烤煙存儲(chǔ)期間煙葉酶活性變化的初步研究

　　摘要 [目的]探究初烤煙存儲(chǔ)過程中煙葉相關(guān)酶活性變化。[方法]以烤煙品種 NC89 為材料，研究皖南地區(qū)煙葉存儲(chǔ)過程中多酚氧化酶（PPO）、過氧化物酶（POD）、脂氧合酶（LOX）、苯丙氨酸裂解酶（PAL）活性隨存儲(chǔ)時(shí)間延長(zhǎng)的變化趨勢(shì)。[結(jié)果]隨著存儲(chǔ)時(shí)間變長(zhǎng)，幾種酶活性均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。其中多酚氧化酶、脂氧合酶和苯丙氨酸裂解酶活性在存儲(chǔ)180 d時(shí)分別達(dá)到最大值[50.50 U/g，34.20、0.54△OD/（g·min）]，而過氧化物酶活性則在存儲(chǔ)270 d時(shí)達(dá)到最大值（118.90 U/g）。[結(jié)論]該研究為進(jìn)一步豐富煙葉陳化理論，探究烤煙存儲(chǔ)質(zhì)量提升形成機(jī)理提供了參考。
　　關(guān)鍵詞 烤煙；存儲(chǔ)；酶活性
　　中圖分類號(hào) TS41+1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2018）15-0001-02
　　Abstract [Objective]To explore the activity changes of related enzymes in flue-cured tobacco leaves during storage. [Method]We studied the activity change trends of polyphenol oxidase （PPO）， peroxidase （POD）， lipoxygenase （LOX） and phenylalanine lyase （PAL） in tobacco leases with the extension of storage time based on NC89 flue-cured tobacco as experimental material in south Anhui. [Result]As the storage time increased， the activity of four enzymes showed a tendency of increasing first and then decreasing. The maximum activity of polyphenol oxidase， lipoxygenase and phenylalanine were reached when the tobacco were stored 180 days. The maximum were 50.50 U/g， 34.20， 0.54 △OD/（g·min）， respectively， while the peroxidase activity reached the maximum（118.90 U/g） when the tobacco were stored 270 days.[Conclusion]The study provides a reference for further eiching the theory of tobacco leaf aging and exploring the mechanism of improving the quality of flue-cured tobacco during storage.
　　Key words Flue-cured tobacco；Storage；Enzyme activity
　　煙葉陳化能夠改善煙葉的香味品質(zhì)，是提高煙葉可用性的重要環(huán)節(jié)[1]。在煙葉存儲(chǔ)期間，煙葉內(nèi)各種化學(xué)變化借助自然氣候的變化加速進(jìn)行，從而改善煙葉品質(zhì)和理化性狀，這一過程被稱為自然陳化。酶類是陳化過程中提高煙葉發(fā)酵質(zhì)量的動(dòng)力，是煙葉陳化的主要機(jī)理之一[2]�？緹煷鎯�(chǔ)過程中，在酶類的作用下烤煙煙葉中的多種物質(zhì)氧化分解形成重要的香氣成分，多酚氧化酶、過氧化物酶、脂氧合酶和苯丙氨酸裂解酶則是其中主要的酶類，對(duì)促進(jìn)煙葉陳化發(fā)酵、提高煙葉品質(zhì)具有積極作用。前人[3-6]對(duì)初烤煙存儲(chǔ)期間相關(guān)酶的活性變化進(jìn)行了大量的研究。為了進(jìn)一步豐富煙葉陳化理論、探究烤煙存儲(chǔ)質(zhì)量提升形成機(jī)理，筆者以皖南地區(qū)存儲(chǔ)烤煙為材料，研究了烤煙在陳化過程中多酚氧化酶、過氧化物酶、脂氧合酶、苯丙氨酸裂解酶活性的變化。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料
　　以烤煙品種NC89初烤煙為材料，烘烤后于自然條件下儲(chǔ)存。每隔45 d取1次樣，煙葉去主脈，干燥、粉碎后備用。
　　1.2 方法
　　1.2.1 多酚氧化酶活性測(cè)定。參照朱廣廉等[7]的方法：取1 g樣品，加入預(yù)冷的0.05 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.8）1 mL，研磨，再加1 mL緩沖液，傾入5 mL離心管，于4 ℃、10 000 r/min離心20 min，收集上清液。反應(yīng)體系為3 mL 0.2 mol/L鄰苯二酚（用pH 7.8磷酸緩沖液配制），1 mL酶液，以滅活酶液作為空白對(duì)照，于30 ℃下水浴10 min，立即用20%三氯乙酸中止反應(yīng)。5 000 r/min離心10 min后，取上清液于495 nm處測(cè)定其吸光值。
　　1.2.2 過氧化物酶活性測(cè)定。參照李玲等[8]的方法：取1 g樣品，加入0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.0），在冰浴中研磨，12 000 r/min離心20 min，收集上清液。4.7 mL反應(yīng)液包括2.7 mL 0.05 mol/L磷酸緩沖液（pH 5.5），1.0 mL 2%的H2O2，1.0 mL 0.05 mmol/L愈創(chuàng)木酚。向反應(yīng)液中加入0.3 mL 酶液（空白管為0.3 mL pH 7.0的磷酸緩沖液）混勻后，水浴 37 ℃反應(yīng)15 min，冷卻后測(cè)定其在470 nm處的吸光值。
　　1.2.3 脂氧合酶活性測(cè)定。參照宮長(zhǎng)榮等[9]的方法：取0.5 g樣品，加入0.10 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.0）在冰浴中研磨，12 000 r/min離心20 min，收集上清液。取0.3 mL酶液于試管中，加入2 mL底物乳狀液（2.24 mmol/L亞油酸分散于含0.5 μL/mL吐溫-20的0.1 mol/L、pH 9.0的硼酸緩沖液中），混勻后放入30 ℃水浴中并開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)3 min后加入5 mL無水乙醇終止反應(yīng)，然后加入5 mL蒸餾水混勻并測(cè)定其在234 nm處的吸光值。

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