煙葉唇柱苣苔不定芽的誘導因子

　　摘要：以煙葉唇柱苣苔無菌葉片為試驗材料，研究培養(yǎng)基pH值、無機鹽濃度、蔗糖濃度、植物生長調節(jié)劑種類及配比等對不定芽誘導的影響，以期篩選出最佳誘導培養(yǎng)基。結果表明：不定芽誘導的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，滅菌前pH值為6.0，40d不定芽誘導率為100%，不定芽數平均為9.58個/張，生長勢好。
　　關鍵詞：煙葉唇柱苣苔；葉片；不定芽；組織培養(yǎng)
　　中圖分類號：Q943.1文獻標志碼：A文章編號：1002-1302（2014）11-0075-03
　　苦苣苔科植物具有極重要的生物學價值和分類意義[1]，其種類繁多，全世界約有150屬3000余種，我國有58屬約463種[2]，其中海南省約有13屬21種1變種，而特有種10種[3]。苦苣苔科植物中許多種類是重要的觀賞植物、藥用植物和特種蔬菜資源。煙葉唇柱苣苔（Chiritaheterotricha）是苦苣苔科唇柱苣苔屬多年生草本植物，生于海拔約430m的山谷林中或溪邊石上，是海南特有的野生花卉，其花冠淡紫色或白色，極為優(yōu)雅，而且花期長，四季長綠，適合觀賞和園藝。此外，唇柱苣苔屬植物具有廣泛的適應性[4]，因而煙葉唇柱苣苔具有極大的開發(fā)潛力。目前，煙葉唇柱苣苔仍處于野生狀態(tài)，未進行商品化開發(fā)。由于人類活動的干擾、生態(tài)環(huán)境惡化以及自身的原因，煙葉唇柱苣苔資源逐漸減少，因此極有必要進行組織培養(yǎng)研究，以滿足煙葉唇柱苣苔的保護和開發(fā)利用的需要。本試驗以煙葉唇柱苣苔無菌葉片作為材料，較系統地研究葉片分化不定芽過程中的若干影響因素，以期篩選出最佳的不定芽誘導培養(yǎng)條件，快速建立煙葉唇柱苣苔組培技術體系。
　　1材料與方法
　　1.1試驗材料
　　植株采自海南省保亭縣。取幼葉進行表面消毒后培養(yǎng)獲得的無菌葉片作為試驗材料。
　　1.2試驗方法
　　在基本培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度的植物生長調節(jié)劑，除試驗項目以外，所有處理中的基本培養(yǎng)基中含食用蔗糖30g/L、卡拉膠9g/L，滅菌前pH值為6.0，光照強度1500lx，光照時間9h/d，培養(yǎng)溫度（26±2）℃。取無菌植株小葉片（約0.5cm×0.5cm），以葉面朝上接種于各種培養(yǎng)基上（圖1），每個處理接種8袋，每袋3張葉，3次重復，定期觀察并記錄，培養(yǎng)40d后統計葉片不定芽誘導率和平均不定芽數。不定芽誘導率=誘導出芽葉片數/接種葉片數×100%，平均不定芽數=不定芽總數/誘導出芽葉片數。
　　1.2.1不同接種方式對不定芽誘導的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，接種葉片分別以葉背和葉面平放于培養(yǎng)基上，共2種處理。
　　1.2.2pH值對不定芽誘導的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，滅菌前pH值分別調至5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，共5個處理。
　　1.2.3無機鹽濃度對不定芽誘導的影響以1/4MS、2/4MS、3/4MS、MS作為基本培養(yǎng)基，各添加6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L，共4個處理。
　　1.2.4不同種類細胞分裂素對不定芽誘導的影響以MS+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，分別添加6-BA0.1mg/L、KT0.1mg/L和TDZ0.1mg/L，共3個處理。
　　1.2.5蔗糖濃度對不定芽誘導的影響以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L為基本培養(yǎng)基，設置蔗糖濃度10、20、30、40、50g/L共5個處理。
　　1.2.6不同植物生長調節(jié)劑組合對不定芽誘導的影響以MS為基本培養(yǎng)基，設計6-BA0.1、0.5、1.0mg/L與NAA0.1、0.5mg/L不同配比，共6個處理。
　　1.3數據分析
　　采用方差分析法，F測驗顯著后用新復極差法進行多重比較。
　　2結果與分析
　　2.1不同接種方式對不定芽誘導的影響
　　煙葉唇柱苣苔葉片幾乎無明顯的愈傷組織分化，可以直接分化出不定芽。接種15d后，葉面開始膨大隆起，25d開始有小芽點萌動，40d在葉片邊緣、主葉脈基部和葉面處均分化出不定芽。從表1可見，以葉背和葉面2種方式接種培養(yǎng)的結果差異極大，以葉背接觸培養(yǎng)基的葉片不定芽誘導率高達100%，平均不定芽數為7.22個/張；而葉面接觸培養(yǎng)基的不定芽誘導率只有73.91%，平均不定芽數為4.76個/張。方差分析結果表明，2種接種方式不定芽誘導率和平均不定芽數的差異均達到極顯著水平，因此煙葉唇柱苣苔葉片不定芽的誘導以葉背平置于培養(yǎng)基上為宜。
　　2.2pH值對不定芽誘導的影響
　　由表2可知，pH值為6.0的培養(yǎng)基上不定芽的誘導率和平均不定芽數最高，分別為100%和7.34個/張；其次為pH值為6.5的培養(yǎng)基，其不定芽誘導率和平均不定芽數分別為96.30%和6.07個/張；最低的為pH值為5.0的培養(yǎng)基，其不定芽誘導率和平均不定芽數分別為79.17%和4.01個/張。經方差分析可知，pH值為6.0的培養(yǎng)基與其他培養(yǎng)基處理的不定芽誘導率和平均不定芽數的差異極顯著，因此煙葉唇柱苣苔不定芽誘導培養(yǎng)基的pH值在滅菌前宜調至6.0。
　　2.3無機鹽濃度對不定芽誘導的影響
　　從表3可見，除1/4MS外，其余3種無機鹽濃度對葉片不定芽的誘導率均能達到100%，而平均不定芽數則隨著無機鹽濃度的增加而增加，呈正相關關系。MS對葉片不定芽的誘導效果最好，平均不定芽數最多，達7.23個/張，與其他處理差異極顯著，且芽苗生長健壯，葉色濃綠；3/4MS的誘導效果次之，分化芽數為6.18個/張，芽生長勢也好，葉綠色；1/2MS和1/4MS誘導的平均不定芽數差異不顯著，但1/4MS誘導的不定芽生長勢差，部分葉片出現黃化現象。說明全量MS培養(yǎng)基適合煙葉唇柱苣苔不定芽誘導培養(yǎng)。

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