RP-HPLC-ELSD法測定野生白花丹藥材1~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量

　　摘要：目的：測定野生白花丹藥材1~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量。方法：采用HPLC-ELSD法測定白花丹中β-谷甾醇的含量。色譜條件為：流動相為純甲醇；色譜柱為迪馬C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速為1.0 mL/min；柱溫25 ℃；蒸發(fā)光散射檢測器檢測參數(shù)為漂移管溫度65 ℃，載氣（N2）流速為2.5 L/min。結(jié)果：白花丹葉中β-谷甾醇的含量最高，其次是莖，根中含量最少；3、5、7、8月份采收的藥材中含量最高，11、12月最低。結(jié)論：以β-谷甾醇為主要成分指標(biāo)時最佳入藥部位為葉，最佳采收期在3、5、7、8月份。
　　關(guān)鍵詞：野生白花丹；β-谷甾醇；含量測定；RP-HPLC-ELSD
　　中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B
　　文章編號：1007-2349（2012）02-0055-02
　　
　　白花丹是雙子葉植物藍(lán)雪科植物白雪花（Plumbago zeylanica L.）的全草［1］。為多民族醫(yī)常用藥材，民間應(yīng)用廣泛，具有散瘀消腫、祛風(fēng)止痛等功效［1］。收載于1996年版《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》第二冊和1998年版國家衛(wèi)生部部頒維藥標(biāo)準(zhǔn)。文獻(xiàn)資料及本課題組前期的研究表明，白花丹具有抗腫瘤、抗炎、抗肝損傷等藥理作用［2~8］。目前國內(nèi)外日益重視白花丹藥材的應(yīng)用和開發(fā)，除有效成分白花丹醌外，對其有效成分β-谷甾醇的研究報道較少。本實(shí)驗(yàn)擬對野生白花丹藥材1~12月份的根、莖、葉中的β-谷甾醇含量進(jìn)行測定，以期為白花丹野生變家種提供有用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　1實(shí)驗(yàn)材料
　　1.1儀器Waters 2695系列高效液相色譜儀（Waters公司），Empower色譜工作站，浙江大學(xué)N2000色譜工作站，Sedex-75型蒸發(fā)光散射檢測器（奧泰公司）；色譜柱為迪馬C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。METTLER AE 240雙量程分析天平。
　　1.2試藥β-谷甾醇對照品（成都市藥檢所，供含量測定用）；甲醇為色譜純；所用提取試劑均為分析純。
　　1.3藥材實(shí)驗(yàn)所用藥材樣品采自于白花丹最適產(chǎn)地云南西雙版納（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所南藥園），經(jīng)西南民族大學(xué)劉圓教授鑒定。
　　2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
　　2.1色譜條件色譜柱為迪馬C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為純甲醇；流速為1.0 mL/min；柱溫25 ℃；蒸發(fā)光散射檢測器檢測參數(shù)為漂移管溫度65 ℃，N2流速為2.5 L•min-1。色譜圖見圖1~圖2。
　　圖1β-谷甾醇對照品HPLC色譜圖（A）
　　圖2樣品HPLC色譜圖（B）
　　2.2對照品溶液的制備精密稱取β-谷甾醇對照品10.3 mg，用甲醇溶解于50 mL容量瓶中，制成0.103 mg/mL的溶液作為對照品。
　　2.3樣品溶液的制備精密稱取白花丹藥材樣品約3 g，置于索氏提取器中，精密加入150 mL的甲醇溶液，索氏提取3 h，取出放冷，揮去溶劑，用甲醇溶解于25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
　　2.4方法學(xué)考察
　　2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取β-谷甾醇對照品溶液，依選定色譜條件，測定不同進(jìn)樣量下β-谷甾醇的峰面積值，得回歸方程為：Y=1.500 5 X+5.683 6，r=0.998（n=6）。表明β-谷甾醇在0.103～2.575 μg范圍內(nèi)與峰面積值線性關(guān)系良好。
　　2.4.2精密度試驗(yàn)分別精密吸取β-谷甾醇10 μL，各重復(fù)進(jìn)樣6次，得RSD為0.015%，結(jié)果表明精密度良好。
　　2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品根溶液20 μL，按選定色譜條件下于0、2、4、6、8 h測定樣品溶液中β-谷甾醇峰面積值，得RSD為0.029%，表明樣品穩(wěn)定性良好。
　　2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)分別精密取同一白花丹根藥材6份，各約3 g，按樣品溶液制備項(xiàng)下方法制備樣品，按照選定的色譜條件測定6份樣品溶液中β-谷甾醇的含量，得RSD為1.284%。
　　2.4.5加樣回收率試驗(yàn)精確稱取已知含量的白花丹藥材9份，各約3.0 g，分別加入濃度為0.131 mg/mL β-谷甾醇對照品溶液，按樣品溶液制備方法制備并測定，結(jié)果見表1。
　　表1β-谷甾醇加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）
　　序號樣品含量
　�。╩g）加入量
　　（mg）測得量
　�。╩g）回收率
　�。�%）平均回收
　　率（%）RSD
　�。�%）11.89980.73302.635598.8621.89990.73302.635999.9731.89960.73302.635899.0241.89761.45203.3548100.2551.90071.45203.355598.99100.060.634061.89241.45203.336399.6171.90262.15504.0775100.5981.90092.15504.032299.2491.89452.15504.0694100.522.5樣品含量測定取白花丹野生1~12月份藥材根、莖、葉按2.3項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制備，進(jìn)樣量為10 μL，測定β-谷甾醇的含量，結(jié)果見表2。
　　表21~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量（n=3）
　　月份部位β-谷甾醇的含量
　�。�%）月份部位β-谷甾醇的含量
　�。�%）根0.06327根0.05811莖0.0631莖0.0605葉0.1092葉0.1297根0.04188根0.06082莖0.0595莖0.0596葉0.1244葉0.1207根0.04589根0.01123莖0.0874莖0.0738葉0.1367葉0.0898根0.064610根04莖0.0618莖0.0526葉0.0997葉0.1086根0.062811根0.06815莖0.0673莖0葉0.1251葉0.0621根0.048712根0.03786莖0.0621莖0.0435葉0.0842葉0.04243小結(jié)與討論
　　野生白花丹1~12月份藥材根中β-谷甾醇含量變化范圍為0 %～0.0681 %，莖中β-谷甾醇含量變化范圍為0 %～0.0874 %，葉中β-谷甾醇含量變化范圍為0.0424 %～0.1367 %。白花丹藥材中β-谷甾醇含量在葉中含量最高，根中含量最低或未檢出，說明有些少數(shù)民族地區(qū)采用葉來抗炎、消腫是有科學(xué)依據(jù)的。野生白花丹葉可作為再生資源。由含量變化可看出β-谷甾醇含量在3、5、7、8月份最高，冬季含量最低。
　　
　　參考文獻(xiàn)：
　�。�1］宋立人，洪 恂，丁緒亮，等.現(xiàn)代中藥學(xué)大詞典［M］.上冊.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：283.
　�。�2］甘炳春，楊新全，李榕濤.黎族民間治療外傷藥用植物的收集整理［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2005，77：357~360.
　�。�3］張秀蘭，史瑞芽.白花丹煎劑外洗治療瘡瘍206 例的護(hù)理［J］.護(hù)理學(xué)雜志，1993，8（5）：223.
　�。�4］趙霞，陸陽.不同劑量白花丹醌對豬多形白細(xì)胞中花生四烯酸的代謝產(chǎn)生相反作用［J］.中草藥，1996，27（5）：315.
　�。�5］趙鐵建，鐘振國，方卓，等.白花丹提取物抗小鼠肝纖維化作用的研究［J］.廣西中醫(yī)藥，2005，28（4）：50~52.
　　［6］趙艷麗，陸道培.白花丹醌對人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的體外效應(yīng)［J］.中國實(shí)驗(yàn)血液雜志，2006，14（2）：208~211.
　�。�7］劉圓，劉超，顏曉燕，等.白花丹不同提取部位體外抗腫瘤及急毒研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2007，23（4）：557~558.
　�。�8］張吉仲，劉圓，焦?jié)?白花丹不同有機(jī)溶劑提取物和白花丹醌對移植性乳腺癌和S180肉瘤的作用［J］.2008，24（8）：1040~1043.
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