葎草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

　　[摘要]為建立葎草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，參照《中國(guó)藥典》2010年版附錄相關(guān)方法，對(duì)葎草藥材的水分、灰分進(jìn)行測(cè)定；以木犀草苷和大波斯菊苷為指標(biāo)成分，采用薄層色譜法進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果表明葎草的顯微鑒別特征性強(qiáng)；薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度好；葎草中含木犀草苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.015% ～ 0.651%（平均值0.148%），含大波斯菊苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.003% ～ 0.118%（平均值0.036%）。所建立的方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于葎草藥材的質(zhì)量控制。
　　[關(guān)鍵詞]葎草藥材；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；顯微鑒別；薄層鑒別；含量測(cè)定
　　葎草別名拉拉秧、鋸子草、五爪龍等，始載于《唐本草》，為桑科植物葎草Humulus scandens.（Lour.）Merr.的干燥地上部分，具有清熱解毒、利尿通淋之功效，用于肺熱咳嗽、肺癰、虛熱煩渴、熱淋、水腫、小便不利、濕熱瀉痢、熱毒瘡瘍等癥^[1-3]。葎草全草中含黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、生物堿、揮發(fā)油、酸性物質(zhì)等多種化學(xué)成分^[4-6]，其中黃酮類(lèi)化合物是從葎草全草中分離出的含量較高的成分^[7]，且現(xiàn)代藥理研究表明葎草中的黃酮類(lèi)物質(zhì)是其利水消腫、保護(hù)血管等藥理作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)^[8-9]。葎草為尿感寧顆粒等成方制劑的重要組成藥味，是《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄收錄品種，只規(guī)定其基源，無(wú)鑒別項(xiàng)、檢查項(xiàng)和對(duì)指標(biāo)成分定性、定量檢測(cè)，難以控制藥材及其制劑的質(zhì)量和保證臨床用藥的安全性和有效性。
　　本研究首次建立葎草藥材的質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn)，包括性狀描述、顯微鑒別，水分、灰分測(cè)定，以木犀草苷和大波斯菊苷為指標(biāo)成分的薄層色譜鑒別及高效液相色譜含量測(cè)定方法，為葎草藥材及其制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
　　1 材料
　　Agilent1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司，包括四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測(cè)器、工作站）；Linomat-Ⅵ薄層色譜自動(dòng)點(diǎn)樣器（瑞士CAMAG公司）；Reprostar 3薄層色譜攝像儀（瑞士CAMAG公司）；sartoriusBSA124S-CW電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；sartoriusBT 25 S電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；DHG-9053A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）；SX₂型箱式電爐（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）。
　　乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。HSG薄層色譜硅膠預(yù)制板（批號(hào)110601，煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所）。木犀草苷、大波斯菊苷對(duì)照品（上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心，純度>98%）；16批葎草藥材均為市售品和產(chǎn)地收集，由上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心吳立宏博士鑒定為�？浦参锶劜軭. scandens的干燥地上部分，詳見(jiàn)表1。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 性狀
　　本品為纏繞草本，莖、枝、葉柄均具倒鉤刺。莖藤六角柱形，不易折斷；葉為近腎狀五角形掌狀，5～7深裂，稀為3裂，基部心臟形，表面粗糙，具毛茸，裂片卵狀三角形，邊緣呈鋸齒狀；葉柄長(zhǎng)5～10 cm。雄花小，圓錐花序，長(zhǎng)約15～25 cm，花被片5，黃綠色；雌花序球果狀，徑約5 mm，苞片紙質(zhì)，卵狀披針形，具白色絨毛。體輕，氣微，味淡。
　　2.2 鑒別
　　2.2.1 顯微鑒別
　　本品粉末灰綠色或綠色。淀粉粒較多，單粒類(lèi)圓形，直徑約8～20 μm，臍點(diǎn)不甚明顯，點(diǎn)狀或裂縫狀，偏光顯微鏡下呈黑色十字形；復(fù)粒較多，由2-6分粒組成。草酸鈣簇晶較多，大小相近，直徑5～18 μm，偏光顯微鏡下呈多彩狀。葉表皮中分布有很多含大型類(lèi)圓形鐘乳體的晶細(xì)胞，鐘乳體直徑約45～71 μm；表皮中可見(jiàn)類(lèi)圓形的腺鱗。非腺毛1～2細(xì)胞，多為單細(xì)胞，壁上有時(shí)可見(jiàn)疣狀突起。螺紋導(dǎo)管、網(wǎng)紋導(dǎo)管、具緣紋孔導(dǎo)管可見(jiàn)。導(dǎo)管或纖維旁�？梢�(jiàn)內(nèi)含紅棕色物的長(zhǎng)管狀細(xì)胞，直徑11～55 μm。纖維成束或單個(gè)散在，兩端較平截，見(jiàn)圖1。
　　本品葉的表面觀：上表皮細(xì)胞垂周壁略呈微波狀彎曲，下表皮細(xì)胞垂周壁波狀彎曲明顯；上下表皮均分布有氣孔，氣孔不定式，副衛(wèi)細(xì)胞4～5個(gè)。葉表皮中分布有很多含大型類(lèi)圓形鐘乳體的晶細(xì)胞；表皮中可見(jiàn)類(lèi)橢圓形的腺鱗；有時(shí)可見(jiàn)單個(gè)散離的小腺毛，柄短。非腺毛眾多，細(xì)長(zhǎng)，由1～2細(xì)胞組成，先端細(xì)尖或呈鉤狀，有的基部細(xì)胞膨大，周?chē)��?xì)胞呈放射狀排列。草酸鈣簇晶多見(jiàn)，常沿著葉脈分布，偏光顯微鏡下呈多彩狀，見(jiàn)圖2。
　　2.2.2 薄層色譜鑒別
　　2.2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取木犀草苷、大波斯菊苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加70%甲醇制得每1 mL各含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
　　2.2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末2 g，加70%甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)�加甲�? mL使溶解，作為供試品溶液。
　　2.2.2.3 薄層色譜條件及結(jié)果
　　照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（10∶3∶0.3）為展開(kāi)劑，預(yù)飽和10 min，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1% 三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈365 nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖3。
　　2.3 檢查
　　2.3.1 水分測(cè)定
　　取供試品2 g（過(guò)2號(hào)篩），精密稱(chēng)定，按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅸ H水分測(cè)定法第一法測(cè)定。葎草水分為8.40%～11.61%，平均值為10.11%。
　　2.3.2 總灰分和酸不溶性灰分測(cè)定

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