ＧＡＰ基地與其他產(chǎn)地梔子藥材中西紅花苷－１含量的對(duì)比研究

　　[摘 要] 目的 以西紅花苷-1含量為指標(biāo)，評(píng)價(jià)GAP基地梔子藥材的質(zhì)量，并與其他產(chǎn)地藥材進(jìn)行比較。方法 運(yùn)用HPLC法，色譜柱：Kromasil C18柱；流動(dòng)相：水－甲醇梯度洗脫(60：40至0：100)；檢測(cè)波長(zhǎng)：440nm；流速：1.0ml·min-1。結(jié)果 GAP藥材基地梔子中西紅花苷-1含量比其他產(chǎn)地的要高，含量波動(dòng)小。結(jié)論 GAP基地梔子藥材質(zhì)量好，且較穩(wěn)定，其他產(chǎn)地梔子藥材質(zhì)量不穩(wěn)定。
　　關(guān)鍵詞：GAP HPLC 梔子 西紅花苷-l
　　中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672-5085（2007）7-0107-03
　　
　　梔子為茜草科植物Gardenia jasminoides Eills的干燥成熟果實(shí)，是傳統(tǒng)中藥，具瀉火除煩，清熱利尿，涼血解毒的功效[1]。梔子的主要有效成分為梔子苷、西紅花苷類(lèi)[2,3]，西紅花苷類(lèi)是西紅花、梔子中共有的色素部分，在治療或預(yù)防心腦血管疾病及癌癥等方面具有明確的藥理效應(yīng)[4]。梔子生長(zhǎng)地區(qū)廣泛，主產(chǎn)于浙江、江西、湖北、湖南等地，不同地區(qū)產(chǎn)的梔子質(zhì)量參差不齊，本文通過(guò)對(duì)GAP基地及湖南、江西等不同產(chǎn)地梔子的西紅花苷-1含量進(jìn)行檢測(cè)并比較，為不同來(lái)源藥材的質(zhì)量控制提供一種可靠的方法，也為制劑生產(chǎn)廠家優(yōu)選貨源提供參考。
　　
　　1 儀器與試藥
　　
　　1.1 儀器
　　日本島津高效液相色譜儀（LC－10AT泵，SPD－10A紫外檢測(cè)器）；N2000色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息研究）；KQ－250E型醫(yī)用超聲波清洗器(500W，40kHz)，F(xiàn)A1104電子分析天平。
　　1.2 試劑
　　甲醇為色譜純；水為雙重蒸餾水(自制)。
　　1.3 樣品
　　規(guī)范化基地樣品采集于江西（樟樹(shù)、新干）GAP梔子種植基地，湖南不同產(chǎn)地樣品由當(dāng)?shù)剞r(nóng)民帶領(lǐng)采集，其它樣品均在各產(chǎn)地購(gòu)買(mǎi)。經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)周日寶教授鑒定均為茜草科植物Gardenia jasminoides Ellis的成熟果實(shí)。
　　1.4 對(duì)照品
　　西紅花苷-1(成都普思生物科技有限公司提供，純度>98%，HPLC)
　　
　　2 方法與結(jié)果
　　
　　2.1 色譜條件
　　色譜柱為kromasil C18柱(4.6×250mm，5µm)；流動(dòng)相：水－甲醇梯度洗脫(60：40至0：100)，洗脫時(shí)間60min；流速l.0ml·min-1；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)440nm；進(jìn)樣量20µl。此條件下供試品中西紅花苷-l與其他組分均能達(dá)到基線分離，西紅花苷-1保留時(shí)間為24.5 min(圖1、2)
　　
　　2.2 供試品制備
　　將梔子藥材50℃減壓干燥24h，粉碎，過(guò)20目篩，精密稱(chēng)取約0.1g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，稱(chēng)重，超聲處理30min，放冷，再稱(chēng)重，用50%甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45µm)濾過(guò)。
　　2.3 線性關(guān)系考察
　　精密稱(chēng)取一定量西紅花苷-l對(duì)照品分別溶于甲醇，配制成4.9、9.8、19.6、39.2、78.4、98µg·ml-1的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20µl，按上述色譜條件注入色譜儀，測(cè)定峰面積，平行測(cè)定3次，以峰面積A為縱坐標(biāo)，西紅花苷-l濃度C(µg·m1-1)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程為：Y=1.72×107C－6.80×103，r=0.9999（n＝6）。結(jié)果表明：西紅花苷-l在4.9～98µg·ml-1的范圍內(nèi)，其濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。
　　2.4 精密度試驗(yàn)
　　準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液（19.6µg·ml-1）20µl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果RSD為1.26%，說(shuō)明其精密度良好。
　　2.5 重復(fù)性試驗(yàn)
　　取湖南漣源樣品5分，分別按上述供試品制備法制備，并按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果RSD為1.18%，說(shuō)明其重現(xiàn)性良好。
　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，10h分別進(jìn)樣2Oµl，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果RSD值為1.35%，結(jié)果表明，供試品溶液在10h之內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.7 加樣回收率試驗(yàn)
　　精密稱(chēng)取已測(cè)得含量的樣品0.05g，分別精密加入西紅花苷-l對(duì)照品溶液適量，揮干溶劑，按供試品制備方法制備供試液，測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。
　　
　　2.8 供試品測(cè)定及結(jié)果
　　精密吸取對(duì)照品溶液與不同產(chǎn)地的供試品濾液各20µl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件，以外標(biāo)法測(cè)定并計(jì)算樣品含量。結(jié)果見(jiàn)表2。
　　
　　3 討論
　　
　　分別考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇4種比例溶劑的提取效果，結(jié)果表明，50%甲醇提取率最高，故選其作提取溶劑。提取方法分別考察了超聲提取與加熱回流兩種方式，提取效率相當(dāng)，考慮到操作簡(jiǎn)便，故采用超聲提取。
　　從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出，GAP基地產(chǎn)出的梔子藥材中西紅花苷-l含量都在1.18%以上，RSD最高1.01%，說(shuō)明質(zhì)量較好、穩(wěn)定，而其他產(chǎn)地產(chǎn)出梔子藥材中西紅花苷-l含量最高才1.14%，RSD從0.98%到2.48%，表明質(zhì)量較差，且波動(dòng)大，從一定程度上說(shuō)明建立GAP藥材生產(chǎn)基地能有效的提高并控制藥材的質(zhì)量。
　　
　　參考文獻(xiàn)
　　[1] 中國(guó)藥典[S].一部.2005,173.
　　[2] 劉璇,錢(qián)之玉,付健.西紅花苷-l的高效液相色譜測(cè)定[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1996,27(12)：734.
　　[3] 曹敏,陳玉英.梔子藥材紅花苷類(lèi)HPLC指紋圖譜的研究[J].中國(guó)新藥雜志,2003,12(7)：553.
　　[4] 鄧穎,郭志剛,曾兆麟,等.藏紅花的藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志,2002,27(8)：565～568.
　　
　　注：“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請(qǐng)以PDF格式閱讀原文”

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