茶葉乙醇提取物清除自由基活性及相關(guān)性分析

　　摘要：以5種茶葉乙醇提取物為研究對(duì)象，測(cè)定其茶多酚、茶多糖、黃酮、茶紅素、茶褐素、茶黃素以及茶色素的含量以及清除自由基能力，分析乙醇提取物中活性成分含量與清除自由基能力之間的關(guān)系，并建立回歸模型。結(jié)果表明，不同品種茶葉提取物活性成分含量以及清除自由基能力均存在一定差異。相關(guān)性分析顯示，茶葉提取物中茶黃素含量與羥基自由基清除能力呈顯著負(fù)相關(guān)，茶褐素以及茶色素含量與DPPH·自由基清除能力呈顯著負(fù)相關(guān)，茶多酚含量與超氧陰離子自由基清除能力呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.883、-0.934、-0.887以及0.945。
　　關(guān)鍵詞：茶葉；抗氧化；清除自由基；相關(guān)性分析
　　中圖分類號(hào)：TQ91 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）13-3430-04
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.13.040
　　作為人體外源性抗氧化物質(zhì)的最重要來(lái)源，植物提取物的抗氧化研究開(kāi)發(fā)日益受到重視[1]。自由基是指外層軌道含有未配對(duì)電子的原子、分子或基團(tuán)，是需氧生物生命活動(dòng)過(guò)程中許多生物化學(xué)反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物。研究發(fā)現(xiàn)，自由基對(duì)機(jī)體的氧化損傷與有機(jī)體的多種疾病有關(guān)[2]。茶葉是天然抗氧化劑資源。近年來(lái)，研究者對(duì)不同品種茶葉中的黃酮、茶多酚、茶色素、茶多糖等活性成分的提取與抗氧化性能進(jìn)行了分析，特別是在清除自由基方面進(jìn)行了較多的研究[3-10]。本試驗(yàn)以5種茶葉為原料，比較5種茶葉乙醇提取物清除自由基的能力并探究其與茶黃酮、茶多酚、茶多糖等活性成分含量之間的相關(guān)性，以期為茶葉活性成分的提取提供參考。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料與儀器
　　1.1.1 材料與試劑 茶葉：高級(jí)綠茶，產(chǎn)地江蘇無(wú)錫；明前毛尖，產(chǎn)地福建武夷山；名苑春芽，產(chǎn)地江蘇句容；碧螺春，產(chǎn)地杭州錢塘；金寨翠綠，產(chǎn)地安徽金寨，5種茶葉均為一級(jí)。
　　標(biāo)準(zhǔn)品：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純，南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司）；沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純，南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司）；乙醇、乙酸乙酯、碳酸氫鈉、苯酚、硫酸、鄰苯三酚、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、草酸、葡萄糖、水楊酸、過(guò)氧化氫（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；10%福林酚試劑（分析純，上海荔達(dá)生物科技有限公司）；DPPH·自由基（分析純，北京中生瑞泰科技有限公司）。
　　1.1.2 主要儀器設(shè)備 電子天平：JA5003N型，上海精密科學(xué)儀器有限公司；分光光度計(jì)：WFJ7200型，尤尼柯（上海）儀器有限公司；微波萃取儀：MAS-2型，上海新儀微波化學(xué)科技有限公司。
　　1.2 方法
　　1.2.1 樣品的制備 采用微波輔助法提取茶多酚，稱取經(jīng)粉碎的茶葉約1 g，按料液比1∶35加入80%的乙醇溶液于微波專用的三頸燒瓶中，置于微波反應(yīng)器內(nèi)，調(diào)節(jié)微波時(shí)間3 min、微波溫度65 ℃、微波功率400 W進(jìn)行萃取。將萃取液趁熱過(guò)濾，3 000 r/min離心10 min，取上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮、真空干燥后得到乙醇提取物。
　　1.2.2 活性物質(zhì)測(cè)定
　　1）茶多酚含量的測(cè)定。提取物中茶多酚含量的測(cè)定參照Folin-Ciocalteu比色法[11]。765 nm處測(cè)定其吸光度，根據(jù)沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中茶多酚的含量。沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.016 5x+0.012，R2=0.998 0。
　　2）茶黃酮含量的測(cè)定。參照文獻(xiàn)[12]采用硝酸鋁絡(luò)合分光光度法測(cè)定總黃酮。420 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中茶黃酮含量。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=9.07x-0.004，R2=0.998 7。
　　3）茶紅素、茶黃素、茶褐素以及茶色素含量測(cè)定。茶色素測(cè)定按Roberts等[13]的方法略有修改。準(zhǔn)確稱取茶葉提取物0.2 g，用水溶解稀釋到100 mL。吸取稀釋液25 mL，加乙酸乙酯25 mL，振蕩后取乙酸乙酯萃取液2 mL，加入95%乙醇定容至25 mL得到a液。吸取乙酸乙酯萃取液15 mL，加入2.5% NaHCO3溶液15 mL，劇烈振蕩30 s后，吸取乙酸乙酯上層液4 mL，用95%乙醇定容至25 mL得到c液。吸取第一次水層待用液2 mL，加入2 mL飽和草酸溶液和6 mL水，用95%乙醇定容至25 mL得到d液。再分別吸取25 mL稀釋液和25 mL正丁醇，振蕩后取水層2 mL，加入2 mL飽和草酸溶液和6 mL水，用95%乙醇定容至25 mL得到b液。以95%乙醇做空白，在380 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定各溶液的吸光度。
　　茶黃素含量=A×2.25/m×100%；茶紅素含量=（2Aa+2Ad-Ac-2Ab）×7.06/m×100%；茶褐素含量=7.06×2Ab/m×100%；茶色素含量=茶紅素+茶褐素+茶黃素。以上公式中，m為試樣質(zhì)量；Aa、Ab、Ac、Ad分別為溶液a、b、c、d的吸光度。
　　4）茶多糖含量的測(cè)定。采取苯酚硫酸法[14]測(cè)定。在490 nm處測(cè)定吸光度，并根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品吸光度所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的茶多糖含量。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=1.361 8x-0.019 7，R2=0.996 6。
　　1.2.3 茶葉提取物自由基清除能力測(cè)定
　　1）DPPH·自由基清除率的測(cè)定：根據(jù)文獻(xiàn)[15]測(cè)定，結(jié)果以維生素C作陽(yáng)性對(duì)照。
　　2）羥自由基清除率：參照文獻(xiàn)[14]測(cè)定，以維生素C作陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)[14]。計(jì)算清除率。
　　清除率=（[Ao-Ax-Axo）/Ao]×100%。
　　式中，Ao為對(duì)照組吸光度，Ax為多糖樣品吸光度，Axo為本底管吸光度。
　　3）超氧陰離子自由基清除率：超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定采用鄰苯三酚法[16]。320 nm下測(cè)定相應(yīng)吸光度，結(jié)果以維生素C作陽(yáng)性對(duì)照。

相關(guān)熱詞搜索：乙醇 相關(guān)性 提取物 活性 茶葉