HPLC測定不同采收期川芎藥材中5種藥效成分的含量

　　[摘要]該文建立了HPLC同時(shí)測定川芎藥材中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、洋川芎內(nèi)酯A和藁本內(nèi)酯含量的方法。用40%乙醇提取樣品中的藥效成分，采用Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，0～5 min，乙腈-甲醇-1%冰醋酸（20∶40∶40），5～30 min，乙腈-甲醇-1%冰乙酸（60～100∶0∶40～0）為流動(dòng)相，流速l mL·min-1，檢測波長0～4.3 min，321 nm，4.31～30 min，275 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣體積10 μL，應(yīng)用安捷倫1100系列液相色譜儀進(jìn)行測定。5種藥效成分的分離效果良好，在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，加樣回收率（n=6）均在94.44%～103.1%。該方法應(yīng)用于研究都江堰產(chǎn)區(qū)（海拔600 m左右）不同采收期對(duì)川芎阿魏酸和4種內(nèi)酯類物質(zhì)含量的影響，試驗(yàn)在4月15日（栽后245 d）至5月30日（290 d）內(nèi)設(shè)置了10個(gè)采收期，發(fā)現(xiàn)5種藥效成分的含量與采收期（栽后天數(shù)）均呈二次或三次函數(shù)關(guān)系，隨著采收期的推遲而先增后減，阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、洋川芎內(nèi)酯A和藁本內(nèi)酯的含量在栽后260 ～265 d（4月30日至5月5日）最高。
　　[關(guān)鍵詞]川芎；HPLC；采收期；含量
　　川芎Ligusticum chuanxiong Hort.為傘形科藁本屬多年生草本植物，以根莖入藥，味辛、性溫，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛等功效^[1]。川芎的主要藥效成分包括阿魏酸、總生物堿、內(nèi)酯類化合物、揮發(fā)油和酚性成分等物質(zhì)^[2-3]。
　　目前川芎的質(zhì)量評(píng)價(jià)主要以《中國藥典》2010年版（一部）的質(zhì)量規(guī)范為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)川芎性狀、阿魏酸的含量（≥0.1%）、水分（≤12%）、總灰分（≤6%）、酸不溶性灰分（≤2%）、浸出物（≥12%）做了相關(guān)規(guī)定^[1]。僅以阿魏酸一種藥效成分來評(píng)價(jià)川芎品質(zhì)的高低有失偏頗，作者一致認(rèn)為加之其他藥效成分綜合評(píng)價(jià)更為合理。如今測定阿魏酸單一成分含量的方法較多^[4-9]，也有單一測定藁本內(nèi)酯的方法^[10]，或阿魏酸與川芎嗪、阿魏酸與藁本內(nèi)酯2種成分同時(shí)測定的方法^[11-12]，還有一些有關(guān)成分測定和川芎指紋圖譜建立的方法[5-6，13-16]，總之，這些方法只是單一成分及少數(shù)成分的定量測定，或是指紋圖譜中沒有確定具體成分、結(jié)構(gòu)及藥效作用，只是對(duì)所測的材料確定了共有峰的數(shù)量及相對(duì)面積大�。ú荒艽�表藥材中的真實(shí)含量），且存在耗時(shí)較長和溶液消耗較多的缺點(diǎn)，均不利于對(duì)川芎藥材品質(zhì)的綜合評(píng)價(jià)，需要建立一套能同時(shí)測定多種藥效成分的快捷、高效而可靠的分析方法，以便全面、正確地綜合評(píng)價(jià)川芎藥材的品質(zhì)。
　　另外，不同的采收期對(duì)川芎的品質(zhì)影響較大，蔣桂華和饒凡^[17-18]等對(duì)川芎的采收期有過研究，遺憾的是其涉及的采收期較少或只測定阿魏酸、生物堿和揮發(fā)油3個(gè)指標(biāo)的含量，不足以篩選川芎的最適采收期；近年來，隨著種植結(jié)構(gòu)和耕作制度的改變，川芎的收獲期逐漸提前，位于四川彭山縣的川芎產(chǎn)區(qū)也是雜交水稻的制種區(qū)，為保證制種水稻提前栽秧，川芎的采收期提前到了4月上中旬；位于都江堰和彭州市的川芎主產(chǎn)區(qū)，主要實(shí)行的是川芎-水稻輪作制，為了提高水稻產(chǎn)量，所選用水稻品種的生育期呈延長之勢，也在一定程度上影響了川芎的適時(shí)收獲。因此，系統(tǒng)研究川芎采收期特別是早收對(duì)川芎品質(zhì)的影響可為川芎的生產(chǎn)提供理論依據(jù)。
　　本文建立了HPLC同時(shí)測定川芎藥材中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、洋川芎內(nèi)酯A和藁本內(nèi)酯含量的方法，為川芎藥材及相關(guān)產(chǎn)品的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供新的方法參考，同時(shí)研究川芎采收期對(duì)川芎品質(zhì)的影響對(duì)川芎的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培及川芎-水稻輪作制度有重要意義。
　　1材料
　　安捷倫1100 LC系列液相色譜儀，ChemStation 化學(xué)工作站、VWD檢測器；CAP 225D電子天平（德國賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），SB-5200 DTD超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。
　　試驗(yàn)材料培養(yǎng)于川芎藥材采收期試驗(yàn)田，川芎苓種來自都江堰市三江鎮(zhèn)，2011年8月10日栽種在都江堰市石羊鎮(zhèn)廣益村試驗(yàn)田，土地平整，地力均一，pH為5.83，堿解氮58.34 mg·kg-1，速效磷114.27 mg·kg-1，速效鉀42.31 mg·kg-1，有機(jī)質(zhì)23.82 g·kg-1。試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，設(shè)置10個(gè)采收期，分別為2012年4月15日（栽后245 d，下同）、2012年4月20日（250 d）、2012年4月25日（255 d）、2012年4月30日（260 d）、2012年5月5日（265 d）、2012年5月10日（270 d）、2012年5月15日（275 d）、2012年5月20日（280 d）、2012年5月25日（285 d）和2012年5月30日（290 d）。重復(fù)3次，共30個(gè)處理，試驗(yàn)小區(qū)面積為20 m²。施肥^[19]、密度^[20]及其他栽培管理措施保持小區(qū)間一致。
　　甲醇（HPLC級(jí)）和乙腈（HPLC級(jí)）購買于賽默飛世爾科技股份有限公司，乙醇（HPLC級(jí)）和冰乙酸（AC級(jí)）購買于成都科龍化工試劑廠，超純水由娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）代替，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品阿魏酸和藁本內(nèi)酯購買于中國食品藥品檢定研究院，洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H和洋川芎內(nèi)酯A購于四川省中藥標(biāo)準(zhǔn)中心。
　　2方法與結(jié)果
　　2.1色譜條件
　　Symmetry C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為0～5 min，乙腈-甲醇-1%冰醋酸（20∶40∶40），5～30 min，乙腈-甲醇-1%冰乙酸（60～100∶0∶40～0）；流速l mL·min-1；檢測波長0～4.3 min，321 nm，4.31～30 min，275 nm；柱溫35 ℃，進(jìn)樣體積10 μL。

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