穿心蓮藥材貯藏期有效成分穩(wěn)定性考察

　　摘要：目的 考察穿心蓮藥材貯藏期內(nèi)穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的動(dòng)態(tài)變化。方法 采用高效液相色譜法，分別考察0、3、6、9、12、15、18個(gè)月貯藏期的穿心蓮藥材中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。結(jié)果 隨貯藏期的延長(zhǎng)，穿心蓮內(nèi)酯呈遞減趨勢(shì)，而脫水穿心蓮內(nèi)酯有升高趨勢(shì)。結(jié)論 穿心蓮藥材在0～12個(gè)月貯藏期內(nèi)，穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量變化相對(duì)明顯，在12～18個(gè)月內(nèi)，穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量趨于穩(wěn)定。
　　關(guān)鍵詞：穿心蓮 貯藏期 穿心蓮內(nèi)酯 脫水穿心蓮內(nèi)酯
　　穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide）和脫水穿心蓮內(nèi)酯（Dehydroandrographolide）是傳統(tǒng)中藥穿心蓮的主要活性成分，二者因化學(xué)結(jié)構(gòu)相近，在藥理活性如解熱、抗菌消炎、抗病毒等方面有很多相似之處。但二者又不完全相同，一方面[1]表現(xiàn)在體外藥理活性，如抗腫瘤 （穿心蓮內(nèi)酯有抗腫瘤活性，脫水穿心蓮內(nèi)酯無(wú)抗腫瘤活性）、抗炎能力的強(qiáng)弱（脫水穿心蓮內(nèi)酯抗炎活性強(qiáng)，穿心蓮內(nèi)酯抗炎活性弱）；另一方面表現(xiàn)在生物利用度方面，如穿心蓮內(nèi)酯靜注或灌胃給藥， 在動(dòng)物體內(nèi)達(dá)峰快， 半衰期長(zhǎng)，生物利用度高[2] ，而脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽口服給藥其生物利用度極低，測(cè)不到血藥[3]。本文考察了穿心蓮藥材在貯藏過(guò)程中，其內(nèi)部活性成分穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的動(dòng)態(tài)含量變化，以期為臨床用藥和質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
　　1儀器與試劑
　　Agilent 1200高效液相色譜儀；Sartorius 十萬(wàn)分之一電子天平；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純；穿心蓮內(nèi)酯（110797-200307）及脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品（110854-200306）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；穿心蓮藥材來(lái)源于廣東湛江遂溪穿心蓮基地，經(jīng)鑒定為為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata （Burm.f_）Nees。
　　2方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件 色譜柱：Diamsonsil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm， 5μm），甲醇一水（60：40）為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：225.8nm（用于檢測(cè)穿心蓮內(nèi)酯），254.8 nm （用于檢測(cè)脫水穿心蓮內(nèi)酯） ；進(jìn)樣量10μl；理論塔板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯計(jì)算應(yīng)不低于3000。穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的保留時(shí)間分別為5.8min和14.5 min，并且與其他組分分離良好。對(duì)照品和樣品的高效液相色譜圖見圖1。
　　2.2 線性關(guān)系考察 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品適量，加甲醇溶解并定容至25ml，分別制備成濃度為1.02mg/ml和0.98 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液各50、100、200、400、800、1600μl加甲醇定容至10ml，得穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品的系列標(biāo)準(zhǔn)液。依選定的色譜條件，分別吸取10μl進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，回歸方程分別為：穿心蓮內(nèi)酯，A=1377.67 X一8.1167，r=0.9999，線性范圍為0.051μg～1.632μg；脫水穿心蓮內(nèi)酯，A=598.67 X+2.079，r=0.9999，線性范圍為0.049μg～1.568μg。
　　2.3 對(duì)照品的制備 分別精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，得穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品0.102mg/ml，脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品0.098mg/ml，備用。
　　2.4 樣品的制備 參考2010版藥典[4]方法，取穿心蓮藥材粉末（過(guò)四號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%甲醇25ml，稱定重量，浸泡1h，超聲處理（25W，頻率33kHz）30min，放冷，再稱定重量，用40%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10ml，置中性氧化鋁柱（200～300目，5g，內(nèi)徑為1.5cm）上，用甲醇15ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
　　2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，穿心蓮內(nèi)酯的RSD=0.85% ，脫水穿心蓮內(nèi)酯的RSD=0.93% 。
　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取樣品溶液10μl，分別于0，2，4，8，12，24h進(jìn)行測(cè)定，穿心蓮內(nèi)酯的RSD=1.08% ，脫水穿心蓮內(nèi)酯的RSD=0.76% 。結(jié)果表明樣品溶液放置24h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批次穿心蓮藥材樣品6份，按2.3項(xiàng)下操作，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定峰面積，結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯的RSD=2.89% ，脫水穿心蓮內(nèi)酯的RSD=2.57% 。
　　2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取6份同一已知穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的穿心蓮藥材0.25g，分別準(zhǔn)確加入穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品3mg和脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品1mg，余同2.3項(xiàng)下操作，進(jìn)樣測(cè)定峰面積，見表1，2。
　　2.9 樣品含量測(cè)定 考察穿心蓮在不同貯藏期的性狀（包括色澤、氣味、霉變、蟲蛀等），未見異常。取不同貯藏期的穿心蓮藥材0.5g，按2.3項(xiàng)下操作，取10μl注入高效液相色譜儀。以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量（對(duì)照品同2.2項(xiàng)下，進(jìn)樣10μl），見表3。
　　3討論
　　通過(guò)對(duì)不同貯藏期穿心蓮藥材中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的測(cè)定，結(jié)果表明：穿心蓮藥材在貯藏過(guò)程中，穿心蓮內(nèi)酯含量逐漸減少，而脫水穿心蓮內(nèi)酯含量逐漸增加。且0～12個(gè)月內(nèi)，穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量變化相對(duì)明顯；而12～18個(gè)月內(nèi)，穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量趨于穩(wěn)定。
　　參考文獻(xiàn)：
　　[1]曾超.穿心蓮而萜內(nèi)酯類化合物的合成與活性研究[D].河南：河南大學(xué)，2007：39-42.
　　[2]汪寶琪，龐志功，汪叢瑩，等.間接化學(xué)發(fā)光法監(jiān)測(cè)家兔血中穿心蓮內(nèi)酯的血藥濃度[J].化學(xué)通報(bào)，1994，7：50-52.
　　[3]張志勇，廖工鐵，王炳南等.脫水穿新蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽在家兔俸內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].華西藥學(xué)雜志，1991，6（3）：129.
　　[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.
　　編輯/王海靜

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