比色法測(cè)定鐵皮石斛藥材中多糖的含量

　　摘 要：本文為了比較考察組培移栽和野生鐵皮石斛藥材中的多糖含量。以苯酚-濃硫酸法，多糖水解成單糖并脫水生成糖醛衍生物，與苯酚縮合成橙黃色化合物，在490nm處比色測(cè)定吸收度，并以葡萄糖為對(duì)照品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定樣品的多糖含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線葡萄糖含量在0.0～100.0μg范圍內(nèi)線性良好，r =0.9998。組培移栽和野生鐵皮石斛藥材的多糖含量分別為13.11%和14.37%。 結(jié)構(gòu)表明苯酚-濃硫酸法測(cè)定多糖準(zhǔn)確穩(wěn)定、簡便易行，組培移栽和野生的鐵皮石斛藥材多糖含量相當(dāng)。
　　關(guān)鍵詞：鐵皮石斛；多糖；含量測(cè)定
　　中圖分類號(hào)：S567.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20151131011
　　鐵皮石斛是一種名貴的具有養(yǎng)陰補(bǔ)益作用的中藥材�！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載，鐵皮石斛“補(bǔ)五臟虛勞羸瘦、強(qiáng)陰、久服厚腸胃�！薄侗静菥V目》中評(píng)價(jià)鐵皮石斛“強(qiáng)陰益精，久服厚腸胃，補(bǔ)內(nèi)絕不足，平胃氣，長肌肉，輕身延年......�！�2010年版《中國藥典》記載其功能與主治為“益胃生津，滋陰清熱。用于陰傷津虧，口干煩渴，食少干嘔，病后虛熱，目暗不明�！�
　　由于鐵皮石斛野生藥材來源稀少，不能滿足市場(chǎng)需求，現(xiàn)組培繁殖移栽的種植方法發(fā)展很快。由于鐵皮石斛中的多糖是主要的活性成分，為更好地了解和控制藥材品質(zhì)，本文對(duì)組培移栽和野生的鐵皮石斛藥材樣品的多糖含量進(jìn)行了比較考察。
　　1 儀器與試藥
　　儀器：UV-1900 紫外-可見分光光度計(jì)，sartorius BS110S電子分析天平（德國）；試劑：硫酸，無水乙醇，苯酚均為分析純；對(duì)照品：無水葡萄糖（HPLC法含量98.82%），使用前于105℃恒溫烘干至恒重；樣品：組培移栽樣品由學(xué)院相關(guān)老師提供，野生藥材樣品購自金華市九德堂藥店
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
　　2.1.1 對(duì)照品貯備液的制備
　　精密稱取0.1012g葡萄糖對(duì)照品于100mL燒杯中，加水溶解，定容至1000mL容量瓶中，搖勻，即得葡萄糖對(duì)照品貯備液（100μg·mL-1）。
　　2.1.2 對(duì)照品溶液的制備及比色測(cè)定
　　分別吸取0、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL的葡萄糖對(duì)照品貯備液（100μg·mL-1）置20mL具塞試管中，用蒸餾水補(bǔ)至1.0mL，分別得到質(zhì)量濃度為0、20、40、60、80和100μg·mL-1的系列對(duì)照品溶液。向各溶液中加入1.0mL苯酚溶液（5%），然后快速加入5.0mL濃硫酸（于液面垂直加入，勿接觸試管壁，以便與反應(yīng)液充分混合），靜置10min，振搖使反應(yīng)液充分混合，沸水浴中加熱15min，冷水冷卻至室溫，在490nm處測(cè)定吸光度。
　　2.1.3 線性關(guān)系考察
　　以葡萄糖質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，并作線性回歸，得到吸光度A與質(zhì)量濃度C的回歸方程為：A=0.0070C+ 0.0022， r= 0.9998（n=6），葡萄糖濃度在0～100μg范圍內(nèi)線性良好。見圖1。
　　2.2 樣品的測(cè)定
　　2.2.1 供試品溶液的制備
　　取烘干后樣品0.lg，加入80%乙醇10mL，回流1h，過濾。收集藥渣，往其中再次加入80% 乙醇，重復(fù)上述步驟2次，以去除樣品中可能含有的甙類等干擾性成分。乙醇提取后的藥渣加入3mL 蒸餾水，沸水浴提取1h 后過濾，收集提取液，藥渣重復(fù)提取2次，合并3次所得提取液定容至10mL 后稀釋100 倍；取1mL置20mL具塞試管中，加苯酚試劑1mL 混勻，再加濃硫酸5mL，混勻，靜置5min，沸水浴中加熱15min，冷水冷卻至室溫，即得樣品溶液。
　　2.2.2 藥材樣品的多糖含量
　　上述樣品溶液于490nm 處比色測(cè)定吸收度，重復(fù)3次，同時(shí)作空白試驗(yàn)。在葡萄糖對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品溶液的糖含量，并根據(jù)投料量、稀釋倍數(shù)計(jì)算藥材中的多糖含量。結(jié)果組培移栽的鐵皮石斛藥材中的多糖平均含量為13.11%，野生鐵皮石斛藥材的多糖平均含量為14.37%。
　　3 討 論
　　石斛這一藥材在2005年版和2010年版《中國藥典》中均有收載，其中在2010年版藥典中還增加了含量測(cè)定項(xiàng)目，規(guī)定石斛堿含量不少于0.40%，毛蘭素含量不少于0.03%[1]。這些特征性成分雖然對(duì)于控制藥材質(zhì)量有重要作用，但作者認(rèn)為多糖是鐵皮石斛中的主要有效成分。鐵皮石斛具有明顯的提高免疫功能的作用，這與多糖的基本活性是一致的。本文稿主要選取多糖指標(biāo)來考察組培移栽與野生藥材的品質(zhì)。
　　李滿飛等提出的苯酚-濃硫酸法測(cè)定多糖含量，在后來的相關(guān)研究中得到了廣泛的應(yīng)用[2]。本文研究結(jié)果表明組培移栽和野生鐵皮石斛藥材的多糖含量分別為13.11%和14.37%，2者相當(dāng)。說明組培移栽的方法種植鐵皮石斛以替代野生藥材是可行的，可以緩解野生鐵皮石斛藥材匱乏的問題。何鐵光等[3]經(jīng)測(cè)定野生鐵皮石斛1a生莖多糖含量為148. 94mg/g，多年生莖多糖含量為268. 21mg/g，提示本研究中所用的野生鐵皮石斛藥材是1a生的。
　　參考文獻(xiàn)
　　[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：85-87.
　　[2] 李滿飛，徐國鈞，平田正等.中藥石斛類多糖的含量測(cè)定[J].中草藥， 1990，21（10）：10-12.
　　[3] 何鐵光，蘇江，王燦琴等.鐵皮石斛不同來源材料多糖和氨基酸含量的比較[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，38（1）：32-34.
　　作者簡介：鄭柏勤（1966- ），男，副教授、高工，從事生物制藥教學(xué)與科研工作。

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