超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定茶葉中11種植物生長調(diào)節(jié)劑及吡蟲啉、啶蟲脒的殘留
發(fā)布時間:2019-09-02 來源: 人生感悟 點擊:
摘要建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時快速測定茶葉中11種植物生長調(diào)節(jié)劑(PGRs)及吡蟲啉、啶蟲脒的方法。樣品經(jīng)乙腈甲酸溶液(99〖KG-3∶〖KG-51,V/V)均質(zhì)提取,采用C18、強陰離子交換劑(SAX)、N丙基乙二胺(PSA)和無水MgSO4混合吸附劑分散萃取處理,以HSST3色譜柱分離,采用電噴霧(ESI)正負離子同時掃描和可編程多反應監(jiān)測模式(SMRM)檢測,基質(zhì)匹配溶液外標法定量。6芐氨基嘌呤、多效唑、烯效唑、氯吡脲、甲哌啶、吡蟲啉、啶蟲脒在1~200μg/L和2,4二氯苯氧乙酸、對氯苯氧乙酸、赤霉素、吲哚乙酸、萘乙酸、吲哚丁酸在5~1000μg/L范圍內(nèi)線性良好(R2>0.99)。13種化合物加標回收率在73.1%~108.9%之間,RSD(n=6)值在0.6%~8.0%之間,方法檢出限(LOD,S/N=3)和定量限(LOQ,S/N=10)分別為0.18~9.68μg/kg和0.61~32.26μg/kg。本方法簡便、穩(wěn)定、靈敏,能夠滿足實際檢測需求。
關鍵詞茶葉;植物生長調(diào)節(jié)劑;吡蟲啉;啶蟲脒;超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜;分散固相萃取
1引言
植物生長調(diào)節(jié)劑(Plantgrowthregulators,PGRs)是一類與植物激素具有相似生理和生物學效應的農(nóng)藥(來源包括人工合成及生物中提。20世紀30年代以來,因其效用高、用量小、殘毒少等特點,廣泛應用于果蔬、茶葉等農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領域,如赤霉素[1]、吲哚丁酸[2]、奈乙酸[3]等可通過改變茶樹體內(nèi)的生物合成、運轉(zhuǎn)和分布,調(diào)節(jié)新梢生理過程,并促進茶樹早發(fā)、多發(fā),提高產(chǎn)量及品質(zhì)。吡蟲啉和啶蟲脒屬于煙堿類新型廣譜殺蟲劑,在茶園中應用也十分普遍[4,5]。然而隨著植物生長調(diào)節(jié)劑和煙堿類農(nóng)藥用量增多及使用范圍日益擴大,其安全性也備受關注。研究表明,2赤霉素可能增加腫瘤形成風險[6],吲哚乙酸可影響心肌功能[7],2,4二氯苯氧乙酸(2,4D)具有生殖毒性[8],多效唑存在致畸作用[9]。因此,歐盟、日本、中國等建立了PGRs和煙堿類農(nóng)藥相關限量標準,如歐盟規(guī)定2,4D在藍莓、茶葉中的最高殘留限量值(MRL)為0.1mg/kg;日本規(guī)定赤霉素在檸檬等果蔬中的MRL為0.2mg/kg;我國GB27632014中規(guī)定氯吡脲在葡萄中的MRL為0.05mg/kg,吡蟲啉在茶葉中的MRL為0.5mg/kg[10]等。
目前,植物生長調(diào)節(jié)劑和煙堿類農(nóng)藥主要檢測方法包括色譜法[11~13]、色譜質(zhì)譜法[14~19]等,但絕大部分方法都需要經(jīng)過傳統(tǒng)固相萃取、濃縮、衍生等前處理步驟,存在操作程序繁瑣、污染嚴重、抗干擾差等缺點。前處理作為關鍵技術(shù),2會直接影響方法靈敏度和精密度。茶葉具有典型基質(zhì)效應,一般方法很難直接適用,迄今尚未發(fā)現(xiàn)同時測定茶葉中多PGRs及煙堿類農(nóng)藥殘留相關研究報道。本研究采用分散固相萃取前處理方法,省去濃縮、固相小柱萃取等步驟,建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時快速測定茶葉中11種植物生長調(diào)節(jié)劑及吡蟲啉、啶蟲脒的方法,本法靈敏、簡便、高效,可滿足茶葉質(zhì)量監(jiān)測需求。
2實驗部分
2.1儀器與試劑
ABSciexTQ5500型串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀(美國Sciex公司);LC30A超高效液相色譜儀(日本島津公司);MillQ去離子水發(fā)生器(美國Millipore公司);T10高速均質(zhì)儀(德國IKA公司);高速冷凍離心機(上海盧湘儀離心機儀器有限公司)。
11種PGRs及2種煙堿類農(nóng)藥標準樣品:6芐氨基嘌呤(6Benzylaminopurine,6BA)、多效唑(Paclobutrazol)、烯效唑(Uniconazole)、氯吡脲(Forchlorfenuron)、甲哌啶(Mepiquatchloride)、吡蟲啉(Imidacloprid)、啶蟲脒(Acetamiprid)、2,4二氯苯氧乙酸(2,4Dichlorophenoxyaceticacid,2,4D)、對氯苯氧乙酸(4Chlorophenoxyaceticacid,4CPA)、赤霉素(Gibberellicacid,GA3)、吲哚乙酸(Indole3aceticacid,IAA)、萘乙酸(1Naphthaleneaceticacid,1NAA)、吲哚丁酸(Indole3butyricacid,IBA)(純度≥95.0%,德國Dr.Ehrenstorfer公司)。
甲醇、乙腈(色譜純,TEDIA公司);甲酸銨(99.9%)、甲酸(95%)(德國Sigma公司);N丙基乙二胺(PSA)、強陰離子交換劑(SAX)、強陽離子交換劑(SCX,美國安捷倫科技有限公司);C18、石墨化碳黑(GCB)、無水MgSO4、弗羅里硅土(天津博納艾爾杰公司)。
茶葉樣品購于浙江省各大茶葉市場。
2.2色譜和質(zhì)譜條件
WatersHSST3色譜柱(100mm×2.1mm,1.7μm);流動相A:1mmol/L甲酸銨水溶液,流動相B:1mmol/L甲酸銨甲醇溶液;梯度洗脫程序:0~1min,10%B;1~2min,10%~70%B;2~6min,70%~98%B;6~8min,98%B;8~8.1min,98%~10%B;8.1~12min,10%B。流速:0.25mL/min;進樣量:1.0μL;柱溫:40℃;運行時間:12min。
離子源:電噴霧離子源(ESI),溫度500℃,電壓5500V(ESI+)/ 4500V(ESI );霧化氣(GS1)壓力:334.7kPa;輔助氣(GS2)壓力:334.7kPa;氣簾氣(CurtianGas)壓力:241.3kPa。定性與定量離子對、去簇電壓(DP)、碰撞能量(CE)等參數(shù)見表1。
2.3樣品制備
茶葉樣品粉碎后過200μm篩,稱取2.0g(精確至0.01g)試樣于50mL離心管中,加入乙腈甲酸溶液(99〖KG-3∶〖KG-51,V/V)10mL,渦旋振蕩1min,18000r/min均質(zhì)提取2min,10000r/min低溫離心10min(5℃),取上清液1mL至裝有100mgC18,50mgSAX,25mgPSA和50mg無水MgSO4吸附劑的2mL離心管中,渦旋1min,10000r/min離心5min,上清液過0.22μm濾膜,待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析。
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