RP—HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地白蘞藥材中沒(méi)食子酸的含量

　　摘要 [目的]建立白蘞藥材中沒(méi)食子酸的RP-HPLC含量測(cè)定方法，為白蘞藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供依據(jù)。[方法]采用Dikma Diamonsil C18（250×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以乙腈- 0.2%磷酸（3∶97）為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫。流速為1.0 ml/min，柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。[結(jié)果]沒(méi)食子酸檢測(cè)濃度在3.15～202 μg/ml的范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（R2=0.999 9）；平均回收率為102.8%，RSD為1.15%。[結(jié)論]該方法快速，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，操作簡(jiǎn)便，可用于白蘞藥材的質(zhì)量控制。
　　關(guān)鍵詞 白蘞；沒(méi)食子酸；反相高效液相色譜法；質(zhì)量控制
　　中圖分類(lèi)號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）04-108-03
　　白蘞（Ampelopsis japonica（ Thunb·）Makino），葡萄科植物，又名野葡萄秧、鵝抱蛋、白草等。據(jù)《中藥大辭典》記載，白蘞以塊根入藥，具有清熱解毒、生肌止疼、消腫的功效，既可內(nèi)服，又可外敷，主要用于醫(yī)治癰腫瘡瘍、燙傷、扭挫傷等[1-2]。臨床廣泛應(yīng)用于治療化膿性皮膚感染、細(xì)菌性痢疾等疾病，療效顯著[3-4]。現(xiàn)代研究表明白蘞中主要含有沒(méi)食子酸、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、蘆薈大黃素、羽扇豆醇等化合物，沒(méi)食子酸為白蘞中抗菌、抗病毒的主要藥效成分，且其含量較高[5-6]。目前在藥典中，白蘞藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有定性分析而無(wú)定量分析。為更好地控制白蘞生藥材質(zhì)量，更好地利用白蘞生藥資源和適應(yīng)中藥現(xiàn)代化的發(fā)展要求，該研究基于2015年版《中國(guó)藥典》科研課題，采用定量研究白蘞中沒(méi)食子酸含量的高低來(lái)評(píng)價(jià)白斂生藥材質(zhì)量，以期為制定白蘞藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供科學(xué)依據(jù)。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 研究對(duì)象。白蘞干燥藥材由第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院藥材科提供，經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)征醫(yī)院陳萬(wàn)生教授鑒定為白蘞A.japonica。
　　1.1.2 主要儀器。Agilent 1260 HPLC系統(tǒng)（Agilent Technologies，美國(guó)），包括G1311A四元泵、G1322A真空脫氣機(jī)、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱和G4212B DAD檢測(cè)器，使用Chem Station軟件數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；BAS124S-CW萬(wàn)分之一電子分析天平（Sartorius，德國(guó)）；BP110S十萬(wàn)分之一電子分析天平（Sartorius，德國(guó)）；XW-01定時(shí)可調(diào)速漩渦混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；KUDOS SK7200H 超聲波清洗器（上�？茖�(dǎo)超聲儀器有限公司）；TDL-4A 低速離心機(jī)（上海菲恰爾分析儀器有限公司）；AG 22331 Humberg超高速離心機(jī)（Eppendorf，德國(guó)）；Eppendorf Research plus 可調(diào)量程移液器（Eppendorf，德國(guó)）。
　　1.1.3 主要試劑。沒(méi)食子酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)110831-201204）；甲醇和乙腈均為色譜純?cè)噭�（Fisher Scientific，美國(guó)）；甲酸和磷酸均為色譜級(jí)試劑；水為超純水。
　　1.2 方法
　　1.2.1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，加50%甲醇溶液制成每1 ml含202 μg的溶液，即得。
　　1.2.2 供試品溶液的制備。取本品粉末（過(guò)四號(hào)篩）5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理60 min后，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
　　1.2.3 色譜分析條件。色譜柱Dikma Diamonsil C18（250×4.6 mm，5 μm），柱號(hào)99903；乙腈-0.2%磷酸（3∶97）為流動(dòng)相；流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)器為DAD，波長(zhǎng)為270 nm。
　　1.2.4 方法學(xué)考察。
　　1.2.4.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。分別吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μl，在“1.2.3”色譜條件下，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，考察系統(tǒng)適應(yīng)性。
　　1.2.4.2 線(xiàn)性關(guān)系的考察。將沒(méi)食子酸對(duì)照品貯備液用50%甲醇稀釋制成每1 ml含202、 101、50.5、25.25、12.625、6.312 5、3.156 25 μg的系列溶液，分別吸取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣濃度X（μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算線(xiàn)性回歸方程。
　　1.2.4.3 檢測(cè)限和定量限的考察。將沒(méi)食子酸對(duì)照品逐步稀釋后進(jìn)樣測(cè)定，以色譜圖中信噪比（S/N）為3時(shí)的進(jìn)樣量為最低檢測(cè)限（LOD），信噪比（S/N）為10時(shí)的進(jìn)樣量為最低定量限（LOQ）。
　　1.2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試樣品溶液，按“1.2.3”項(xiàng)色譜分析條件分別于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量10 μl，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算RSD。
　　1.2.4.5 精密度試驗(yàn)。取按“1.2.1”方法制備的對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積的RSD值。
　　1.2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)的樣品按“1.2.2”方法制備供試品溶液6份（樣品批號(hào)為白蘞02），按“1.2.3”項(xiàng)下色譜分析條件，進(jìn)樣量為10 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算平均含量和RSD。
　　1.2.4.7 加樣回收試驗(yàn)。取同一批號(hào)已知含量的樣品6份（樣品批號(hào)為白蘞02），精密加入分別與樣品中沒(méi)食子酸含量相等的對(duì)照品，按“1.2.2”方法制備供試品溶液，再按“1.2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量為10 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算平均回收率和RSD。

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