初均速法預(yù)測補(bǔ)骨脂藥材的有效期

　　[摘要] 目的：用初均速溫度加速實(shí)驗(yàn)法研究不同溫度下藥材補(bǔ)骨脂中有效成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總含量變化情況，預(yù)測補(bǔ)骨脂在室溫（25 ℃）條件下的有效期，為評價(jià)其質(zhì)量提供依據(jù)。方法：以lnV（V為反應(yīng)初始速度）代替lnK（K為反應(yīng)速率常數(shù)）對1/（T+273.15）作 Arrhenius圖的直線，以直線斜率求活化能E_a，直線外推得室溫下貯存期。結(jié)果：補(bǔ)骨脂在室溫條件下貯存期為0.53年。結(jié)論：高溫不利于補(bǔ)骨脂的穩(wěn)定，需置于避光陰涼處保存。
　　[關(guān)鍵詞] 初均速法；有效期；補(bǔ)骨脂；高效液相色譜法
　　補(bǔ)骨脂Psoralea corylifolia為中國和印度等國的傳統(tǒng)民間常用藥，具有溫腎助陽、納氣止瀉的功效，臨床上用于治療腎虛作喘、腎虛腰酸、腹痛泄瀉、遺尿尿頻、陽痿、遺精、早泄、出血熱等^[1]。近年來國內(nèi)外學(xué)者研究表明補(bǔ)骨脂具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、治療骨質(zhì)疏松、白癜風(fēng)、平喘、清除膽汁、抗良性前列腺增生、肝藥酶誘導(dǎo)、抗菌、抗病毒等作用^[2]。目前對補(bǔ)骨脂藥理活性的研究比較廣泛和深入，但其穩(wěn)定性的研究報(bào)道未見。
　　為了考察補(bǔ)骨脂的穩(wěn)定性，本文以2010年版《中國藥典》收載補(bǔ)骨脂的質(zhì)量評價(jià)以補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的總含量為依據(jù)，其含量測定法為高效液相色譜法，故本實(shí)驗(yàn)用HPLC測定這2種成分的總含量，預(yù)測補(bǔ)骨脂的有效期，為評價(jià)其質(zhì)量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　1 材料
　　島津高效液相色譜儀LC- 2010AHT，自動進(jìn)樣器，CLASS-VP工作站，SPD- 10AVP紫外-可見檢測器，KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）， 101 型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京中興偉業(yè)儀器有限公司），電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。
　　甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余所用試劑均為分析純。
　　補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對照品由四川省維克奇生物科技有限公司提供，純度≥98%，批號分別為110614，110622。補(bǔ)骨脂藥材產(chǎn)地重慶合川。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量測定
　　2.1.1 色譜條件 RP-C₁₈色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相甲醇-水（55∶45），流速0.85 mL·min^-1，柱溫30 ℃，檢測波長245 nm，進(jìn)樣量5 μL。
　　2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對照品各1.0 mg，于50 mL量瓶中，加甲醇（色譜純）溶解，定容，制成質(zhì)量濃度均為20 mg·L^-1的混合對照品溶液。
　　2.1.3 供試品溶液的制備 取本品粉末（過40目篩）約0.25 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加甲醇（分析純）50 mL，稱定質(zhì)量，超聲30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
　　2.1.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素混合對照品溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件，依次進(jìn)樣0.5，1，2，4，6，8，10 μL，記錄各組分峰面積。以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)作回歸，計(jì)算回歸方程。補(bǔ)骨脂素的回歸方程為Y=2.6×10₇X-3 380.8，r=1.000 0，線性范圍0.01 ～0.20 μg；異補(bǔ)骨脂素的回歸方程為Y=1.3×10₇X-5 250.6，r=1.000 0，線性范圍0.01～0.20 μg。
　　2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素混合對照品溶液6 μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，求得補(bǔ)骨脂和異補(bǔ)骨脂素的峰面積積分值的RSD分別為0.46%，0.89%，表明儀器的精密度良好。
　　2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取補(bǔ)骨脂樣品，按2.1.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別在0，3，6，9，12，24 h依法測定，補(bǔ)骨脂和異補(bǔ)骨脂素峰面積的RSD分別為1.0%，0.76%，結(jié)果表明供試液中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
　　2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取補(bǔ)骨脂樣品6份，按2.1.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣5 μL，結(jié)果補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的RSD分別為0.76%，1.3%，表明本實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。
　　2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量的補(bǔ)骨脂粉末（過40目篩）6份，每份為130 mg，加入一定量的對照品，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣5 μL，補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的加樣回收率分別為99.77%，98.72%，RSD分別為1.2%，1.4%。
　　2.2 初均速法預(yù)測補(bǔ)骨脂的有效期
　　將補(bǔ)骨脂分裝為7份，分別置于恒溫干燥箱（恒溫±0.2 ℃）中，于80，85，90，95，100，105，110 ℃下分別放置56，42，30，20，12，6，2 h，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)取出補(bǔ)骨脂，然后立即冷卻至室溫。每組精密稱取樣品3份，按2.1.3項(xiàng)下方法制成溶液，按上述色譜條件測定。 以室溫下補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素含量分別為100%，計(jì)算各溫度下的含量變化，以初均速法預(yù)測補(bǔ)骨脂有效期，結(jié)果見表1。
　　2.3 數(shù)據(jù)處理
　　通過實(shí)驗(yàn)得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在不同溫度下的總分解速率V和lgV，見表1。
　　根據(jù)Arrhenius定律，以表1中的1/（T+273.15）為橫坐標(biāo)（X）、lnV為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=-12 952X+30.497，r=0.892 1，標(biāo)準(zhǔn)偏差s=1.094 7，〡r〡>r_0.01，5=0.874 5，線性關(guān)系顯著。
　　當(dāng)T=25 ℃時(shí)，lnV_{25 ℃}=-12.944 2，即V_{25 ℃}=2.390 0×10^-6。當(dāng)α=0.1，f=7時(shí)，t₁-α/2，5=2.015 0，則lnV_{25 ℃}=-12.944 2±2.205 8。根據(jù)公式t_0.9，25 ℃=（100%-90%）/V_{25 ℃}，得上限為43.36年，下限為0.53年。

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