HPLC測定白芷藥材中歐前胡素與異歐前胡素的含量

　　[摘要] 目的：建立白芷中歐前胡素與異歐前胡素的高效液相色譜含量測定方法。方法：色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-水（70∶30）為流動相，檢測波長254 nm，流速1.0 ml/min。結(jié)果：歐前胡素在0.094 8~0.853 2 μg/ml具有良好的線性關(guān)系(r=0.999 8)，異歐前胡素在0.150 0~1.350 0 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關(guān)系（r=1.000 0）。歐前胡素的平均回收率為98.0%，RSD=0.7%；異歐前胡素的平均回收率為99.0%，RSD=1.1%。結(jié)論：本法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于白芷中歐前胡素與異歐前胡素的含量測定。
　　[關(guān)鍵詞] 含量測定；白芷；高效液相色譜法
　　[中圖分類號] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2011）06（c）-074-02
　　
　　Determination of imperatorin and isoimperatorin in Radix Angelicae Dahuricae by HPLC
　　WANG Yunlong,YANG Lizhi, JIANG Xuemin,XU Shiwei,SHAO Limei
　　Jixi Institute for Drug Control, Jixi158100,China
　　[Abstract] Objective: An HPLC method was established for the simultaneous determination of imperatorin and isoimperatorin in Radix Angelicae Dahuricae. Methods: The separation was performed on a Agilent ZORBAX SB-C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) using methanol-water (70∶30). The UV detection was set at 254 nm; flow rate was 1.0 ml/min. Results: There was good linearity between the peak area and concentration at the ranges of 0.094 8-0.853 2 μg/ml (r=0.999 8), 0.150 0-1.350 0 μg/ml(r=1.000 0) for imperatorin and isoimperatorin respectively. The average recoveries of imperatorin and isoimperatorin were 98.0%(RSD=1.0%) and 99.0%(RSD=0.5%). Conclusion: The method is rapid, simple and accurate for the content determination of imperatorin and isoimperatorin in Radix Angelicae Dahuricae.
　　[Key words] Content determination; Radix Angelicae Dahuricae; HPLC
　　
　　白芷收載于《中國藥典》2010年版一部，來源為傘形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.)Benth. et Hook. f. 或杭白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan 的干燥根。性溫味辛，歸胃、大腸、肺經(jīng)。具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功效。用于治療感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、白帶、瘡瘍腫痛�！吨袊�藥典》2010年版一部[1]僅對白芷中歐前胡素進(jìn)行了含量測定，文獻(xiàn)報道[2-3]的方法雖對兩種成分同時進(jìn)行含量測定，但前處理方法繁瑣。本文采用高效液相色譜法同時測定白芷藥材中歐前胡素與異歐前胡素的含量，方法簡便、快速、專屬性強(qiáng)、分離度高，可作為白芷藥材的質(zhì)量控制方法。
　　1儀器與試藥
　　HP1100高效液相色譜儀，配置四元泵、紫外檢測器、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、HP Chemstation色譜工作站；AG285電子分析天平、歐前胡素與異歐前胡素為中國藥品生物制品檢定所提供，水為重蒸餾水，甲醇為色譜純。白芷藥材購于藥店。
　　2方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件
　　色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），檢測波長：280 nm，流動相：甲醇-水（70∶30），流速：1 ml/min，柱溫：35℃，進(jìn)樣量20 μl。
　　2.2 溶液的制備
　　2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取歐前胡素與異歐前胡素9.48 mg、15.00 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。
　　2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品1粉末（過三號篩）約1.0 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇45 ml，超聲處理（功率300 W，頻率50 Hz）30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
　　2.3 線性關(guān)系考察
　　精密吸取歐前胡素和異歐前胡素的對照品混合溶液0.5、1.5、2.5、3.5、4.5 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)X（μg/ml），相應(yīng)成分峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，歐前胡素0.094 8~0.853 2 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=4.003×103X+16.5，r=0.999 6；異歐前胡素在0.150 0~1.350 0 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=4.242×103X+16.917，r=0.999 8。
　　2.4 精密度試驗
　　按上述色譜條件，以對照品混合溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計算，歐前胡素的RSD=0.3%，異歐前胡素的RSD= 0.5%。
　　2.5 穩(wěn)定性試驗
　　取供試品溶液，在室溫下放置，按上述色譜條件，分別在0、2、4、6、8 h測定，以峰面積計算，歐前胡素的RSD=0.4%，異歐前胡素的RSD=0.8%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.6 重復(fù)性試驗
　　同一批白芷，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液5份，在上述色譜條件下測定，測得歐前胡素的RSD=1.8%，異歐前胡素的RSD=1.7%。
　　2.7 回收率試驗
　　取已知含量的供試品5份，每份0.5 g，精密稱定，置5個25 ml量瓶中，分別精密加入上述對照品溶液5 ml，加甲醇稀釋至刻度，在上述色譜條件下測定，計算回收率，歐前胡素的平均回收率為98.0%，RSD=1.0%；異歐前胡素的平均回收率為99.0%，RSD=0.5%，結(jié)果見表1。
　　
　　
　　2.8 樣品的測定
　　取5批供試品，按“2.2.2”制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，結(jié)果見表2，典型色譜圖如圖1所示。
　　
　　3 討論
　　3.1提取方法的選擇
　　本研究比較了超聲提取法與回流提取法對歐前胡素與異歐前胡素提取率的影響，回流提取與超聲提取無明顯差異，因超聲法簡便，故采用超聲提取法。
　　3.2色譜條件的選擇
　　對流動相甲醇-水的比例進(jìn)行的考察結(jié)果表明，甲醇-水（80∶20）時，歐前胡素、異歐前胡素與其他組分分離效果不好；甲醇-水（50∶50）時，洗脫時間較長。故選擇甲醇-水（70∶30）作為流動相，分離度良好，保留時間適宜。柱溫分別考察了25℃、30℃、35℃，結(jié)果表明35℃時柱壓較小，分離效果好。
　　[參考文獻(xiàn)]
　　[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:97-98.
　　[2] 鄧捷圓,高廣慧,趙春杰,等.HPLC法同時測定不同產(chǎn)地白芷中2種香豆素的含量[J].中草藥,2004,33(5):354-357.
　　[3] 賈敏如,王夢月,金曲嫫,等.HPLC測定13種白芷中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].華西藥學(xué)雜志,2003,18(5):361-362.
　　[4] 胡華杰,樓招歡,呂圭源,等.HPLC測定不同產(chǎn)地白芷飲片中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2010,34(3):418-419.
　　[5] 樊平,孫寧,劉冰,等.HPLC法測定白芷酊中歐前胡素的含量[J].中國藥房,2010,21(23):2179.
　　[6] 張慧,海廣泛,尹志奎,等.高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地白芷中歐前胡素和異歐前胡素含量[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009,26(2):138-140.
　　（收稿日期：2011-03-07）
　　[通訊作者] 王云龍（1978-），男，本科，黑龍江省雞西市人，從事中藥質(zhì)量檢驗。

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