QuEChERS結(jié)合HPLC—MS/MS法測(cè)定鮮煙葉中的2種抑芽劑

　　摘要：建立鮮煙葉中二甲戊樂(lè)靈、仲丁靈2種抑芽劑的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）檢測(cè)方法。以乙腈為提取溶劑，對(duì)鮮煙葉中2種抑芽劑進(jìn)行提取，采用新型復(fù)合吸附劑的QuEChERS凈化方法，用N-丙基乙二胺（PSA）、C18和石墨化碳黑（GCB）3種復(fù)合吸附劑凈化，HPLC-MS/MS測(cè)定，以電噴霧正離子模式（ESI+），iFunnel離子聚焦，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式下進(jìn)行檢測(cè)，基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量。通過(guò)優(yōu)化條件，在10～500 μg/kg范圍內(nèi)，二甲戊樂(lè)靈、仲丁靈的檢測(cè)線性相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.995，檢出限（LOD）為1.5～2.4 μg/kg，定量限（LOQ）為5.0～7.9 μg/kg，在3個(gè)添加水平下的回收率范圍88.1%～96.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.2%～9.3%。試驗(yàn)方法可用于鮮煙葉中二甲戊樂(lè)靈、仲丁靈抑芽劑的準(zhǔn)確測(cè)定。
　　關(guān)鍵詞： QuEChERS；復(fù)合吸附劑；抑芽劑；鮮煙葉；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）
　　中圖分類號(hào)：O657.7；TS41+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）11-2888-04
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.045
　　煙草抑芽劑主要包括馬來(lái)酰肼、二甲戊樂(lè)靈、仲丁靈和氟節(jié)胺4種，可以提高煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)，其中二甲戊樂(lè)靈、仲丁靈（圖1）在煙葉中的殘留量較低，成為了目前成熟、研究多、應(yīng)用廣泛的2種煙草抑芽劑[1，2]，但有研究表明這2種抑芽劑可以毒害細(xì)胞并損害DNA，引發(fā)直腸癌和肺癌[3-5]。2014年，食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定二甲戊樂(lè)靈和仲丁靈這2種抑芽劑的每日允許攝入量（ADI）分別為0.03和0.2 mg/kg[6]。抑芽劑關(guān)系到煙草質(zhì)量安全，生產(chǎn)者需要對(duì)抑芽劑使用以及在鮮煙葉中的殘留進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以防止抑芽劑的濫用[7，8]。因此，建立快速、準(zhǔn)確、靈敏的鮮煙葉中抑芽劑的檢測(cè)方法迫在眉睫。
　　已有關(guān)于不同基質(zhì)中抑芽劑類物質(zhì)分析方法的研究報(bào)道，常見(jiàn)的前處理方法有液液萃�。↙LE）[9]、固相萃�。⊿PE）[10]、凝膠滲透色譜法（GPC）[11，12]和QuEChERS[13，14]，這幾種方法都存在一些不足之處，如LLE有機(jī)溶劑消耗量大，SPE操作復(fù)雜，GPC方法重現(xiàn)性不好。經(jīng)典的QuEChERS方法雖簡(jiǎn)便快速，但采用單一吸附劑難以去除鮮煙葉中對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)干擾較大的葉綠素、糖類、脂肪酸等雜質(zhì)，也無(wú)法適用于鮮煙葉中抑芽劑的殘留分析。關(guān)于鮮煙葉中抑芽劑的檢測(cè)方法，國(guó)內(nèi)鮮有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，本研究采用新型復(fù)合吸附劑的QuEChERs凈化方法，有效地去除鮮煙葉中雜質(zhì)的干擾，結(jié)合HPLC-MS/MS技術(shù)，能夠快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地測(cè)定鮮煙葉中二甲戊樂(lè)靈、仲丁靈2種抑芽劑的殘留。
　　1 材料與方法
　　1.1 儀器與試劑
　　儀器：Agilent 1290高效液相色譜儀、Agilent 6490三重四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）；渦旋混合器（美國(guó)Scientific Industries公司）；離心機(jī)（美國(guó)Beckman Coulter公司）；超純水系統(tǒng)（美國(guó)Millipore Milli-Q Gradient公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；氮吹儀（美國(guó)Caliper LifeSciences公司）；SR-2DS型水平振蕩器（日本TATEC公司）。
　　試劑：甲醇、乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher Scientific公司）；石墨化碳（GCB）、N-丙基乙二胺（PSA）、C18（天津Agela Technologies公司）；二甲戊樂(lè)靈、仲丁靈（德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司）；甲酸（色譜純，美國(guó)Sigma公司）；無(wú)水MgSO4、NaCl（分析純，上海國(guó)藥集團(tuán)）。
　　標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取二甲戊樂(lè)靈和仲丁靈標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.000 1 g），用甲醇分別溶解并配制成100.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；混合2種標(biāo)準(zhǔn)溶液，臨用前取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇稀釋成10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，儲(chǔ)存于4 ℃冰箱中備用。
　　1.2 試驗(yàn)方法
　　1.2.1 提取 取適量鮮煙葉，去除主脈，剪碎后放入均漿機(jī)中充分絞碎。準(zhǔn)確稱取絞碎的樣品2.0 g，置于50 mL具塞離心管中，加入10 mL乙腈，在水平振蕩器上振蕩提取10 min，然后加入1.0 g無(wú)水MgSO4和0.5 g NaCl，立即渦旋1 min，防止無(wú)水MgSO4結(jié)塊，最后以5 000 r/min離心8 min。
　　1.2.2 凈化 吸取2.0 mL離心后的上清液，將上清液轉(zhuǎn)移至裝有30 mg C18、50 mg PSA和10 mg GCB吸附劑的5.0 mL離心管中，渦旋2 min，5 000 r/min離心3 min。吸取1.0 mL的上清液，用氮?dú)獯抵两�干，殘留物用甲醇∶水�?∶1，V/V）定容至1.0 mL后過(guò)0.22 μm濾膜，供HPLC-MS/MS分析。
　　1.3 測(cè)試條件
　　高效液相色譜條件Agilent Eclipse XDB-C18 column（150 mm×4.6 mm，5 μm），在線過(guò)濾器（Agilent 公司）；流動(dòng)相A為甲醇，B為0.1%（V/V）甲酸水溶液；等度洗脫甲醇∶0.1%甲酸水（90∶10，V/V）；流速0.4 mL/min；運(yùn)行時(shí)間13.0 min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣體積5 μL。
　　質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI），正離子模式；毛細(xì)管電壓3 500 V；霧化氣壓力1.4×10-5 Pa（20 psi）；干燥氣溫度250 ℃；干燥氣流量15 L/min；鞘氣溫度300 ℃；鞘氣流量11 L/min；采集方式多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），其他參數(shù)見(jiàn)表1。

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