中藥材有效部位總黃酮含量測定方法研究概述

　　摘要：黃酮類化合物為多種中藥材有效成分，具有廣泛的生物活性和臨床應(yīng)用范圍，其種類繁多、成分復(fù)雜，僅對某種或若干有效/指標性成分進行定量分析未必能反映其總黃酮量，存在一定局限性。而測定有效部位總黃酮含量是中藥材及中藥制劑質(zhì)量控制的重要內(nèi)容。目前，總黃酮含量測定方法主要有紫外-可見分光光度法、熒光分光光度法、高效液相色譜法、毛細管電泳法、薄層色譜法及近紅外光譜法等。本文對中藥材總黃酮含量測定方法及特點進行綜述，為中藥材質(zhì)量控制提供參考。
　　關(guān)鍵詞：總黃酮；中藥材；含量測定；綜述
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.04.031
　　中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2018）04-0136-05
　　Abstract： The flavonoids are the active ingredients of many Chinese materia medica， with widespread biological activities and a wide range of clinical application. There are many types of flavonoids， and its chemical structure is complex. Quantitative analysis of only one or several valid / indexed components may not necessarily reflect the amount of total flavonoids， with some limitations. The content determination of total flavonoids in effective parts of Chinese materia medica is an important aspect of quality control. The main methods for determining total flavonoid content are as follows： UV-visible spectropho-tometry， fluorescence spectrophotometry， high performance liquid chromatography， capillary electrophoresis， thin layer chromatography， as well as near-infrared spectroscopy and so on. In this article， the methods and characteristics in the determination of total flavonoids in Chinese materia medica were reviewed， so as to provide references for the quality control of Chinese materia medica.
　　Keywords： total flavonoids； Chinese materia medica； content determination； review
　　黃酮類化合物是廣泛存在于植物界的一大類天然產(chǎn)物，系指有2個酚羥基的苯環(huán)（A-與B-環(huán)）通過中央三碳原子相互連接，一般具有C6-C3-C6骨架結(jié)構(gòu)[1]。黃酮類化合物具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、抗炎抗過敏、預(yù)防心血管疾病、調(diào)節(jié)免疫功能、止血止痛、抗菌抑菌等作用，是一類生理活性強、藥理作用廣泛的化合物[2]。
　　由于中藥材所含的有效成分數(shù)量繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且部分含量較低，分離條件較難摸索，僅對某種或若干有效/指標性成分進行定量分析未必能反映其總黃酮量，存在一定局限性。中藥為具有涌現(xiàn)性特征的復(fù)雜系統(tǒng)[3]，測定有效部位的含量作為中藥材質(zhì)量控制中定量的一種手段，符合中藥材質(zhì)量控制的自身特點，具有較好的合理性和可靠性。目前，黃酮類有效部位含量測定的方法主要有紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法、熒光分光光度法、薄層色譜法、毛細管電泳法，以及近年興起的近紅外光譜法等，茲就各方法在總黃酮含量測定方面的應(yīng)用特點進行綜述，為以黃酮類化合物為主要成分的中藥材的質(zhì)量控制研究提供參考。
　　1 紫外-可見分光光度法
　　黃酮類化合物的甲醇溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)產(chǎn)生2個主要特征吸收帶，即240～280 nm（帶Ⅱ）和300～400 nm（帶Ⅰ），由于分子結(jié)構(gòu)的差異，不同類型黃酮化合物的帶Ⅰ和帶Ⅱ峰形和吸收強度各異[4]。各種類型的黃酮分子結(jié)構(gòu)上多有酚羥基取代，在堿性條件下，2個吸收峰帶可發(fā)生紅移[5]，利用這一光譜性質(zhì)，可在其紫外波譜最大吸收波長處測定總黃酮的含量。
　　1.1 比色法
　　比色法是最經(jīng)典的測定中藥材/中藥制劑中總黃酮含量的測定方法，也是歷版《中華人民共和國藥典》測定總黃酮廣泛采用的方法。該法是在堿性環(huán)境中，黃酮類化合物與金屬鹽類反應(yīng)形成有色螯合物，生成的螯合物在紫外-可見光光譜上能產(chǎn)生明顯的波譜變化，使吸收峰紅移，可用來測定總黃酮的含量。常用的金屬鹽試劑離子有Al3+、Mg2+、Zr2+、Sr2+等。
　　1.1.1 Al（NO3）3-NaNO2-NaOH比色法
　　該法為歷版《中華人民共和國藥典》測定中藥材/中藥制劑總黃酮應(yīng)用頻率最高的方法，系用還原劑NaNO2還原黃酮化合物，再用絡(luò)合劑Al3+進行絡(luò)合，最后在NaOH堿性條件下黃酮類化合物開環(huán)，生成查爾酮結(jié)構(gòu)絡(luò)合物而顯色，可在500～510 nm處進行測定。常飛等[6]以蘆丁為對照品，采用Al（NO3）3-NaNO2- NaOH比色法，在505 nm處對貴州產(chǎn)白補藥中總黃酮含量進行測定，考察顯色劑的用量及顯色時間對試驗結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)顯色劑Al（NO3）3、NaNO2、NaOH的用量對吸光度存在一定影響。劉東彥等[7]采用該法在510 nm處對雪松松針中總黃酮進行大孔樹脂純化，并測定其含量，顯色條件為5%NaNO2 0.3 mL（靜置6 min），10%Al（NO3）3 0.3 mL（靜置6 min），4%NaOH 4 mL（靜置15 min）。

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