牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法

　　[摘要] 目的 建立全自動(dòng)定氮儀法測(cè)定牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量。方法 常量凱氏定氮法。結(jié)果 氮含量在0.256 2～3.843 0 mg范圍內(nèi)，與滴定液消耗體積呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；平均回收率為100.0%（n=9），RSD=1.1%。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法。
　　[關(guān)鍵詞] 牛髓；蛋白質(zhì)；含量測(cè)定
　　[中圖分類號(hào)] R248 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2017）12（b）-0136-02
　　[Abstract] Objective To test the protein content of ox spinal cord by the automatic nitrogen determination method. Methods Constant Kjeldahl determination was established. Results The nitrogen content was between 0.256 2 and 3.843 0 mg， showing a good liner correlation with the volumetric solution consumption volume r=0.999 9； and the average recycling rate was 100.0%（n=9）， RSD=1.1%. Conclusion The method is simple and accurate with good repeatability， which can be used as a measurement method of protein content of ox spinal cord.
　　[Key words] Ox spinal cord； Protein； Content measurement
　　牛髓為�？埔芭�屬動(dòng)物黃牛Bos taurus domesticus Gmelin或水牛屬動(dòng)物水牛Bubalus bubalis Linnaeus 的骨髓。牛髓，史載于《神農(nóng)本草經(jīng)》《本草綱目》等古代醫(yī)藥經(jīng)典著作，記載了該品的藥用功效，我國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥著作《中華本草》《中藥大辭典》《中國(guó)動(dòng)物藥資源》中均有記載該藥材，詳細(xì)描述了該品的來源、原形態(tài)、生境分布、化學(xué)成分、藥理作用、性味、歸經(jīng)、功能主治及用法用量。具有補(bǔ)血益精，止渴，止血，止帶之功效。常用于精血虧損，虛勞羸瘦，消渴，吐衄，便血，崩漏，帶下[1]。
　　現(xiàn)代研究表明，牛髓含有蛋白質(zhì)、脂肪、灰分、維生素B1、維生素BZ、尼克酸，其脂肪酸含月桂酸、肉豆酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸等。牛脊髓富含蛋白質(zhì)，氨基酸組成比豬肉更接近人體需要，能提高機(jī)體抗病能力，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育及術(shù)后，病后調(diào)養(yǎng)的人在補(bǔ)充失血、修復(fù)組織等方面特別適宜，寒冬食牛肉可暖胃，是該季節(jié)的補(bǔ)益佳品；牛脊髓有補(bǔ)中益氣，滋養(yǎng)脾胃，強(qiáng)健筋骨，化痰息風(fēng)，止渴止涎之功效，適宜于中氣下隱、氣短體虛、筋骨酸軟、貧血久病及面黃目眩之人食用；牛脊髓能安胎補(bǔ)神，能安中益氣、健脾養(yǎng)胃、強(qiáng)筋壯骨。
　　目前國(guó)內(nèi)具備批準(zhǔn)文號(hào)的3個(gè)中成藥品種血寶片、血寶膠囊、益血生膠囊處方中均含有該藥材，成藥品種均有完善的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但處方中牛髓藥材無現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及地方標(biāo)準(zhǔn)，無法控制藥材質(zhì)量，嚴(yán)重制約了該品種的深入開發(fā)。且牛髓本身為動(dòng)物鮮用組織，取用保存不當(dāng)，極易影響藥材質(zhì)量。企業(yè)急切期待制訂牛髓藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。完善該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，控制藥材質(zhì)量，才能更好地保證中成藥的質(zhì)量、保障人民用藥安全，同時(shí)也可為牛髓藥材的開發(fā)和廣泛應(yīng)用提供質(zhì)量保證。由于牛脊骨和腿骨均有髓腔，其中均有骨髓分布，有的企業(yè)以脊骨骨髓入藥，有的企業(yè)以腿骨骨髓入藥，由于基源記載中未規(guī)定骨髓來源，故二者均需作為研究對(duì)象。該文參照中國(guó)藥典氮測(cè)定法對(duì)其進(jìn)行了氮含量測(cè)定研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所建立方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可作為牛髓藥材蛋白質(zhì)含量的質(zhì)控方法。
　　1 儀器與試藥
　　FOSS 8400型自動(dòng)定氮儀；硫酸滴定液（0.005 mol/L，F(xiàn)值為 1.011）為購買后稀釋[精密量取硫酸滴定液（0.05 mol/L，F(xiàn)值為1.011）100 mL，置1 000 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻]；硫酸銨（來源：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，純度：99.95%～100.05%，基準(zhǔn)試劑）硫酸為分析純，消化劑為FOSS公司提供。牛髓藥材為自行購買，分別購自長(zhǎng)春、內(nèi)蒙、延邊、吉林地區(qū)。
　　2 測(cè)定方法
　　供試品溶液的制備：取本品0.1 g，精密稱定，置消化管中，分別加硫酸3 mL，消化劑0.6 g，置消化爐上，420℃消化，至溶液呈澄明的的綠色后，繼續(xù)加熱10 min，放冷，備用。
　　測(cè)定法：將盛已消化樣品的凱氏定氮瓶安裝在定氮儀上，加40%氫氧化鈉溶液30 mL，硼酸吸收液30 mL，水30 mL，進(jìn)行自動(dòng)蒸餾和滴定。并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。
　　3 方法驗(yàn)證
　　3.1 耐用性考察
　　供試品溶液制備方法的選擇參考中國(guó)藥典2015年版四部[2]氮測(cè)定法，對(duì)供試品制備條件進(jìn)行篩選：取本品（批號(hào)20170225）0.1 g，4份，精密稱定，置消化管中，分別加硫酸10 mL、5 mL、3 mL、2 mL，分別加消化劑0.6 g，置消化爐上，420℃消化，依法測(cè)定。結(jié)果見表1，顯示測(cè)定結(jié)果與加硫酸量無顯著差異，不同硫酸用量均能夠完全消化樣品，該法采用加酸量為5 mL。
　　3.2 專屬性考察
　　取空白管同法消化、測(cè)定，作為陰性對(duì)照（定氮儀測(cè)定時(shí)自動(dòng)扣除空白）。
　　3.3 線性關(guān)系考察
　　精密稱取硫酸銨0.120 9 g（含氮為25.62 mg），置100 mL容量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1、3、5、7、10、15 mL，置于全自動(dòng)定氮儀上進(jìn)行蒸餾滴定，以氮含量（mg）為橫坐標(biāo)，滴定液消耗量為縱坐標(biāo)計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表2。結(jié)果表明氮含量在0.256 2～3.843 0 mg范圍內(nèi)，與滴定液消耗體積呈良好的線性關(guān)系。
　　3.4 重復(fù)性考察
　　精密稱取樣品0.08、0.10、0.12 g，每個(gè)濃度取3份，照上述方法獨(dú)立制備9份供試品，分別測(cè)定結(jié)果見表3，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。
　　3.5 回收率試驗(yàn)
　　精密稱取供試品0.05g，共稱9份，精密加入硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液（每1豪升含氮0.712 mg）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL各3份，照上述方法測(cè)定，計(jì)算方法回收率，結(jié)果顯示該方法加樣回收率較好，見表4。
　　3.6 樣品測(cè)定
　　精密稱取供試品0.1 g，照上述方法分別測(cè)定12批牛髓樣品蛋白質(zhì)含量，結(jié)果見表5。
　　4 討論
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用全自動(dòng)常量凱氏定氮法，測(cè)定牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量。方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，并且樣品中的油脂等其他成分不影響測(cè)定結(jié)果，可作為牛髓藥材中蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測(cè)定方法。
　　[參考文獻(xiàn)]
　　[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[S].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006：403.
　　[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2015年版四部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：88.
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