基于UFLC?Q?TOF?MS/MS技術(shù)及PCA分析的不同產(chǎn)地杏香兔耳風(fēng)藥材差異研究

　　[摘要]該研究建立UFLCQTOFMS/MS 技術(shù)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析法快速、簡便、準(zhǔn)確鑒別不同產(chǎn)地杏香兔耳風(fēng)藥材差異性的方法。采用超高速液相飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀（UFLCQTOFMS/MS）對(duì)江西、云南、江蘇和河南地區(qū)等產(chǎn)地的杏香兔耳風(fēng)藥材進(jìn)行檢測，質(zhì)譜采用ESI源的負(fù)離子模式，利用Markerview等軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行PCA和OPLSDA聚類分析及t檢驗(yàn)。結(jié)果顯示在負(fù)離子模式下不同產(chǎn)地的藥材主成分得到了良好的區(qū)分，聚類結(jié)果同時(shí)體現(xiàn)了杏香兔耳風(fēng)藥材在地域間的差異性和相似性，共鑒定出40種差異成分。該研究建立的鑒別杏香兔耳風(fēng)藥材產(chǎn)地差異性的方法具有快速準(zhǔn)確和簡便等優(yōu)勢，為杏香兔耳風(fēng)不同產(chǎn)地的藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)奠定了基礎(chǔ)。
　　[關(guān)鍵詞]杏香兔耳風(fēng)； 化學(xué)成分； 產(chǎn)地差異； 液質(zhì)聯(lián)用； 聚類分析
　　[Abstract]A rapid and accurate method of UFLCQTOFMS/MS combined with multivariate statistical analysis was established for the identification of Ainsliaea fragrans from different origins in this study The A fragrans from different producing areas of Jiangxi， Yunnan， Henan and Jiangsu were determined by UFLCQTOFMS/MS in the negative ion mode And the data of the study were analyzed by the Markerview and other software for the PCA and OPLSDA cluster analysis as well as t test The results of the principal component analysis（PCA）showed that the main components from different origins were well distinguished And the results of multivariate statistical showed the differences and similarities between different producing areas Besides， 40 different compounds were identified in the negative ion mode This method for identifying A fragrans from different producing areas has the advantages of rapid accuracy and simplicity， which laid the foundation for the evaluation of the quality of the A fragrans.
　　[Key words]Ainsliaea fragrans； chemical compositions； different sources； UFLCMS； cluster analysis
　　杏香兔耳風(fēng)為菊科兔耳風(fēng)屬植物杏香兔耳風(fēng)Ainsliaea fragrans Champ，具有清熱，消積散結(jié)，止咳，涼血，解毒的功效，臨床主要用于上呼吸道感染，肺結(jié)核咯血，黃疸，腸炎痢疾，消化不良，跌打損傷和泌尿系統(tǒng)炎癥等疾病，具有良好的效果[1]。杏香兔耳風(fēng)屬于收載在《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中的江西特色優(yōu)勢藥材[2]，以其為主要組成的杏香兔耳風(fēng)片制劑和杏香兔耳風(fēng)膠囊屬于國家中藥保護(hù)品種，主要用于慢性宮頸炎，盆腔炎等疾病。杏香兔耳風(fēng)抗宮頸炎療效較好，且不易產(chǎn)生耐藥性，在婦科用藥市場上具有一定的市場占有率。然而，目前杏香兔耳風(fēng)產(chǎn)地較多，由于生長環(huán)境不同，藥材品質(zhì)存在一定的差異，缺少整體性分析的杏香兔耳風(fēng)藥材評(píng)價(jià)方法 [35]。近年來，利用PCA和OPLSDA等統(tǒng)計(jì)方法建立的植物代謝組學(xué)技術(shù)為中藥整體性分析提供可能，該技術(shù)可對(duì)不同產(chǎn)地植物進(jìn)行無差別代謝成分整體分析[6]。目前，該技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于不同產(chǎn)地的人參[7]、草麻黃根與莖[8]、人參與西洋參葉[9]等的差異性研究，該方法不僅可以反映不同樣本的相似性，而且可以確定不同樣本的差異性，為中藥質(zhì)量控制提供一種強(qiáng)有力的整體鑒別技術(shù)[10]，此外，UFLCQTOFMS/MS 技術(shù)具有高分辨率、高靈敏度、分析時(shí)間短等優(yōu)勢，與植物代謝技術(shù)可以有效的結(jié)合。本實(shí)驗(yàn)采用基于UFLCQTOFMS/MS 技術(shù)的植物代謝組學(xué)方法對(duì)不同產(chǎn)地的杏香兔耳風(fēng)藥材進(jìn)行比較分析，通過發(fā)現(xiàn)差異化合物的相對(duì)含量，對(duì)不同產(chǎn)地的藥材的指標(biāo)性成分的差異進(jìn)行探討，為杏香兔耳風(fēng)藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供新依據(jù)。
　　1材料
　　Tripie TOF 5600 Plus 高分辨質(zhì)譜儀（美國 Sciex 公司）；Analyst TF16，peakview 12 和markerview 121數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國 Sciex 公司）；LC30A 超高效液相色譜儀（日本島津公司），包括 LC30AD 高壓輸液泵，CBM20A 系統(tǒng)控制器，SIL30AC 自動(dòng)進(jìn)樣器，DUG20A5 在線脫氣機(jī)，CTO30A 柱溫箱；KQ250DB 型數(shù)控超聲清洗器（鞏義市予華儀器有限公司）。
　　甲醇、乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Scientific，F(xiàn)airlawn，NJ，USA）；甲酸（色譜純，SigmaAldrich CoLtd，St Louis，MO，USA）；蒸餾水（屈臣氏集團(tuán)），其他試劑為分析純。

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