土槿皮藥材定量方法研究

　　[收稿日期] 2014-06-27
　　[通信作者] *陸頌規(guī)，高級工程師，主要從事中藥研制工作，Tel：（020）81157722，E-mail：lsg0518@sohu.com
　　[作者簡介] 陳麗斯，助理工程師，主要從事中藥研制工作，Tel：13823402162，E-mail：lingengxuan@sina.com
　　[摘要] 土槿皮為桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus的干燥樹皮，是外用殺菌止癢藥復(fù)方土槿皮酊的原料藥材。目前土槿皮藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（第2冊），但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有薄層鑒別項而無含量測定項，未能更有效地監(jiān)控土槿皮藥材的質(zhì)量。該文首次建立反相高效液相色譜法測定土槿皮藥材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸峰，并用外標(biāo)法計算其含量，結(jié)果在確定的色譜條件下，目標(biāo)成分峰與相鄰雜質(zhì)峰達(dá)到有效分離，3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品溶液質(zhì)量濃度在1.00～25.0 mg·L-1時峰面積呈良好線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=77.33X+7.904，r=0.999 5；平均回收率為101.0%，RSD為1.3%。采用高效液相色譜法測定土槿皮藥材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸的含量，所建立的方法操作步驟簡單，穩(wěn)定性和重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，可靠性強(qiáng)，能為更有效監(jiān)控土槿皮藥材質(zhì)量提供了有力的技術(shù)支持。
　　[關(guān)鍵詞] 土槿皮；藥材監(jiān)控；3，3′-二-O-甲基鞣花酸
　　土槿皮為桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus （Roxb.） Merr. et Perry的干燥樹皮。歷代本草對其記載較少，可在《生草藥性備要》、《本草求原》和《嶺南采藥錄》找到其較早的記載，其入藥首見于清·何克諫著的《生草藥性備要》^[1]�！吨兴幋筠o典》、《廣東中藥志》、《中華本草》均將其收錄入藥，味苦、辛，性涼，功能清熱解毒、燥濕、殺蟲，主治腳氣濕爛、濕疹、疥癬，疳瘡，腎囊癰，燒燙傷^[2]。自清至今，土槿皮用于殺蟲、治癬有近300年的應(yīng)用歷史^[3]，并有研究對其抗菌化合物進(jìn)行分離與鑒定�，F(xiàn)代土槿皮藥材標(biāo)準(zhǔn)收載于《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（第2冊），由于其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)過于簡單，僅有薄層鑒別項而無含量測定項^[4]，故本文制訂一種測定土槿皮藥材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸含量的方法，旨在為土槿皮藥材質(zhì)量監(jiān)控提供有效的技術(shù)支持。本次實驗所用的含量測定指標(biāo)性物質(zhì)3，3′-二-O-甲基鞣花酸存在于土槿皮中，屬于鞣花酸衍生物的一種，資料表明，鞣花酸具有抗氧化性、抗癌變、抗誘變^[5]、抗突變作用，還兼?zhèn)淇咕�、抗病毒作�?sup>[6]，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥醫(yī)療和化妝品等領(lǐng)域^[7]。
　　1 材料
　　1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜系統(tǒng)（包括G1311C四元梯度泵、G1329B自動進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G1315D DAD檢測器和ChemStation色譜工作站）。
　　1.2 藥材與試劑 3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品（含量98%，深圳市美荷生物科技有限公司）；土槿皮對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號1821-0301）；土槿皮藥材（批號100602-2，110601-1，110601-2）產(chǎn)地為廣西，取于廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院李書淵教授鑒定為桃金娘科植物水翁C. operculatus的干燥樹皮；含量測定用甲醇為色譜純，水為去離子水，其余試劑均為分析純。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP80A （4.6 mm×250 mm，4 μm）；流動相甲醇-0.3%磷酸水溶液（50∶50）；檢測波長250 nm；流速1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量10 μL；柱溫30 ℃。
　　2.2 對照品溶液的制備 取3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得。
　　2.3 供試品溶液的制備 精密稱取土槿皮藥材粉末（過3號篩）0.25 g，精密加入70%乙醇50 mL，稱重，超聲（功率360 W，頻率40 kHz）處理45 min，取出放冷，用70%乙醇補(bǔ)足失重，經(jīng)微孔濾膜（0.45 μm）濾過取續(xù)濾液即得。
　　2.4 專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，按照2.1項下條件進(jìn)樣測定，結(jié)果3，3′-二-O-甲基鞣花酸色譜峰與前后雜質(zhì)峰分離度均大于1.5，峰純度因子為999.945，理論塔板數(shù)大于5 000。對照品溶液與供試品溶液色譜圖見圖1，2。
　　1.3，3′-二-O-甲基鞣花酸（圖2同）。
　　圖1 3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品溶液HPLC圖
　　Fig.1 3，3′-O-dimethylellagic acid standard solution HPLC chromatography
　　圖2 供試品溶液HPLC圖
　　Fig.2 The test solution HPLC chromatography
　　2.5 線性關(guān)系的考察 精密稱取3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品約10 mg，置200 mL量瓶，加甲醇溶解后定容至刻度得3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品儲備液（約50 mg·L-1）。準(zhǔn)確量取儲備液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置于7個10 mL量瓶中，用甲醇配成3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品系列溶液，注入高效液相色譜儀。以質(zhì)量濃度（mg·L -1） 為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=77.33X+7.904，r =0.999 5，結(jié)果表明3，3′-二-O-甲基鞣花酸對照品溶液質(zhì)量濃度在1.00～25.0 mg·L -1與峰面積呈良好線性關(guān)系。

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