殼寡糖席夫堿納米銀溶液對(duì)煙草花葉病防治及煙葉色素的影響

　　摘要：為開(kāi)發(fā)防治煙草花葉病的新型藥劑，采用大田試驗(yàn)研究了殼寡糖納米銀溶液、殼寡糖席夫堿納米銀溶液及寧南霉素對(duì)煙草花葉病的田間防治效果。結(jié)果表明，殼寡糖和殼寡糖席夫堿的納米銀溶液對(duì)煙草花葉病的防治效果均優(yōu)于寧南霉素，以預(yù)防和治療效果分別達(dá)到53.32%、24.95%的殼寡糖席夫堿納米銀溶液為最好，能夠減輕病株葉綠素和類胡蘿卜素含量的下降幅度，增強(qiáng)煙株的光合作用強(qiáng)度，使煙株的抗病性得到提高。殼寡糖及其衍生物的納米銀溶液對(duì)煙草花葉病具有較好的防治效果，為今后開(kāi)發(fā)綠色、高效的抗TMV藥劑提供了新思路。
　　關(guān)鍵詞：殼寡糖納米銀；殼寡糖席夫堿納米銀；煙草花葉��；防治效果；葉綠素
　　中圖分類號(hào)：S435.72
　　文章編號(hào)：1007-5119（2016）01-0061-06
　　DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2016.01.011
　　殼寡糖（Chitooligosaccharides，COS）是殼聚糖的降解產(chǎn)物，它是將殼聚糖經(jīng)生物技術(shù)降解而成的相對(duì)分子質(zhì)量較低、聚合度為3-10的低聚β-（l，4）-2-脫氧-2-氨基葡萄糖。由于殼寡糖分子中存在著氨基、一級(jí)羥基和二級(jí)羥基等活性官能團(tuán)，因此這些官能團(tuán)的化學(xué)修飾大大的拓寬了殼寡糖在不同領(lǐng)域的應(yīng)用。殼寡糖是植物識(shí)別病原真菌入侵的非特異性信號(hào)，可以對(duì)許多植物顯示出強(qiáng)烈的免疫誘導(dǎo)活性，從而可以激發(fā)植物的抗病基因的表達(dá)，產(chǎn)生能抑制或殺滅病菌的與植物抗病性相關(guān)的物質(zhì)如甲殼素酶、殼聚糖酶、植保素和免疫蛋白質(zhì)，已有研究表明，殼寡糖可誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性。
　　席夫堿是一類具有廣泛生物活性的化合物，其在抑制煙草花葉病毒活性中的研究已有不少報(bào)道，我們也報(bào)道了殼寡糖席夫堿對(duì)煙草花葉病毒具有較好的抑制作用。納米銀是一種新型、綠色、抗菌材料，它具有抗病毒活性，殼寡糖衍生物納米銀的抗人體病毒活性和抗煙草花葉病毒活性也已有報(bào)道。煙草花葉病不僅對(duì)煙葉產(chǎn)量造成很大的損失，還造成了煙葉品質(zhì)的下降，使煙葉等級(jí)降低，無(wú)法滿足卷煙行業(yè)對(duì)優(yōu)質(zhì)卷煙原料的要求，因此急需研究開(kāi)發(fā)出一種綠色有效的抗煙草花葉病的藥劑。筆者分別以殼寡糖和具有席夫堿結(jié)構(gòu)的新型殼寡糖衍生物合成了其納米銀，并對(duì)田間感染煙草花葉病的煙株防治效果進(jìn)行了試驗(yàn)，以期為新型、綠色、高效的抗煙草花葉病藥劑的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。
　　1 材料與方法
　　1.1 試驗(yàn)材料
　　2%的寧南霉素水劑（2% ningnanmycin AS）是德強(qiáng)生物股份有限公司產(chǎn)品；殼寡糖（COS，分子量平均約為5000）來(lái)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；硝酸銀（AgNO₃），分析純，購(gòu)自天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心。采用北京普析通用儀器有限責(zé)任公司的TU-1901型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行紫外分析。
　　1.2 殼寡糖納米銀溶液（COS-Ag）和殼寡糖席夫堿納米銀溶液（S-COS-Ag）的制備
　　殼寡糖席夫堿（S-COS）的制備參照文獻(xiàn)，分別將50mL lmg/mL殼寡糖溶液和殼寡糖席夫堿溶液加入100mL燒杯中，再分別向其中加入5mL 10mg/mL的硝酸銀溶液，在80℃條件下分別攪拌70、30min，得到殼寡糖納米銀溶液（COS-Ag）和殼寡糖席夫堿納米銀溶液（S-COS-Ag）。
　　1.3 試驗(yàn)地點(diǎn)
　　試驗(yàn)田設(shè)在河南省漯河市臨潁縣繁城鎮(zhèn)馬井村，供試品種為中煙100（感普通花葉病）。該田地連續(xù)3年以上種植煙草，煙草花葉病常年較明顯。試驗(yàn)地地勢(shì)平坦、灌溉方便、肥力中等、通風(fēng)向陽(yáng)，土壤質(zhì)地為砂質(zhì)一粘質(zhì)潮土（其中氯離子28.400mg/kg，速效鉀99.814mg/kg，速效磷24.769mg/kg，pH6.34，有機(jī)質(zhì)17.095g/kg，堿解氮77mg/kg）。4月底移栽，株行距為120cm×55cm，每個(gè)處理（小區(qū)）面積533.36㎡，隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，重復(fù)3次，四周設(shè)保護(hù)行。其他管理措施與大田管理一致。
　　1.4 病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)
　　煙草花葉病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)。
　　1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
　　試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理，分別為T(mén)l：稀釋260倍的寧南霉素水劑T2：質(zhì)量濃度為10μg/mL的COS-Ag溶液；T3：質(zhì)量濃度為10μg/mL的S-COS-Ag溶液；CK：清水（對(duì)照）。在大田環(huán)境下進(jìn)行，煙株生長(zhǎng)健壯，長(zhǎng)勢(shì)均勻，自然發(fā)病。試驗(yàn)分為預(yù)防試驗(yàn)和治療試驗(yàn)。
　　預(yù)防試驗(yàn)：在煙株移栽后15d選擇沒(méi)有發(fā)病的煙田噴灑藥劑，連續(xù)噴藥4次，每次間隔lOd。
　　治療試驗(yàn)：于2014年5月25號(hào)、6月4號(hào)、6月14號(hào)、6月24號(hào)進(jìn)行噴藥。5月25號(hào)對(duì)試驗(yàn)田進(jìn)行普查，發(fā)現(xiàn)有零星煙草花葉病煙株，6月18號(hào)達(dá)到發(fā)病高峰。
　　在3次噴藥后每7天時(shí)間觀察記載發(fā)病情況，根據(jù)煙草花葉病的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行記錄。在5月25號(hào)時(shí)，掛牌隨機(jī)選取幾株感染煙草花葉病的煙株，以中部煙葉為研究對(duì)象，分別在5月25號(hào)、6月4號(hào)、6月14號(hào)和6月24號(hào)取樣（4個(gè)取樣日期分別記作l、2、3、和4次），采用乙醇提取法研究不同處理下煙葉色素含量變化。
　　1.6 數(shù)據(jù)分析處理
　　采用SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性分析，采用Excel 2007對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并作圖。
　　2 結(jié)果
　　2.1 COS-Ag和S-COS-Ag的紫外分析
　　COS、S-COS、COS-Ag和S-COS-Ag的紫外圖譜掃描曲線如圖l所示，COS在270nm處有一個(gè)強(qiáng)而窄的吸收峰，與COS相比，S-COS在319nm處存在著吸收強(qiáng)度較弱的酚亞胺基團(tuán)的吸收峰，COS-Ag在410nm左右處出現(xiàn)了納米銀粒子的特征等離子共振吸收峰；與S-COS相比，S—COS-Ag也在410nm左右處出現(xiàn)了納米銀粒子的特征等離子共振吸收峰；因此，由上面分析可知有納米銀粒子的形成。

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