不同品種威靈仙藥材的質(zhì)量調(diào)查

　　[摘要] 對不同品種威靈仙藥材進(jìn)行質(zhì)量調(diào)查。優(yōu)化《中國藥典》2010年版威靈仙含量測定項(xiàng)下方法，并測定威靈仙樣品中常春藤皂苷元和齊墩果酸的含量。所測30批樣品中僅有3批威靈仙Clematis chinensis藥材中常春藤皂苷元和齊墩果酸的含量符合《中國藥典》2010年版規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)；東北鐵線蓮C. manshurica藥材中齊墩果酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于0.30%，但常春藤皂苷元含量極微；棉團(tuán)鐵線蓮C. hexapetala中未檢測到常春藤皂苷元和齊墩果酸。
　　[關(guān)鍵詞] 威靈仙；常春藤皂苷元；齊墩果酸；含量測定
　　[稿件編號] 20121217007
　　[基金項(xiàng)目] 國家科技基礎(chǔ)性項(xiàng)目（SB2007FY020）
　　[通信作者] *馬長華，Tel：（010）84738603，E-mail：machanghua60@sina.com
　　[作者簡介] 李倩倩，碩士研究生，Tel：15201391428
　　中藥威靈仙來源于毛茛科植物威靈仙Clematis chinensis Osbeck、棉團(tuán)鐵線蓮C. hexapetala Pall.或東北鐵線蓮C.manshurica Rup. r的干燥根及根莖，具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)之功效，用于風(fēng)濕痹痛、肢體麻木、筋脈拘攣、屈伸不利[1]�！吨袊�藥典》2010年版新增以常春藤皂苷元及齊墩果酸為指標(biāo)進(jìn)行的質(zhì)量控制，研究對以上3個(gè)品種威靈仙藥材進(jìn)行質(zhì)量調(diào)查 ，優(yōu)化《中國藥典》2010年版威靈仙含量測定項(xiàng)下方法，并對30 批威靈仙藥材中常春藤皂苷元和齊墩果酸的含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明僅有來源于毛茛科植物威靈仙C. chinensis的部分藥材符合《中國藥典》2010年版威靈仙含量測定的標(biāo)準(zhǔn)。
　　1 材料
　　Waters 1525 高效液相色譜儀（Waters2707自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，Waters2998二極管陣列檢測器，Waters1525泵，breezeTM 2色譜工作站）；Metteler-AE240型1/10萬電子天平；Sartorius BS110S 1/1萬電子天平。齊墩果酸（批號 110709-200304，購于中國食品藥品檢定研究院），常春藤皂苷元（純度≥98%，HPLC，購于北京寰宇科創(chuàng)生物科技發(fā)展有限公司）。乙腈（Fisher）為色譜純，流動(dòng)相用水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。威靈仙藥材來自國家科技基礎(chǔ)性項(xiàng)目（SB2007FY020）《珍稀瀕危和常用大宗藥用植物資源調(diào)查》項(xiàng)目組在全國范圍內(nèi)收集，并由北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定，No.1～10為威靈仙C. chinensis，No.11-15為棉團(tuán)鐵線蓮C. hexapetala ，No.16～30為東北鐵線蓮C. manshurica。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件 Agela C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）；梯度洗脫，0～15 min（75%A），15～20 min（75%～90%A），20～30 min（90%A），30～35 min（90%～75%A），35～45 min（75%A）；流速1 mL·min-1；檢測波長 205 nm；進(jìn)樣量 10 μL。在該條件下分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，色譜圖見圖1。
　　A.對照品溶液；B.威靈仙供試品溶液；C.棉團(tuán)鐵線蓮供試品溶液；D.東北鐵線蓮供試品溶液；1.常春藤皂苷元 ；2.齊墩果酸。
　　圖1 對照品溶液及不同品種樣品的HPLC圖
　　Fig.1 HPLC chromatograms of composite standard substance and samples
　　2.2 對照品溶液的制備 分別稱取常春藤皂苷元對照品2.56 mg，齊墩果酸對照品8.22 mg，置于10 mL量瓶中，甲醇超聲溶解，定容后分別得質(zhì)量濃度為0.256 g·L-1的常春藤皂苷元對照品溶液和0.822 g·L-1的齊墩果酸對照品溶液。
　　2.3 供試品溶液的制備 取威靈仙粉末（過4號篩）約4 g，精密稱定，按照《中國藥典》2010年版“威靈仙[含量測定] ”項(xiàng)下[1]供試品溶液制備方法處理，即得。
　　2.4 方法學(xué)考察
　　2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1，5，10，20，30，40，50 μL，注入液相色譜儀，在2.1 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行分析，記錄色譜峰面積。結(jié)果以峰面積（Y）對對照品的進(jìn)樣質(zhì)量（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為常春藤皂苷元Y=8.21×105X-1.38×105， r=0.999 8， 0.256～12.8μg；齊墩果酸Y=7.10×105X-3.20×105，r=0.999 8， 0.822～41.1 μg。
　　2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積，結(jié)果常春藤皂苷元和齊墩果酸峰面積的RSD分別為1.2%，0.98%。
　　2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品6份，同2.3 項(xiàng)下方法平行制備，測定，結(jié)果常春藤皂苷元和齊墩果酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)（分別為0.13%，1.26%）的RSD分別為0.66%，1.8%，表明方法的重復(fù)性良好。
　　2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液分別于0，2，4，6，8，12 h分別進(jìn)樣10 μL，依次測定峰面積，常春藤皂苷元和齊墩果酸的RSD分別為0.87%， 1.1%，表明該供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
　　2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取6份已知含量的樣品約2 g，精密稱定，同2.3 項(xiàng)下方法處理，并在用2 mol·L-1鹽酸水解總皂苷以制得皂苷元的步驟加入常春藤皂苷元與齊墩果酸，因常春藤皂苷元與齊墩果酸不溶于鹽酸溶液，故在溶解有總皂苷殘?jiān)�的鹽酸溶液中分別精密加入質(zhì)量濃度為0.400 3 g·L-1的常春藤皂苷元甲醇溶液3 mL和質(zhì)量濃度為3.52 g·L-1的齊墩果酸甲醇溶液3 mL。測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果常春藤皂苷元和齊墩果酸的平均回收率分別為96.4%， 96.5%， RSD分別為2.5%， 2.4%（n=6），結(jié)果見表1。

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