兒科肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液肺炎支原體DNA結(jié)果分析

　　[摘要] 目的 探討兒科肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中肺炎支原體感染情況。方法 回顧分析該院2015年1月—2017年6月所有送檢168例。利用PCR方法檢測(cè)肺泡灌洗液樣本肺炎支原體DNA，按不同年齡、性別統(tǒng)計(jì)分析陽(yáng)性率，并分析有無(wú)差異。結(jié)果 168例肺泡灌洗液檢測(cè)肺炎支原體總陽(yáng)性率為25.6%，男性患兒陽(yáng)性率為27.4%，女性患兒陽(yáng)性率為23.3%，而且都是4～6歲年齡段陽(yáng)性率最高，達(dá)到53.3%，小于1歲年齡段陽(yáng)性率最低。結(jié)論 肺泡灌洗液檢測(cè)肺炎支原體總陽(yáng)性率無(wú)性別差異，各年齡段感染率有差異。
　　[關(guān)鍵詞] 肺炎；肺泡灌洗液；肺炎支原體
　　[中圖分類號(hào)] R5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）01（c）-0033-03
　　[Abstract] Objective This paper tries to investigate the infection of mycoplasma pneumoniae and bronchoalveolar lavage fluid in children with pneumonia. Methods Retrospective analysis of this hospital from January 2015 to June 2017 of all 168 cases of submission was conducted. The Mycoplasma pneumoniae DNA in bronchoalveolar lavage fluid was detected by PCR， and the positive rates were analyzed by age and gender， and there was no difference between them. Results The total positive rate of Mycoplasma pneumoniae detected by bronchoalveolar lavage fluid was 25.5%， the masculine positive rate was 27.3%， the female positive rate was 23.2%， and the positive rate was highest between 4 to 6 years old， reaching 53.3%， less than 1 years old， the lowest positive rate. Conclusion The total positive rate of Mycoplasma pneumoniae was not detected by bronchoalveolar lavage fluid， there was no difference in gender， and the infection rates were different in different age groups.
　　[Key words] Pneumonia； BALF； Mycoplasma pneumoniae
　　兒童支氣管肺炎作為常見的幼兒下呼吸道感染性疾病，主要是由病原體感染所致，無(wú)論是發(fā)病率還是死亡率都相對(duì)比較高，對(duì)于幼兒的生命安全和身體健康有著很大的威脅。調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，每年全球大概有100 萬(wàn)～200萬(wàn)的兒童是因?yàn)樾�兒肺炎致死[1-2]，其中肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）占兒童類肺炎中的比例在20%～40%，并且這一比例隨著兒童年齡的增加而有上升的趨勢(shì)[3-4]。從肺炎的診治情況來(lái)看，目前臨床診斷MPP感染通常仍然采用血清學(xué)方法，而這種診斷方法受到抗體出現(xiàn)的時(shí)相等多方面因素影響的概率比較大[5-6]，進(jìn)而對(duì)支氣管肺炎的診治造成了一定的干擾。支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）是以纖維支氣管鏡嵌入到肺段或亞段支氣管水平反復(fù)以無(wú)菌生理鹽水灌洗回收的液體，對(duì)肺泡灌洗液對(duì)行肺炎支原體檢測(cè)并分析分布作為研究肺部疾病病因發(fā)病機(jī)制是診斷評(píng)價(jià)療效和判斷預(yù)后的一項(xiàng)手段，其檢測(cè)結(jié)果對(duì)促進(jìn)患兒的治療、用藥、康復(fù)、減少并發(fā)癥有極大的幫助。利用PCR方法直接檢測(cè)肺炎支原體DNA，是現(xiàn)階段最有效的檢測(cè)方法，具有低成本、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，該文即是對(duì)2015年1月—2017年6月間東莞市婦幼保健院168例送檢的BALF進(jìn)行進(jìn)行肺炎支原體DNA檢測(cè)，現(xiàn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果總結(jié)分析如下。
　　1 資料與方法
　　1.1 一般資料
　　回顧分析該院所有送檢168例，BALF樣本利用熒光PCR方法檢測(cè)肺炎支原體DNA，BALF樣本按患兒性別設(shè)男95例、女73例兩組，按不同年齡階段把受檢患兒分為<1歲72例、1～3歲43例、4～6歲30例、≥7歲23例共4個(gè)年齡組。
　　1.2 樣本采集
　　所有患兒均符合文獻(xiàn)[7]《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》支氣管鏡檢查的適應(yīng)證，予電子支氣管鏡檢查。采用Olympus公司生產(chǎn)的EVIS LUCERA CV-260 系列型電子支氣管鏡。纖維支氣管鏡檢查，術(shù)前6 h禁食，予以靜脈鎮(zhèn)靜加局部麻醉的方法，采用2%利多卡因咽喉部局麻，纖維支氣管鏡經(jīng)鼻、咽喉、聲門進(jìn)入氣道，觀察支氣管形態(tài)，37℃生理鹽水灌洗至炎癥嚴(yán)重的肺段，1.0 mL/kg 至少灌洗3次，隨即負(fù)壓吸引以獲取BALF，標(biāo)本置一次性無(wú)菌硅化收集器中。
　　1.3 檢測(cè)方法
　　BALF檢測(cè)：主要利熒光PCR方法，以MP保守基因片段設(shè)計(jì)特異引物及特異Taqman探針，采用ABI 7500 FAST熒光PCR儀，項(xiàng)目試劑來(lái)自廣州達(dá)安基因科技有限公司，將BALF標(biāo)本充分振蕩搖勻，吸取液體轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，1 200 r/min離心5 min，棄上清液，取沉淀加入50 μL核酸提取液，混勻后2 000 r/min離心10 s，100℃干浴10 min，12 000 r/min離心10 min，2 μL上清液加入43 μL反應(yīng)液中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。設(shè)備操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。

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