HPLC測定野菊花藥材中8種黃酮和有機酸的含量

　　[摘要] 建立同時測定野菊花藥材中綠原酸、咖啡酸、1，3-二咖啡酰奎寧酸、3，5-二咖啡�？鼘幩�、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，4-二咖啡酰奎寧酸、蒙花苷及木犀草素等8 種成分含量的方法。采用HPLC，Shim pack VP-ODS色譜柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；以甲醇（A）-0.3%磷酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫，流速1.0 mL·min^-1；檢測波長326 nm；柱溫35 ℃。8種成分在40 min內均達到基線分離，線性關系良好（r>0.999 5， n=7）；平均回收率均在97.03%～102.3% （RSD<2.0%，n=6）。結果表明該方法操作簡單，準確性和重現(xiàn)性良好，為野菊花藥材的質量控制提供科學依據。
　　[關鍵詞] 野菊花；高效液相色譜法；黃酮；有機酸；含量測定；質量標準
　　野菊花為菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥頭狀花序，具有清熱解毒、疏風平肝之功效，用于疔瘡、癰腫、丹毒、風熱感冒、咽喉腫痛、高血壓、眩暈、頭痛等。野菊花中富含黃酮類、有機酸類、萜類、揮發(fā)油等化學成分^[1]。1，3-二咖啡�？鼘幩帷�3，5-二咖啡�？鼘幩�、3，4-二咖啡�？鼘幩崾潜菊n題組從野菊花中分得的3個活性成分。藥理研究表明咖啡�？鼘幩犷惓煞志哂休^好的抗炎、抗氧化、抗菌等作用^[2]，與野菊花的藥理活性相一致。目前，已有報道對野菊花藥材及其提取物中的單一或多種成分進行定量分析^[3-5]，采用HPLC同時測定野菊花中 8 種黃酮類和有機酸類成分（綠原酸、咖啡酸、1，3-二咖啡酰奎寧酸、3，5-二咖啡酰奎寧酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，4-二咖啡�？鼘幩帷⒚苫ㄜ占澳鞠�草素）尚屬首次。本研究對不同產地野菊花藥材中8種成分進行含量分析，為提升野菊花藥材的質量控制方法提供了實驗依據。
　　1 材料
　　Shimadzu LC-20A高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；BP211D型電子天平（1/10萬，德國Sartarius公司）；Milli-Q超純水機（美國 Millipore公司）；KQ-500E型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；8453型紫外-可見分光光度計（美國Agilent公司）；中藥粉碎機（瑞安市永歷制藥機械有限公司）。
　　對照品綠原酸（批號 110753-200413）、咖啡酸（批號 110885-200102）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（批號 111720-200604）、蒙花苷（批號 111528-200303）、木犀草素（批號 111520-200201）均購自中國食品藥品檢定研究院。對照品1，3-二咖啡�？鼘幩�、3，5-二咖啡�？鼘幩帷�3，4-二咖啡�？鼘幩嵊杀締挝惶烊凰幬锘瘜W室分離得到，經HPLC峰面積歸一化法測定其純度大于98.0%；甲醇（色譜純，天津四友精細化學品有限公司）、乙腈（色譜純，TEDIA，USA），醋酸（分析純，國藥集團化學試劑公司）、磷酸（分析純，上海蘇懿化學試劑有限公司）。
　　5批野菊花藥材分別購于南京醫(yī)藥合肥大藥房連鎖有限公司（批號 20120806）、合肥國大藥房（批號20110901）、合肥百姓緣大藥房（批號 20120301）、合肥北京同仁堂合肥藥店（批號 200007937）和合肥德康大藥房（批號 20120622），其產地分別為安徽、湖北、湖南、河北和山西，經安徽醫(yī)科大學藥學院中藥學教研室張群林副教授鑒定為Ch. indicum的干燥頭狀花序。
　　2 方法與結果
　　2.1 色譜條件 Shim pack VP-ODS色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相A為醇，B為0.3%磷酸水溶液。梯度洗脫，0～9 min，B 85%～80%；9～12 min，B 80%～70%；12～15 min，B 70%～65%；15～20 min，B 65%～60%；20～23min，B 60%～55%；23～29 min，B 55%～54%；29～32 min，B 54%～45%；32～37 min，B 45%～5%；37～45 min，B 5%。流速1.0 mL·min^-1，檢測波長326 nm，進樣量20 μL，柱溫為35 ℃。在上述色譜條件下8種成分與其他共存峰得到很好的分離，分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)均大于1萬。見圖1。
　　2.2 對照品溶液配制 分別精密稱取綠原酸2.05 mg，咖啡酸1.22 mg，1，3-二咖啡�？鼘幩�1.56 mg，3，5-二咖啡�？鼘幩�1.52 mg，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷2.24 mg，3，4-二咖啡�？鼘幩�2.07 mg，蒙花苷2.51 mg，木犀草素2.08 mg置5 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得綠原酸0.410 g·L^-1，咖啡酸0.244 g·L^-1，1，3-二咖啡�？鼘幩�0.312 g·L^-1，3，5-二咖啡�？鼘幩�0.304 g·L^-1，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷 0.448 g·L^-1， 3，4-二咖啡酰奎寧酸 0.414 g·L^-1， 蒙花苷 0.502 g·L^-1，木犀草素0.416 g·L^-1的對照品貯備液。分別精密量取2.5 mL綠原酸，0.25 mL咖啡酸，1.0 mL 1，3-二咖啡�？鼘幩幔�2 mL 3，5-二咖啡�？鼘幩�，0.5 mL木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，1.0 mL 3，4-二咖啡�？鼘幩幔�2.0 mL蒙花苷和0. 5 mL木犀草素對照品溶液，置10 mL量瓶中，定容至刻度，即得到混合對照品溶液。

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