丹參藥材中丹參酮ⅡA的提取工藝優(yōu)化及研究分析

　　摘 要：建立了乙醇-乙醚浸提法提取丹參藥材中丹參酮ⅡA的工藝，并采用液-液分配法對提取液進行純化，高效液相色譜測定丹參酮ⅡA的含量。通過單因素實驗研究了不同因素對丹參酮ⅡA提取率的影響，并進行正交試驗。優(yōu)化后得出最佳工藝條件為： 料液比1：25，乙醚比例20%，提取溫度50 ℃，提取時間50 min。在此工藝條件下進行試驗，丹參酮ⅡA的提取率為0.187%。優(yōu)化后的方法成本低，毒性低，重復性好，操作簡便，適合應用于工業(yè)化生產(chǎn)。
　　關 鍵 詞：丹參酮ⅡA；乙醇-乙醚；純化；正交試驗
　　中圖分類號：TQ 283 文獻標識碼： A 文章編號： 1671-0460（2016）08-1753-03
　　Abstract： An ethanol-ether extraction process was developed to extract tanshinone ⅡA from Salvia miltiorrhiza，and the extract was purified with liquid-liquid partition method， finally it was detected by HPLC. The effect of different factors on the extraction rate was studied by the single factor experiment， and the orthogonal experiment was designed to optimize the process parameters. The optimum process parameters were obtained as follows： solid-liquid ratio 1：25， the ether dosage 20 %， extraction temperature 50 ℃， extraction time 50 min； under above conditions， the extraction rate can be 0.187 %. The optimized process has low cost， low toxicity and good repeatability， so it can be used in industrial production.
　　Key words： tanshinone ⅡA； ethanol - ether； purification； orthogonal experiment
　　丹參酮亦稱總丹參酮，是從中藥丹參（唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza bunge根）中提取的具有抑菌作用的脂溶性菲醌化合物，其主要化學成分為丹參酮ⅡA，對肺癌細胞的增殖有抑制和誘導凋亡的作用。研究表明，丹參酮ⅡA在抗感染，降血脂，心肌修復等方面體現(xiàn)出優(yōu)異的效果[1，2]，長期服用未見有明顯副作用。經(jīng)臨床試用證明丹參酮ⅡA對心絞痛治療效果顯著，副作用小，對治療冠心病的新藥開發(fā)具有重大意義[3，4]。
　　目前，丹參酮ⅡA的提取工藝主要為超聲提取法、加熱回流法、水煎煮法和CO2超臨界流體萃取法等。其中加熱回流法耗時長，提取裝置復雜，而水煎煮法需提取的次數(shù)較多，CO2超臨界流體萃取法則成本較高，因此難以應用于實際生產(chǎn)中[1，5-7]。而超聲提取法操作簡單，提取因素容易優(yōu)化，成本較低，相比于其他方法能更廣泛地應用于實際生產(chǎn)中。由于丹參酮ⅡA可溶于甲醇、乙醇、氯仿和乙醚等有機溶劑中，因此本研究對比各溶劑對丹參酮ⅡA的提取率后，采用乙醇-乙醚混合溶液對丹參酮ⅡA進行提取，然后通過正交實驗得出最佳工藝[8-11]。相比現(xiàn)時的丹參酮ⅡA提取方法，全有機溶劑提取簡化了晶體析出工藝，提高了丹參酮ⅡA的含量，簡化了操作和節(jié)約了人工和原料成本，適合應用于大批量的生產(chǎn)。
　　1 實驗部分
　　1.1 材料、試劑與儀器
　　丹參（購于廣州市）；無水乙醇，乙醚，無水碳酸鈉（分析純，廣州試劑廠），甲醇（色譜純，美國Fisher公司），一級實驗用水，丹參酮標準品（≥98%，Aladdin Industrial Corporation）；25 mL具塞比色管，TD-6M臺式低速離心機，DZF-1B（6050）真空干燥箱，hh4數(shù)顯恒溫水浴鍋，IKA 81M/A 10分析研磨機；IKA MS3 基本型圓周振蕩器；SCQ-Y300A超聲波恒溫水浴鍋；Agilent 1260液相（四元低壓+二極管陣列檢測器+柱溫箱+自動進樣器）。
　　1.2 試驗方法
　　將丹參藥材置于真空干燥箱45 ℃烘干至恒重，粉碎，過三號篩待用。準確稱取0.5 g（精確至0.000 1 g）丹參粉與25 mL比色管中，加入12.5 mL乙醇-乙醚（80：20）提取液后加蓋置于50 ℃恒溫水浴中，超聲50 min后放冷至室溫，用乙醇-乙醚提取液稀釋至刻度線，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心3 min后取上清液5 mL于50 mL燒杯中于70 ℃水浴中蒸至近干。加入5 mL乙醚并轉(zhuǎn)移至25 mL比色管中，往其中加入，10 mL 5 % Na2CO3溶液，于振蕩器振搖30 s，靜置分層后移出上層乙醚至50 mL燒杯中于70 ℃水浴中再次蒸至近干，用無水乙醇少量多次沖洗燒杯，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，并稀釋至刻度線，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，待液相分析。
　　1.3 分析方法
　　1.3.1 色譜條件
　　色譜柱：Phenomenex Gemini C18 （250 mm×4.6 mm× 5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：甲醇：水（85：15）；進樣量：10 ?L；分析時間為20 min；流速：0.8 毫升/分；設置波長：200～390 nm；提取波長：269 nm。

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