高原野生瀕危藥材獨(dú)一味的組培快繁技術(shù)研究

　�。ㄇ嗪�師范大學(xué)生命與地理科學(xué)學(xué)院，青海西寧 810008）??
　　摘要 ［目的］探究獨(dú)一味組培快繁技術(shù)體系，保護(hù)并合理利用獨(dú)一味資源。［方法］選取獨(dú)一味無菌苗的子葉、嫩芽和幼根為外植體，采用不同類型的培養(yǎng)基和不同種類的植物生長調(diào)節(jié)劑進(jìn)行組培快繁研究。［結(jié)果］獨(dú)一味幼葉、嫩芽和幼根均可誘導(dǎo)出愈傷組織，其中幼根的愈傷組織誘導(dǎo)率最高，達(dá)93.5%，出愈時(shí)間為7 d，最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS＋1.0 mg/L 2，4?D+0.5 mg/L 6?BA＋0.5 mg/L NAA；叢生芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為 MS＋1.0 mg/L 6?BA＋0.5 mg/L NAA，誘導(dǎo)率達(dá)88.8%；生根的適宜培養(yǎng)基為 1/2 MS＋0.5 mg/L NAA，誘導(dǎo)率高達(dá)97.9%。［結(jié)論］利用組織培養(yǎng)技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)獨(dú)一味的快速繁殖，為獨(dú)一味資源的可持續(xù)利用提供參考。
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　　關(guān)鍵詞 獨(dú)一味［?Lamiophlomis rotata?（Benth.）Kudo］；組織培養(yǎng)；愈傷組織；植物生長調(diào)節(jié)劑
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　　中圖分類號(hào) S?567.239文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2014）19-06133-03
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　　Research on the Tissue Culture of ?Lamiophlomis rotate? (Benth.) Kudo?
　　WANG Hui?chun et al
　　(College of Life and Geography, Qinghai Normal University, Xining, Qinghai 810008) ?
　　Abstract ［Objective］ It is of significance to establish tissue culture system of ?Lamiophlomis rotata?(Benth.) Kudo in order to rationally protect and utilize its resources. ［Method］ The cotyledons, tender shoots and tender roots of the aseptic seedling as explants were cultured in the media with different plant growth regulators to find out more reasonable medium formula for the induction of callus, cluster buds and rooting. ［Results］ The tender roots were the optimal explants with the highest callus induction rate（93.5%）and the shortest induction time (7 d), and the best medium for callus induction was MS＋1.0 mg/L 2,4?D+0.5 mg/L 6?BA＋0.5 mg/L NAA; The optimal medium for cluster buds induction was MS＋1.0 mg/L 6?BA＋0.5 mg/L NAA, induction rate was 88.8%; The optimal medium for rooting culture was ?1/2 MS＋?0.5 mg/L NAA, in which the frequency roots reached 97.9%. ［Conclusion］ This effective approach for rapid propagation would better ensure the sustainable use of ?Lamiophlomis rotata?(Benth.) Kudo.?
　　Key words ?Lamiophlomis rotata?(Benth.) Kudo; Tissue culture; Callus; Plant growth regulator
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　　基金項(xiàng)目 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31260127)；教育部科學(xué)技術(shù)重點(diǎn)項(xiàng)目（209133）；青海省科技廳國際合作項(xiàng)目（2010?H?809）；青海師范大學(xué)科技創(chuàng)新項(xiàng)目（019040910）；青海師范大學(xué)教學(xué)研究項(xiàng)目（20123626）。
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　　作者簡介 王慧春（1974-）,女,青海海東人，副教授,博士,從事青藏高原藥用植物資源的可持續(xù)利用研究。
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　　收稿日期 2014?06?05
　　獨(dú)一味［?Lamiophlomis rotata?（Benth.）Kudo］為唇形科獨(dú)一味屬僅有的一種植物，是多年生草本植物，全草入藥，是我國藏、蒙、納西等民族民間常用草藥之一，具有較高的藥用價(jià)值與經(jīng)濟(jì)價(jià)值??［1-2］?。獨(dú)一味野生資源主要分布于青海、甘肅、四川、西藏等地，蘊(yùn)藏量為3 713~6 896 t，年允收量為?908~?1 675 t，但年實(shí)際采收量為 2 520 t；獨(dú)一味采挖地上部分之后，恢復(fù)到藥用價(jià)值的周期一般為4年，高海拔地區(qū)在5年以上，使該資源的利用變得不可持續(xù)??［3］?。很多采挖過度的產(chǎn)地，植株極其矮小，加之草地退化與沙化，導(dǎo)致獨(dú)一味資源種群退化相當(dāng)嚴(yán)重，野生撫育尚存在諸多困難??［4］?。2000年已將其列為一級(jí)瀕危藏藥品種??［5］?。因此，為了滿足人們對(duì)獨(dú)一味藥材日益增長的需求，在加強(qiáng)野生資源保護(hù)的前提下，應(yīng)加強(qiáng)人工繁殖，組織培養(yǎng)則是當(dāng)前最有效的繁殖手段??［6-7］?。筆者初步探討?yīng)氁晃督M織培養(yǎng)條件，旨在為獨(dú)一味的可持續(xù)利用奠定基礎(chǔ)。 ?
　　1 材料與方法?
　　1.1 材料 將采自青海果洛地區(qū)的野生獨(dú)一味［?Lamiophlomis rotate?（Benth.）Kudo］種子用 0.2%升汞滅菌8 min，用無菌水反復(fù)沖洗后，接種到MS無激素培養(yǎng)基上。培養(yǎng)3周后長出無菌幼苗。?
　　1.2 方法?
　　1.2.1 培養(yǎng)條件。培養(yǎng)基（pH 5.8）在 121 ℃、131 kPa 的條件下滅菌 20 min。光源為日光燈，光照強(qiáng)度設(shè)置為2 000~?3 000 lx?，光照16 h/d，培養(yǎng)溫度為（25±1）℃，在RXZ 智能人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行。?
　　1.2.2 基本培養(yǎng)基和外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響。在無菌條件下，將無菌苗幼葉切成約 0.5 cm×0.5 cm 的小塊，嫩芽和幼根切成0.5 cm 的切段，分別接種在附加有0.5 mg/L 6?BA，1 mg/L 2，4?D，0.5 mg/L NAA的 MS、B?5、N?6和 White的培養(yǎng)基上，每處理50個(gè)外植體，重復(fù)3次。觀察各培養(yǎng)基上外植體產(chǎn)生愈傷組織情況，30 d后，統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率（愈傷誘導(dǎo)率（%）=愈傷組織數(shù)/接種后未污染的外植體?數(shù)×?100）。?
　　1.2.3 植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響。將0.5 cm左右的幼根切段分別接種到附加不同質(zhì)量濃度 6?BA、NAA、2，4?D的MS基本培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)。每處理50個(gè)外植體，重復(fù)3次。觀察并記錄愈傷組織產(chǎn)生情況，30 d后，統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率。?

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