假煙葉樹葉多酚物質(zhì)的提取工藝優(yōu)化

　　摘 要：通過單因素試驗和正交試驗設計對假煙葉樹葉中的多酚物質(zhì)提取工藝進行了優(yōu)化。結(jié)果表明，各因素對假煙葉樹葉中多酚物質(zhì)提取效果的影響從大到小排列依次為：乙醇濃度>固液比>提取時間>提取溫度；最佳提取工藝為：乙醇濃度40%、提取溫度90℃、固液比1︰30、提取時間1.0 h，連續(xù)提取2次；該條件下多酚物質(zhì)的提取率為5.33%，提取物中多酚含量為24.98%，回收率達98.4%。
　　關(guān)鍵詞：假煙葉樹；多酚；乙醇；提取工藝；優(yōu)化
　　中圖分類號：Q946.82 文獻標識碼：A 文章編號：1006-060X（2015）08-0083-04
　　Abstract：This study investigated optimal conditions of extracting polyphenols from Solanum verbascifolium L.leaves with single factor and orthogonal experiment designs. The results showed that the effect of polyphenols extraction from Solanum verbascifolium L. leaves was influenced by such factors in the decreasing-degree order as concentration of ethanol> the ratio of raw materials to solvent > extraction time> extraction temperature. The optimum extraction conditions included the ethanol concentration at 40%， temperature at 80℃， ratio of solid to liquid at1：20， and extraction for1.5h and 2 times， under which the yield of polyphenols could reach as high as 5.33%， the content of the extract was 24.98% and the recovery rate of polyphenols was 98.4%.
　　Key words：Solanum verbascifolium L.； polyphenol； ethanol； extraction process； optimization
　　假煙葉樹（Solanum verbascifolium L.），又名野煙葉、土煙葉、山煙、野茄樹，屬茄科茄屬植物。生于海拔300～2 100 m的向陽路邊、荒地，分布于福建、臺灣、廣東、海南、廣西、四川、貴州和云南等地；其根、葉、果均可入藥，具小毒，有解毒消腫、除風止痛、涼血止血的功效[1-4]。Adam等[5]的研究表明，假煙葉樹中含有澳洲茄堿、澳洲茄邊堿、薯蕷皂苷元等生物活性成分。目前，對假煙葉樹的商業(yè)化開發(fā)利用較少，基于民間對假煙葉樹的使用多為水提取物，而上述文獻中的化學物質(zhì)多為親脂性成分，它們在水中溶解度很小。因此，有必要對假煙葉樹中的親水性成分做進一步研究，以期明確其中的活性成分，為假煙葉樹的開發(fā)應用提供依據(jù)。
　　前期的研究發(fā)現(xiàn)，假煙葉樹葉中含有多種多酚類化合物，鑒于天然多酚類化合物具有的抗氧化作用以及強化血管壁、促進腸胃消化、降血壓降血脂、預防動脈硬化和血栓形成、增強人體免疫力、抑制細菌和癌細胞生長等多種功效[6-9]，筆者對假煙葉樹葉中的多酚物質(zhì)進行了提取，并對提取工藝進行了優(yōu)化，獲得活性成分含量較高的提取物，為假煙葉樹多酚物質(zhì)的后期開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。
　　1 材料與方法
　　1.1 試驗材料
　　供試假煙葉樹葉于7月采自廣東省假煙葉樹種植基地，為當年新生莖葉，60℃恒溫干燥后粉碎備用。
　　供試試劑有色譜甲醇（國藥集團化學試劑公司），F(xiàn)olin-C試劑、沒食子酸標準品（成都曼思特生物技術(shù)有限公司，純度97%），95%食用乙醇（市購）。
　　主要儀器設備有LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）、WondasilTM Cl8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、UV-2600 紫外可見分光光度計（尤尼柯上海儀器有限公司）、RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）、HH數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市金城國勝實驗儀器廠）、SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科技工貿(mào)有限公司）、DHG-9146A型電熱鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）。
　　1.2 試驗方法
　　1.2.1 假煙葉樹葉乙醇提取物的HPLC檢測 取假煙葉樹葉原料用10倍甲醇60℃回流提取1 h，提取液進行HPLC分析。色譜條件為：甲醇（B相），水（A相），梯度洗脫：0 min（B：5%，A：95%）→30 min（B：30%，A：70%），輸出波長320 nm，流速1 mL/min，柱溫30℃。
　　1.2.2 假煙葉樹乙醇提取物中多酚含量的檢測方法 （1）標準曲線的繪制。精確稱取104 mg沒食子酸于100 mL容量瓶中，經(jīng)水超聲溶解，冷卻定容得母液1.0088 mg/mL，分別取母液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 mL于100 mL容量瓶中，加50 mL水，再加5 mL Folin-C試劑，搖勻后再加入15 mL 20%Na2CO3溶液，用水定容至刻度，于30℃反應2 h后以空白樣品調(diào)零，在765 nm波長下測定標準溶液的吸光度，以沒食子酸質(zhì)量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。（2）樣品含量的檢測。精確稱取0.5 g假煙葉樹樣品，加入100 mL 60%乙醇，80℃回流提取2 h，過濾，濾液定容至250 mL，吸取0.5 mL溶液，于100 mL容量瓶中，其他操作與標準品相同，于765 nm處測定吸光值，根據(jù)標準曲線計算假煙葉樹中多酚含量。

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