HPLC同時(shí)測定黑老虎藥材中2種三萜酸的含量

　　[摘要] 目的 建立黑老虎中12-乙酰氧基黑老虎酸和開環(huán)新五味子酸A的含量測定方法。 方法 采用超聲法提取藥材，色譜柱為Atlantis T3-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水溶液（80∶20），檢測波長：210 nm，流速1.0 mL/min，柱溫為30℃。 結(jié)果 12-乙酰氧基黑老虎酸進(jìn)樣量在0.0157～0.3140 μg與峰面積值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r = 0.9998），平均回收率為100.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）為2.58%（n = 6）；開環(huán)新五味子酸A進(jìn)樣量在0.0848～1.6960 μg與峰面積值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r = 0.9999），平均回收率為101.1%，RSD為1.21%（n = 6）。 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、簡便、重復(fù)性好，可用于黑老虎藥材中12-乙酰氧基黑老虎酸和開環(huán)新五味子酸A的含量測定。
　　[關(guān)鍵詞] 黑老虎；12-乙酰氧基黑老虎酸；開環(huán)新南五味子酸A；高效液相色譜
　　[中圖分類號] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）08（a）-0031-04
　　[Abstract] Objective To establish a method for the determination of 12-acetoxycoccinic acid and seco-neokadsuranic acid A in root of Kadsura coccinea. Methods Ultrasonic method was used to extract the herbs. HPLC chromatographic conditions included the Atlantis T3-C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） column， using acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （80∶20） as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 310 nm and the column temperature was maintained at 30℃. Results The calibration curve of 12-acetoxycoccinic acid was in good linearity over the range of 0.0157-0.3140 μg （r = 0.9998）. The average recovery was 100.4% with RSD of 2.58% （n = 6）. And the calibration curve of seco-neokadsuranic acid A was in good linearity over the range of 0.0848-1.6960 μg （r = 0.9999）. The average recovery was 101.1% with RSD of 1.21% （n = 6）. Conclusion The method is accurate， simple， reproducible， and can be used to determine the content of 12-acetoxycoccinic acid and seco-neokadsuranic acid A in the root of Kadsura coccinea.
　　[Key words] Kadsura coccinea； 12-acetoxycoccinic acid； Seco-neokadsuranic acid A； High performance liquid chromatography
　　黑老虎為五味子科南五味子屬植物厚葉五味子Kadsura coccinea（Lem.）A.C. Smith的干燥根，別名冷飯團(tuán)、布福娜、緋紅南五味子、過山龍?zhí)�、鉆地風(fēng)等，主要分布于我國廣東、廣西、福建等嶺南地區(qū)，以及越南、緬甸等東南亞國家[1]。味辛、性溫，具有行氣活血、祛風(fēng)止痛的功效，主要用于治療風(fēng)濕痹痛、痛經(jīng)、脘腹疼痛、跌打損傷等；常用于胃、十二指腸潰瘍、慢性胃炎、急性胃腸炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等病[2]，為名優(yōu)中成藥“舒筋健腰丸”“壯腰健腎丸”等產(chǎn)品的主要原料藥之一�，F(xiàn)代研究表明，黑老虎主要含有木脂素和三萜類化合物，它們具有抗肝炎、抗HIV病毒、抗腫瘤、抗氧化、血小板活化因子拮抗作用及對血管平滑肌的舒張作用等藥理活性[3-5]。
　　目前，《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》等地方標(biāo)準(zhǔn)對黑老虎的質(zhì)量控制項(xiàng)中，僅有性狀鑒別、顯微鑒別及薄層鑒別，無“含量測定”項(xiàng)[2]。近年來，國內(nèi)外許多學(xué)者對黑老虎的研究主要集中于繁殖、栽培、化學(xué)成分及藥理作用等方面，其中，有效活性成分一直都是研究的重點(diǎn)[6-18]。文獻(xiàn)調(diào)研可知，木脂素類和三萜類是黑老虎的主要生物活性成分，其中三萜酸類成分“12-乙酰氧基黑老虎酸”具有顯著的抗HCV活性，可用于制備抗丙肝病毒的藥物[19]；“開環(huán)新五味子酸A”也具有一定的抗癌活性[20]，而關(guān)于黑老虎中三萜酸類成分定量分析的文獻(xiàn)尚未見報(bào)道。本研究首次建立了高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測定不同產(chǎn)地黑老虎中兩種三萜酸（12-乙酰氧基黑老虎酸、開環(huán)新五味子酸A）的含量，以期為黑老虎藥材的資源合理開發(fā)及品質(zhì)評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 儀器
　　Agilent 1200高效液相色譜議（美國安捷倫公司）；Atlantis T3-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，美國安捷倫公司）；Agilent DAD檢測器（美國安捷倫公司）；Millpore simplicity-67120型超純水器（美國密理博公司）；BS110S型萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）；WXJ型粉碎機(jī)（上海凱旋中藥機(jī)械制造有限公司）；KQ-100DV超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

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