瑤族藥材千年健倍半萜類成分研究??

　　[摘要]采用硅膠柱、ODS開放柱和半制備液相等色譜方法相結合，從千年健根莖乙醇提取物中的乙酸乙酯部位分離得到1.2個倍半萜類化合物，根據(jù)理化性質和波譜分析，化合物結構分別鑒定為 3α，7αdihydroxycadin4ene （1），3oxofabiaimbricatan （2），3β，4αdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （3），integrifonol A （4），1β，6βdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （5），4β，7β，1.1enantioeudesmantriol （6），epiguaidiol （7），oplopanone （8），（-）1β，4β，6αtrihydroxyeudesmane （9），2αhydroxyhomalomenol （10），（-）Tmuurolol （1.1），hamalomenol A （1.2）。 化合物1～7為首次從千年健屬植物中分離得到，1.1～1.2為首次從該植物中分離得到。此外對分離的部分化合物進行了抑制脂多糖誘導的小鼠巨噬細胞RAW 2.64.7細胞NO釋放實驗，發(fā)現(xiàn)化合物3，5和8有良好的抑制活性，其IC50分別為65.1，3.2.5，778 μmol·L-1。
　　[關鍵詞]天南星科； 千年健屬； 千年健； 化學成分； 抗炎
　　千年健，又稱一包針、千顆針、千年見、絲棱線等，為雙子葉植物天南星科千年健屬植物千年健Homalomena occulta （Lour） Schott，產(chǎn)于廣東、海南、廣西、云南等地。根莖入藥，是中國藥典收載品種，為瑤族群眾所習用，可治跌打損傷、骨折、外傷出血、四肢麻木、筋脈拘攣、風濕腰腿痛、類風濕關節(jié)炎、胃痛、腸胃炎、痧癥等疾病[12]。近年來，該藥材的化學成分已有一些研究報道，主要含有倍半萜類化合物、酚酸類等化合物[37]。為進一步闡明該藥材的化學成分，尋找抗類風濕性關節(jié)炎的藥效成分，對千年健的根莖乙醇提取物進行了化學成分研究，分離得到1.2個倍半萜類化合物，分別為3α，7αdihydroxycadin4ene （1），3oxofabiaimbricatan （2），3β，4αdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （3），integrifonol A （4），1β，6βdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （5）， 4β，7β，1.1enantioeudesmantriol （6），epiguaidiol （7），oplopanone （8），（-）1β，4β，6αtrihydroxyeudesmane （9），2αhydroxyhomalomenol （10），（-）Tmuurolol （1.1），hamalomenol A （1.2）。 化合物1～7為首次從千年健屬植物中分離得到，1.1～1.2為首次從該植物中分離得到。此外，對分離的部分化合物進行了抑制脂多糖誘導的小鼠巨噬細胞 RAW 2.64.7的NO釋放實驗，篩選具有抗炎活性的化合物。
　　1 材料
　　INOVA500MHzFT核磁共振儀，TMS為內(nèi)標物；Agilent 63.20型ESI質譜儀；Waters 1.5.2.5半制備型高效液相色譜儀（2.998 PDA檢測器）；Agilent XDB C1.8色譜柱（94 mm× 2.50 mm， 5 μm），超純水儀（MilliporeQ），暗箱式紫外分光儀（WD9403C型），旋轉蒸發(fā)儀（EYELA 1000），Thermo 3.1.11型二氧化碳培養(yǎng)箱（美國熱電公司），Motic AE2000倒置熒光顯微鏡，TELSTAR AV30型超凈工作臺，Thermo Multiskan FC多功能酶標儀。薄層色譜和柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）柱色譜材料（安捷倫）；薄層色譜和柱色譜用石油醚（60～90 ℃）、丙酮、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、甲醇等試劑為分析純，液相用甲醇為色譜純（Fisher公司產(chǎn)品），水為MilliQ純化水。DMEM培養(yǎng)基（Hyclone，美國）；胎牛血清（Gibco，美國）；NO化學法試劑盒（南京建成生物工程有限公司）；槲皮素對照品（中國食品藥品檢定研究院）。
　　小鼠巨噬細胞RAW 2.64.7細胞系購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心。
　　千年健藥材201.3年7月采購于廣西玉林藥材市場（產(chǎn)地廣西桂林），經(jīng)北京大學藥學院天然藥物學系屠鵬飛教授鑒定為天南星科千年健屬植物千年健H occulta的干燥根莖，標本（QNJ201.30701）保存于華僑大學化工與制藥工程系標本庫。
　　2 提取與分離
　　干燥千年健根莖200 kg，粉碎后用體積分數(shù)95%乙醇回流提取3次，合并3次提取液，減壓濃縮得浸膏。取浸膏加適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物3.20 g，乙酸乙酯萃取物1.10 g，正丁醇萃取物60 g。乙酸乙酯部分（100 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿甲醇（10∶0～10∶5 ）梯度洗脫，TLC檢測后主斑點一致或相近的合并，共得10個組分（Fr1～Fr10）。Fr1（5 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚丙酮（10∶1～0∶1）梯度洗脫，得4個流分（Fr1.1～Fr1.4）；其中Fr1.2依次經(jīng)RPC1.8反相柱（甲醇水，6∶4～9∶1梯度洗脫），再經(jīng)半制備液相（甲醇水，5.5%甲醇）分離得到化合物1 （105 mg）和2 （50 mg）；Fr1.3依次經(jīng)RPC1.8反相柱（甲醇水，6∶4～9∶3梯度洗脫），再經(jīng)半制備液相（5.2%甲醇）分離得到化合物3 （87 mg），4 （1.20 mg），5 （5.2 mg）。Fr1.4經(jīng)硅膠柱色譜，依次經(jīng)RPC1.8反相柱（甲醇水，6∶4～9∶3梯度洗脫），再經(jīng)半制備液相（50%甲醇）分離得到化合物6（100 mg）和7 （4.5 mg）。Fr4（1.2 g）以石油醚丙酮（1.5∶1～0∶1）梯度洗脫，得6個流分（Fr4.1～Fr4.6）；其中Fr4.2經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚丙酮，20∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物8 （100 mg）；Fr4.4經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚丙酮，10∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物9 （1.2.5 mg）和10 （50 mg）；Fr4.5經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚乙酸乙酯，5∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物1.1 （1.5.5 mg）；Fr4.6經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚乙酸乙酯，5∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物1.2 （85 mg）。

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