批號：120984一200301）、虎杖（批號：120980-200002）、決明子（批號：121011一20以03）藥材、大黃酚對照品（批號：96一200107）、大黃素對照藥品（批號：0756-200211）購自中國藥品生物制品檢定所。日本島津LC一IOADvp泵；SPD一Ml0ADvp二極管陣列檢測器；CLASS一VP/LC色譜工作站；美國77251手動進樣器。美國Waters2695分離單元；Waters2487雙波長紫外檢測器；Empower色一潛工作站。流動相所用的試劑為色譜純，其他試劑、試藥均為分析純。
　　二、實驗過程
　　1、溶液制備
　　1.1 制備對照品溶液
　　研究者要分別精確的稱取大黃酚與大黃素，充當對照品，再分別的添加一定量的甲醇，制成為1ml中含有0.4mg的溶液，而后稱取溶液添加90%甲醇，而后分別制成8μg/ml的大黃酚溶液、4μg/ml的大黃素溶液。
　　1.2 制備供試品溶液
　　研究者選擇專門工具進行準備稱取，放入到塞三角瓶中，而后再添加甲醇與鹽酸，兩者之間的比例為10：1，溶液整體整體為25ml，精確稱取重量，將溶液放入到80℃的水浴中，待到半個小時后，再放冷，如果瓶壁中存在黏附現(xiàn)象，采用超聲去除，再使用甲醇補足，以此保證最終重量不會受到影響，而后搖晃均勻，過濾，再吸收2ml濾液，將其放入到10ml量瓶中，再添加氫氧化鈉大約2%，體積為1ml，再添加甲醇直到制定刻度，而后搖晃均勻，過濾，再取濾液就獲得了供試品溶液。
　　2、線性范圍
　　研究者選擇精密儀器分別稱取對照品，之后再分別添加90%甲醇，制成10.8μg/ml的大黃酚與7.53μg/ml的混合溶液。將封面積看作是縱坐標，而將進樣量看作是橫坐標，以此繪制成為一個標準曲線。實踐發(fā)現(xiàn)，大黃酚進樣量保持在0.022-0.32μg之間，并且與峰面積保持著比較好的線性關系，大黃素的進樣量在0.015一0.22μg，與峰面積呈良好的線性關系。
　　3、穩(wěn)定性試驗
　　取各供試品溶液及“精密度試驗”項下的對照品溶液，分別于0，2，6，12，24h進樣測定，考察了24h內(nèi)的穩(wěn)定性。結(jié)果各供試品溶液中大黃酚峰面積的RSD為0.41%一0.57%，大黃素峰面積的RSD為0.24%一0.99%；對照品溶液中大黃酚峰面積的RSD為0.26%，大黃素峰面積的RSD為0.40%。說明供試品溶液與對照品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
　　4、重復性試驗
　　各樣品取樣量的80%，100%，120%，同一批樣品取9份，按上述方法制備溶液，按“2”項下色譜條件測定。各樣品9次測定的結(jié)果，見表1。說明方法重復性良好。
　　5、加樣回收率實驗
　　按上述方法各樣品取樣量的1/2，稱取已知含量的同一批樣品9份，平均分為3組，每組按此取樣量的樣品中大黃酚及大黃素含有量的60%，100%，140%添加對照品，照上述方法制備溶液測定，計算回收率。
　　6、樣品的測定
　　采用上述的樣品處理方法，制備各供試品溶液，按色譜條件進樣，采用外標法，計算各樣品含量，具體結(jié)果見表2。
　　三、討論
　　1、研究者選擇應用二極管陣列檢測器分別為大黃酚與大黃素進行光譜掃描，最終發(fā)現(xiàn)大黃酚共出現(xiàn)了3個吸收峰，分別為222nm，靈敏性最佳、254nm靈敏性次之、288nm子佛靈敏性最差等；大黃素共出現(xiàn)了4個吸收峰，分別為220nm，靈敏性最佳；288nm靈敏性次之；265nm靈敏性稍差；252nm靈敏性最差，另外大黃素的對照品以及樣品波峰非常相似，由于我國藥典記錄的波長也相同，基于此，研究者最終選擇254nm充當測定波長。
　　2、大黃酚與大黃素含量測定傳統(tǒng)方法如下：使用酸性比較強的甲醇水解，需要注意的是水解溫度要低于算酸水溫度。此種方法因為酚類很少被破壞，再加之還需要萃取與蒸干，因此從理論上講，此種方法測量更加符合現(xiàn)實。為了能夠讓溶液酸度控制在一定范圍內(nèi)，研究者將用于實驗試品溶液添加了一定量的堿液，PH值保持在3-4之間，使得大黃酚與大黃素始終都處于比較好的分子狀態(tài)，經(jīng)過經(jīng)驗色譜峰分離呈現(xiàn)出良好的態(tài)勢，而且峰形也比較對稱。
　　3、據(jù)統(tǒng)計我國223家廠家允許生產(chǎn)三黃片，而需要測定大黃等元素含量的廠家則達到了上千家，若這些廠家都能夠應用本文介紹的方法，不僅能夠減少有機試劑的使用，還能夠降低環(huán)境污染，對操作人員的身心健康也有一定的保證。
　　參考文獻
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