免疫室SOP作業(yè)指導(dǎo)書

　1

　主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗原定量測定

　一、目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗原 測定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，確保 乙型肝炎病毒表面

　抗原 測定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。

　二、適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

　表面抗原 。

　三、臨床意義

　 乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據(jù)估計全球范圍內(nèi)目前

　大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝

　臟疾病，流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細(xì)胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。

　HBsAg 是乙肝病毒顆粒（HBV）的外殼成分，為大小不一的多肽。感染乙

　型肝炎病毒后，機(jī)體會產(chǎn)生各種不同模式的抗原、抗體血清學(xué)免疫應(yīng)答反應(yīng)。

　通過檢測這些標(biāo)志物，不僅可以診斷感染，而且還可以判斷疾病的進(jìn)程和預(yù)

　后。HBsAg 是 HBV 感染后第一個標(biāo)志物，是提示樣本是否有潛在傳染性的最

　好的間接指標(biāo)。

　四、方法原理

　 本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進(jìn)行檢測。用抗-HBs 抗體包被磁微粒，用

　辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗-HBs 抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗體-

　抗原-抗體-酶復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與 HBsAg

　含量成正比。

　五、標(biāo)本的采集與處理

　5.1.

　采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣

　 本，離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離

　 心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使

　 用抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min�？鼓�管推薦使用

　 肝素作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

　 5.2.

　樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣

　本未變質(zhì)方可使用。

　2

　 5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。

　 5.4.

　樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

　本放置在 2~8℃的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運(yùn)輸，則應(yīng)凍存于

　-20℃以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。

　 5.5.避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。

　六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

　1）嚴(yán)重溶血、脂血

　2）標(biāo)本標(biāo)識不明

　七、儀器與材料

　7.1.儀器：AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀

　 7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗原 試劑

　7.2.1.試劑準(zhǔn)備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。

　 7.2.2.試劑盒于 2～8℃儲存，有效期 12 個月。

　 7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強(qiáng)光照射。

　 7.2.4.試劑盒開啟使用后，2～8℃保存可使用 1 個月。

　 7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸，運(yùn)輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

　7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性

　7.2.6.1. 試劑包（磁微�；鞈乙骸⒚附Y(jié)合物）豎直向上存放，

　 在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機(jī)使

　 用。首次使用后，機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

　 為 28 天。

　 7.2.6.2. 校準(zhǔn)品開瓶后保存于2~8°C，穩(wěn)定期可維持1個月；

　若需使用更長時間，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝，于-20℃

　凍存（可以保存2個月），但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　八、檢驗(yàn)方法

　8.1. 消耗品檢查：

　 8.1.1.

　根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

　 8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　3

　 8.2. 試劑包裝載：

　 8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

　 份，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

　 8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

　 8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。

　 8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.3. 測試：

　8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 150µl。

　8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

　8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開始測試，系統(tǒng)自動進(jìn)行試驗(yàn)操作。

　8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　8.4. 定標(biāo)：

　8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

　8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。

　8.4.3. 將校準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。

　8.4.4. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標(biāo)信息。

　8.4.5. 選擇“運(yùn)行”開始測試，生成定標(biāo)曲線。

　8.4.6. 定標(biāo)曲線有效期為 28 天。

　8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行定標(biāo)曲線的重新生成：

　8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；

　8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；

　8.4.8.3. 超出定標(biāo)曲線的有效期限；

　8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。

　8.5. 質(zhì)控：

　 8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。

　 8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控：

　8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時；

　8.5.2.2. 更換新的試劑盒；

　4

　8.5.2.3. 重新生成定標(biāo)曲線；

　8.5.2.4. 停機(jī)。

　8.5.3. 各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍，以確

　保合適的測試性能。

　8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。

　 8.6. 稀釋

　 8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為

　 1:100。

　 8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，將得到的檢測結(jié)果

　 乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。

　8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，參考相應(yīng)的儀

　 器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。

　8.6.4. 稀釋后的樣本含量應(yīng)不低于 0.05IU/ml。

　8.7.結(jié)果計算：

　 選擇適當(dāng)?shù)那�線擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式，以校

　準(zhǔn)品濃度值為 x 軸，以校準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度 log 值為 y 軸建立定標(biāo)曲線。根據(jù)

　待測樣本的發(fā)光強(qiáng)度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過存儲

　的定標(biāo)曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結(jié)果。

　九、參考范圍

　檢測 1040 例樣本，用 ROC 曲線方法確定正常參考值為＜0.05IU/ml；

　 建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒

　 僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。

　十、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

　 10.1.

　用本試劑盒檢測結(jié)果濃度值為 0.04～0.06IU/ml 的弱反應(yīng)性可疑樣本，

　 建議復(fù)孔重新測定，如果雙孔復(fù)查濃度值均小于 0.05IU/ml，結(jié)果判為

　 陰性，如果單份或雙份測定不低于 0.05IU/ml，結(jié)果判為有反應(yīng)性，有

　 條件的實(shí)驗(yàn)室建議做中和確證實(shí)驗(yàn)，同時動態(tài)觀察。

　10.2. 本試劑盒測定范圍為 0.05～250IU/ml，濃度值大于 250IU/ml 的樣本，

　其結(jié)果是通過定標(biāo)曲線外延得出的計算結(jié)果。如果要獲得其更準(zhǔn)確的結(jié)

　5

　果，需對樣本進(jìn)行稀釋后重新測定，推薦稀釋比例為 1/500，使用系統(tǒng)

　通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增

　大稀釋比例。

　10.3. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣

　本進(jìn)行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果

　不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在檢測報

　告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應(yīng)進(jìn)行

　額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線

　值。

　十一、檢驗(yàn)方法的局限性

　 11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史

　及其他檢測相結(jié)合。

　11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適合

　用本試劑盒進(jìn)行檢測。

　11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

　十二、產(chǎn)品性能特征

　 12.1. 陰性參考品符合率：檢測國家陰性參考品 20 份，不出現(xiàn)假陽性。

　12.2.

　陽性參考品符合率：檢測國家陽性參考品 3 份，不出現(xiàn)假陰性。

　 12.3. 最低檢出量：用國家靈敏度參考品進(jìn)行檢測，符合相應(yīng)參考品要求。

　12.4. 精密性：10 孔平行檢測濃度值為 0.5IU/ml 樣本，CV%≤15.0%；10

　孔平行檢測濃度值為 1.5IU/ml 樣本，CV%≤10.0%。

　12.5. 線性：在 0.05IU/ml～250IU/ml 范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)（r）不低于

　 0.9900。

　12.6. 分析特異性：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無

　交叉反應(yīng)。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和

　500mg/dl 膽固醇對檢測結(jié)果無顯著干擾。

　 十三、參考文獻(xiàn)

　1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.

　Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

　 2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and

　6 current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:

　97-107.

　 3.巴德年,1998 年.當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用.北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)

　 合出版社.

　 4.陶義訓(xùn), 1997 年第二版,免疫學(xué)與免疫學(xué)檢驗(yàn).人民衛(wèi)生出版社.

　 5.中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會. 病毒性肝炎防治方案. 中華傳染病雜志, 2001, 19:56-62.

　 主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗體定量測定

　一、 目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗體 測定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，確保 乙型肝炎病毒表面

　抗體 測定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。

　二、 適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

　表面抗體 。

　三、臨床意義

　 乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據(jù)估計全球范圍內(nèi)目前

　大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝

　臟疾病，流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細(xì)胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。

　表面抗體(Anti-HBs)是一種保護(hù)性抗體，是乙肝感染后痊愈或趨向治愈

　的象征；全程（3 針）疫苗接種結(jié)束后 1 個月檢測保護(hù)性表面抗體(Anti-HBs)

　的濃度，能夠判定免疫效果。關(guān)于表面抗體與保護(hù)力的關(guān)系，世界標(biāo)準(zhǔn)未完

　全統(tǒng)一，目前普遍認(rèn)為普通人群表面抗體濃度值≥10mIU/ml，就有足夠的保

　護(hù)作用；高危人群表面抗體濃度值≥100mIU/ml，具有足夠的保護(hù)作用。肝

　移植、血液透析及免疫抑制等病人定期檢測表面抗體濃度值，每次檢測值≥

　100mIU/ml 為宜。

　四、方法原理

　7

　 本產(chǎn)品采用雙抗原夾心法原理進(jìn)行檢測。用表面抗原包被磁微粒，用辣

　根過氧化物酶標(biāo)記表面抗原制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗原-抗體-酶

　標(biāo)抗原復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與表面抗體的含

　量成正比。

　五、標(biāo)本的采集與處理

　5.1.

　采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣

　 本，離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離

　 心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使

　 用抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min�？鼓�管推薦使用

　肝素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

　5.2.

　樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣

　 本未變質(zhì)方可使用。

　 5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。

　5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

　本放置在 2~8℃的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運(yùn)輸，則應(yīng)凍存于

　-20℃以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。

　六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

　1）嚴(yán)重溶血、脂血

　2）標(biāo)本標(biāo)識不明

　七、儀器與材料

　7.1.儀器：

　適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀。

　7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗體 試劑

　7.2.1.試劑準(zhǔn)備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。

　 7.2.2.試劑盒于 2～8℃儲存，有效期 12 個月。

　 7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強(qiáng)光照射。

　 7.2.4.試劑盒開啟使用后，2～8℃保存可使用 1 個月。

　 7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸，運(yùn)輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

　7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性

　7.2.6.1. 試劑包（磁微粒混懸液、酶結(jié)合物）豎直向上存放，

　8

　 在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機(jī)使

　 用。首次使用后，機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

　 為 28 天。

　7.2.6.2. 校準(zhǔn)品開瓶后保存于2~8°C，穩(wěn)定期可維持1個月；若

　 需使用更長時間，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝，于-20℃凍

　存（可以保存2個月），但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　八、檢驗(yàn)方法

　 8.1. 消耗品檢查：

　8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

　8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.2. 試劑包裝載：

　8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

　份，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

　8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

　8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。

　8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.3. 測試：

　8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 50µl。

　8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

　8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開始測試，系統(tǒng)自動進(jìn)行試驗(yàn)操作。

　8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　8.4. 定標(biāo)：

　8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

　8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。

　8.4.3. 將校準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。

　8.4.4. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標(biāo)信息。

　8.4.5. 選擇“運(yùn)行”開始測試，生成定標(biāo)曲線。

　8.4.6. 定標(biāo)曲線有效期為 28 天。

　8.4.7.

　參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　9

　8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行定標(biāo)曲線的重新生成：

　 8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；

　8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；

　8.4.8.3. 超出定標(biāo)曲線的有效期限；

　8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。

　8.5. 質(zhì)控：

　 8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。

　 8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控：

　 8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時；

　 8.5.2.2. 更換新的試劑盒；

　 8.5.2.3. 重新生成定標(biāo)曲線；

　 8.5.2.4.

　停機(jī)。

　 8.5.3. 各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍，以確保

　 合適的測試性能。

　 8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。

　 8.6. 稀釋

　 8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為

　1:100。

　 8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，將得到的檢測結(jié)果

　 乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。

　8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，參考相應(yīng)的儀

　 器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。

　8.6.4. 稀釋后的樣本含量應(yīng)不低于 5mIU /ml。

　8.7.結(jié)果計算：

　 選擇適當(dāng)?shù)那�線擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式，以校

　準(zhǔn)品濃度值為 x 軸，以校準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度 log 值為 y 軸建立定標(biāo)曲線。根據(jù)

　 待測樣本的發(fā)光強(qiáng)度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過存儲

　的定標(biāo)曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結(jié)果。

　九、參考范圍

　10

　正常參考值：＜10mIU/ml

　 建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒

　僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。

　十、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

　 10.1.

　用本試劑盒檢測結(jié)果濃度值為 8.0～12.0 mIU/ml 的弱反應(yīng)性可疑樣

　 本，建議雙份重新測定，如果雙份復(fù)查濃度值均小于 10 mIU/ml，結(jié)果

　 判為陰性，如果單份或雙份測定不低于 10 mIU/ml，結(jié)果判為陽性，同

　 時建議動態(tài)觀察。

　10.2. 本試劑盒測定范圍為 5～1000mIU/ml，濃度值大于 1000mIU/ml 的樣本，

　其結(jié)果是通過定標(biāo)曲線外延得出的計算結(jié)果。如果要獲得其更準(zhǔn)確的結(jié)

　果，需對樣本進(jìn)行稀釋后重新測定，推薦稀釋比例為 1/100，使用系統(tǒng)

　通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增

　大稀釋比例。

　10.3. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣

　本進(jìn)行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果

　不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在檢測報

　告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應(yīng)進(jìn)行

　額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線

　值。

　十一、檢驗(yàn)方法的局限性

　 11.1.

　本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病

　 史及其他檢測相結(jié)合。

　11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適合

　用本試劑盒進(jìn)行檢測。

　11.3.

　溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

　 十二、產(chǎn)品性能特征

　12.1.

　符合率：與 SFDA 批準(zhǔn)的試劑平行檢測 1024 份臨床樣本，陰性符合率

　99.58%，陽性符合率 99.02%，總符合率 99.41%。

　 12.2.

　最低檢出限：≤10mIU/ml。

　11

　 12.3.

　精密性：10 孔平行檢測濃度值為 10mIU/ml 樣本，CV%≤15.0%；10 孔

　平行檢測濃度值為 100mIU/ml 樣本，CV%≤10.0%。

　 12.4. 線性：在 5～1000mIU/ml 范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)（r）不低于 0.9900。

　 12.5. 分析特異性：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無交叉

　 反應(yīng)。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、10g/L 甘油三酯和 500mg/dl

　 膽固醇對檢測結(jié)果無顯著干擾。

　 12.6. HOOK 效應(yīng)：測定 HBsAb 濃度值為 30000mIU/ml 的樣本，未出現(xiàn) HOOK

　 效應(yīng)引起的假陰性結(jié)果。

　十三、參考文獻(xiàn)

　1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.

　 Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

　 2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and

　current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:

　97-107.

　 3.巴德年,1998 年.當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用.北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)

　 合出版社.

　 4.陶義訓(xùn), 1997 年第二版,免疫學(xué)與免疫學(xué)檢驗(yàn).人民衛(wèi)生出版社.

　 5.中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會. 病毒性肝炎防治方案.

　 主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗原 定量測定

　一、 目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗原 測定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，確保 乙型肝炎病毒 e 抗原

　 測定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。

　二、 適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

　e 抗原 。

　三、臨床意義

　 乙型肝炎病毒 e 抗原（HBeAg），一般通稱 e 抗原。它來源于乙型肝炎病

　毒的核心，是核心抗原的亞成分，或是核心抗原裂解后的產(chǎn)物，是可溶性蛋

　白 [1] 。當(dāng)核心抗原裂解時，可溶性蛋白部分（即 e 抗原）就溶于血清中，存

　12

　在于血液循環(huán)中。有研究表明，在 PegIFNα2a 治療過程中，HBeAg 水平對乙

　肝治療應(yīng)答有較好的預(yù)測價值 [2] 。許多專家關(guān)注聚乙二醇干擾素治療過程中

　HBeAg 或 HBsAg 濃度的動態(tài)變化，認(rèn)為這種量的變化往往是抗原消失或血

　清轉(zhuǎn)換的前提，具有療效預(yù)測作用。對于乙肝治療過程中 HBeAg 和 HBsAg

　濃度明顯下降的患者應(yīng)鼓勵繼續(xù)治療，以爭取獲得更好的療效 [3] 。

　四、 方法原理

　本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進(jìn)行檢測。用抗-HBe 制備磁微粒，辣根過

　氧化物酶標(biāo)記抗-HBe 制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體

　復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物液發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與 HBeAg 的含量成正

　比。

　五、標(biāo)本的采集與處理

　5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣

　本，離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離心

　前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使用

　抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min。抗凝管推薦使用肝

　素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

　 5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)離心除去。

　 5.3. 嚴(yán)重溶血、脂血或渾濁的樣本不能用于測定。

　5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

　本放置在 2~8℃的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運(yùn)輸，則應(yīng)采用正確

　離心條件提取血清或血漿凍存于-20℃以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)

　到室溫，輕輕搖動混勻。

　六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

　1）嚴(yán)重溶血、脂血

　2）標(biāo)本標(biāo)識不明

　七、儀器與材料

　 7.1.儀器：

　適用于 Lucy2、Lumo、AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀。

　 7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗原 試劑

　7.2.1.試劑準(zhǔn)備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。

　 7.2.2.試劑盒于 2～8℃儲存，有效期 12 個月。

　13

　 7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強(qiáng)光照射。

　 7.2.4.試劑盒開啟使用后，2～8℃保存可使用 1 個月。

　 7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸，運(yùn)輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

　7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性

　 7.2.6.1. 試劑包（磁微�；鞈乙骸⒚附Y(jié)合物）豎直向上存放，

　在 2~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機(jī)使

　用。首次使用后，機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

　為 28 天。

　 7.2.6.2. 要進(jìn)行分裝，于-20℃凍存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　八、檢驗(yàn)方法

　 8.1. 消耗品檢查：

　 8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

　 8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.2. 試劑包裝載：

　 8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

　 分，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

　 8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

　 8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。

　 8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.3. 測試：

　 8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 50µl。

　 8.3.2.

　裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

　 8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開始測試，系統(tǒng)自動進(jìn)行試驗(yàn)操作。

　 8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　8.4. 定標(biāo)：

　 8.4.1.

　儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

　 8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。

　 8.4.3. 將校準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。

　 8.4.4. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標(biāo)信息。

　14

　 8.4.5. 選擇“運(yùn)行”開始測試，生成定標(biāo)曲線。

　 8.4.6. 定標(biāo)曲線有效期為 28 天。

　 8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行定標(biāo)曲線的重新生成：

　 8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；

　 8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；

　 8.4.8.3. 超出定標(biāo)曲線的有效期限；

　 8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。

　8.5. 質(zhì)控：

　8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。

　 8.5.2.

　出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控：

　8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時；

　8.5.2.2.

　更換新的試劑盒；

　8.5.2.3. 重新生成定標(biāo)曲線；

　8.5.2.4. 停機(jī)。

　 8.5.3.

　各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍，以確

　保合適的測試性能。

　 8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。

　 8.6. 稀釋

　 8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為

　 1:100。

　 8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，將得到的檢測結(jié)果

　 乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。

　 8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，參考相應(yīng)的

　 儀器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。

　8.7.結(jié)果計算：

　 選擇適當(dāng)?shù)那�線擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式，以校

　準(zhǔn)品濃度值為 x 軸，以校準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度值的 log 值為 y 軸建立定標(biāo)曲線。

　根據(jù)待測樣本的發(fā)光強(qiáng)度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過

　15

　存儲的定標(biāo)曲線以及樣本測試得到的信號值自動計算樣本測試結(jié)果。

　九、參考范圍

　檢測 500 例乙肝患者樣本和 500 例正常人樣本，用 ROC 曲線方法確定正

　常參考值為<0.1PEI U/ml；建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)際條件及接觸人群建立

　正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。

　十、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

　10.1. 用本試劑盒檢測結(jié)果為參考值附近等可疑樣本，建議重新測定，動態(tài)觀

　 察。

　10.2. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本

　 進(jìn)行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)

　 直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生

　 的檢測報告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則

　 應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定

　 基線值。

　 10.3. 根據(jù) WHO 文獻(xiàn)報道 [4] ，1PEI U/ ml≈1.05IU/ml。

　十一、檢驗(yàn)方法的局限性

　 11.1. 本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患

　者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查、治療反

　應(yīng)及流行病學(xué)等信息綜合考慮。

　11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會干擾檢測結(jié)果，必須結(jié)合患者病

　史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。

　11.3. 嚴(yán)重溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

　 十二、產(chǎn)品性能特征

　 12.1. 陰性參考品符合率：符合中國食品藥品檢定研究院陰性參考品的要求；

　12.2. 陽性參考品符合率：符合中國食品藥品檢定研究院陽性參考品的要求；

　12.3. 最低檢出量：符合中國食品藥品檢定研究院最低檢出量參考品的要求；

　12.4. 空白限：不大于 0.05PEI U/ml；

　12.5. 線性：在 0.1~200PEI U/ml 范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù) r≥0.9900；

　12.6. 準(zhǔn)確性：測定結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)；

　16

　12.7. 分析特異性：與 HIV 抗體、HCV-IgG 抗體、HAV-IgM 抗體無交叉反應(yīng)。

　12.8. 精密度：變異系數(shù)不高于 15.0%；

　12.9. 干擾物質(zhì)：40mg/dl 膽紅素、2.5mg/ml 血紅蛋白、500mg/dl 甘油三酯對

　檢測結(jié)果無顯著影響；

　12.10. 抗凝劑的影響：使用肝素抗凝的血漿對檢測結(jié)果無顯著影響；

　12.11. HOOK 效應(yīng)：測定含量為 1600PEI U/ml 的樣本，不會出現(xiàn) HOOK 效應(yīng)；

　12.12. 方法學(xué)對比：與 SFDA 批準(zhǔn)上市的試劑盒對比檢測 1119 份臨床樣本，

　 陰性符合率 100%，陽性符合率 99.23%，總體符合率為 99.73%。

　 十三、參考文獻(xiàn)

　 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.

　Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

　2.Moucari R, Mackiewicz V, Lada O, et al. Early serum HBsAg drop: a strong

　 predictor of sustained virological response to pegylated interferon alfa-2a in

　 HBeAg-negative patients.Hepatology,2009,49:1151-1157.

　3.干擾素治療慢性乙型肝炎專家討論組. 干擾素治療慢性乙型肝炎專家建議

　[J].中華傳染病雜志, 2007, 25(10): 577-583.

　4.Annette, Reissinger, Peter, et al. Collaborative Study to Establish a WorldHealth

　 Organization International Standard for Hepatitis B e Antigen (HBeAg)[J].

　 Expert Committee on Biological Standardization, 2013, (2228):

　 1-37

　 主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗體 定量測定

　17 一、 目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗體 測定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，確保 乙型肝炎病毒 e 抗體

　 測定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。

　二、 適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

　e 抗體 。

　三、臨床意義

　 乙型肝炎病毒（HBV）屬嗜肝 DNA 病毒科, 具有明顯的種屬及嗜肝特性

　 （盡管其亦可感染肝以外的組織、器官或細(xì)胞，如脾、睪丸、人外周血單個

　核細(xì)胞等），可致持續(xù)性病毒感染。HBV 的感染導(dǎo)致血漿中出現(xiàn)特異性的乙

　肝病毒 e 抗體及其它一系列特異性的血清學(xué)標(biāo)志物。e 抗體是乙型肝炎病毒

　e 抗體的簡稱（抗-HBe），它是由 e 抗原刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出來的特異

　性抗體，這種特異的 e 抗體能夠和 e 抗原結(jié)合。

　四、方法原理

　本產(chǎn)品采用競爭法原理進(jìn)行檢測。用 e 抗體和 e 抗原包被磁微粒，用辣

　根過氧化物酶標(biāo)記 e 抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗

　體復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與 e 抗體的含量成反

　比。

　五、標(biāo)本的采集與處理

　5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣

　本，離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離心

　前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使用

　抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min�？鼓�管推薦使用肝

　素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

　5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣

　本未變質(zhì)方可使用。

　 5.3.

　溶血或脂血的樣本不能用于測定。

　5.4.

　樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

　 本放置在 2~8℃的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運(yùn)輸，則應(yīng)凍存于

　 -20℃以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。

　六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

　18

　 1）嚴(yán)重溶血、脂血

　2）標(biāo)本標(biāo)識不明

　七、儀器與材料

　7.1.儀器：

　適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀。

　7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗體 試劑

　7.2.1.試劑準(zhǔn)備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。

　 7.2.2.試劑盒于 2～8℃儲存，有效期 12 個月。

　 7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強(qiáng)光照射。

　 7.2.4.試劑盒開啟使用后，2～8℃保存可使用 1 個月。

　 7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸，運(yùn)輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

　7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性

　7.2.6.1.

　試劑包（磁微粒混懸液、酶結(jié)合物）豎直向上存放，

　在 2 ~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機(jī)使

　用。首次使用后，機(jī)載或在 2 ~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

　為 28 天。

　 7.2.6.2. 陰陽性對照開瓶后保存于2~8°C，穩(wěn)定期可維持1個

　 月；若需使用更長時間，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝，于

　 -20℃凍存（可以保存2個月），但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　7.2.6.3. 試劑在 2 ~8°C 保存可穩(wěn)定至標(biāo)簽上所標(biāo)示的有效

　 期。

　 7.3.質(zhì)控液：推薦使用安圖配套質(zhì)控品或第三方質(zhì)控品 BioRAD QC 八、檢驗(yàn)方法

　 8.1. 消耗品檢查：

　 8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

　 8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.2. 試劑包裝載：

　 8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

　 份，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

　 8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

　19

　 8.2.3.

　如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。

　 8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.3. 測試：

　 8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 50µl。

　 8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

　 8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開始測試，系統(tǒng)自動進(jìn)行試驗(yàn)操作。

　 8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.4. 定 Cutoff 值

　 8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。

　 8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。

　 8.4.3. 將陰陽性對照轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。

　 8.4.4. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入 Cutoff 值信息。

　 8.4.5.

　選擇“運(yùn)行”開始測試，生成 Cutoff 值。

　 8.4.6. Cutoff 值有效期為 28 天。

　 8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要重新生成 Cutoff 值：

　 8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；

　 8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；

　 8.4.8.3.超出 Cutoff 值有效期限；

　 8.4.8.4.

　儀器重要部件更換或維修。

　8.5. 質(zhì)控：

　 8.5.1. 使用至少兩個分析物水平的質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控。

　 8.5.2.

　出現(xiàn)以下情況需要進(jìn)行質(zhì)控：

　8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時；

　8.5.2.2. 更換新的試劑盒；

　8.5.2.3. 重新生成 Cutoff 值；

　8.5.2.4 停機(jī)。

　8.5.3. 各實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)自身情況建立適合本實(shí)驗(yàn)室的可接受范圍，以確

　 保合適的測試性能。

　20

　 8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。

　8.6.結(jié)果計算：

　 Cutoff 值=陰性對照平均發(fā)光值*0.4

　有效性判斷：

　8.6.1.

　陰性對照孔平均發(fā)光值/陽性對照孔平均發(fā)光值大于 3；

　8.6.2. 陰性對照各孔相對發(fā)光強(qiáng)度 CV%不超過 10%（如 CV%超過

　10%，則刪除不平行點(diǎn)直到 CV%小于 10%或重新實(shí)驗(yàn)）。

　九、參考范圍

　 S/CO=待測樣本發(fā)光值/ Cutoff 值；

　 當(dāng) S/CO>1.00 時，結(jié)果判為陰性；S/CO≤1.00 時，結(jié)果判為陽性。

　十、 檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

　 10.1. 用本試劑盒檢測結(jié)果 COI 為 0.80～1.20 的弱反應(yīng)性可疑樣本，建議復(fù)

　孔重新測定，如果雙孔復(fù)查 COI 均大于 1.00，結(jié)果判為陰性，如果單

　孔或復(fù)孔測定不大于 1.00，結(jié)果判為陽性，同時建議動態(tài)觀察。

　10.2. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本

　進(jìn)行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)

　直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在檢測報告中注

　明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應(yīng)進(jìn)行額外的連

　續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線值。

　十一、檢驗(yàn)方法的局限性

　 11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史

　 及其他檢測相結(jié)合。

　11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風(fēng)濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適

　合用本試劑盒進(jìn)行檢測。

　 11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。

　 十二、產(chǎn)品性能特征

　12.1.

　符合率：與 SFDA 批準(zhǔn)的試劑平行檢測 1024 份臨床樣本，陰性符合率

　98.98%，陽性符合率 98.8%，總符合率 98.93%。

　 12.2.

　最低檢出限：檢定系列國家最低檢出限參考品或經(jīng)國家參考品標(biāo)化的企

　21

　業(yè)最低檢出限參考品，結(jié)果符合相應(yīng)參考品的要求。

　 12.3.

　精密性：10 孔平行檢測 0.5 PEI U/ml 樣本，CV%≤10.0%；10 孔平行

　檢測 5 PEI U/ml 樣本，CV%≤20.0%。

　 12.4. 分析特異性：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無交

　叉反應(yīng)。1.25mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和

　500mg/dl 膽固醇對檢測結(jié)果無干擾。

　 十三、參考文獻(xiàn)

　 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.

　Hepatology, 2004, 34: 1225-1241.

　2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:

　97-107.

　3.巴德年,1998 年.當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用.北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)

　合出版社.

　4.陶義訓(xùn), 1997 年第二版,免疫學(xué)與免疫學(xué)檢驗(yàn).人民衛(wèi)生出版社.

　5.中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會. 病毒性肝炎防治方案.

　 中華傳染病雜志, 2001, 19:56-62.

　22

　主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒核心 抗體 定量測定

　一、 目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒核心抗體 測定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，確保 乙型肝炎病毒核心

　抗體 測定的結(jié)果準(zhǔn)確有效。

　二、 適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒

　核心抗體 。

　三、臨床意義

　 核心抗體是乙型肝炎病毒核心抗體的簡稱，可簡寫為抗-HBc。核心抗原

　 雖然在血清中查不出來（它在血中很快被裂解），但是它具有抗原性，能刺激

　 身體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出特性抗體，即核心抗體，故檢測抗-HBc 可以了解人體

　 是否有過核心抗原的刺激，也就是說是否有過乙肝病毒的感染。所以抗-HBc

　 是一項(xiàng)病毒感染的標(biāo)志。

　四、方法原理

　本產(chǎn)品采用競爭法原理進(jìn)行檢測。用核心抗原包被磁微粒，用辣根過氧

　化物酶標(biāo)記核心抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合

　物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與核心抗體的含量成反比。

　五、標(biāo)本的采集與處理

　5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣

　本，離心前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離心

　前樣本應(yīng) 37℃孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使用

　抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min�？鼓�管推薦使用肝

　素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。

　23 5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣

　本未變質(zhì)方可使用。

　 5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。

　5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣

　本放置在 2~8℃的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運(yùn)輸，則應(yīng)凍存于

　-20℃以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。

　六、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

　1）嚴(yán)重溶血、脂血

　2）標(biāo)本標(biāo)識不明

　七、儀器與材料

　 7.1.儀器：

　適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀。

　 7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒核心抗體 試劑

　7.2.1.試劑準(zhǔn)備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。

　 7.2.2.試劑盒于 2～8℃儲存，有效期 12 個月。

　 7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強(qiáng)光照射。

　 7.2.4.試劑盒開啟使用后，2～8℃保存可使用 1 個月。

　 7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運(yùn)輸，運(yùn)輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。

　7.2.6.試劑機(jī)載穩(wěn)定性

　 7.2.6.1. 試劑包（磁微�；鞈乙�、酶結(jié)合物）豎直向上存放，

　在 2~10°C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機(jī)使

　用。首次使用后，機(jī)載或在 2~10°C 環(huán)境下穩(wěn)定期

　為 28 天。

　 7.2.6.2. 陰陽性對照開瓶后保存于2~8°C，穩(wěn)定期可維持1

　 個月；若需使用更長時間，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行分裝，

　 于-20℃凍存（可以保存2個月），但應(yīng)避免反復(fù)凍

　 融。

　 7.3.質(zhì)控液：推薦使用安圖配套質(zhì)控品或第三方質(zhì)控品 BioRAD QC 八、檢驗(yàn)方法

　 8.1. 消耗品檢查：

　24

　 8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。

　 8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.2. 試劑包裝載：

　 8.2.1. 試劑包首次上機(jī)前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成

　 份，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。

　 8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。

　 8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。

　 8.2.4.

　參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。

　 8.3. 測試：

　 8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 50µl。

　 8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。

　 8.3.3. 選擇“運(yùn)行”開始測試，系統(tǒng)自動進(jìn)行...

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