博落回藥材的提取工藝研究

　　[摘要] 目的：研究博落回藥材的提取工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，以白屈菜紅堿得率及固形物為指標(biāo)，考察乙醇濃度(Ａ)、提取溫度(Ｂ)、pH值(Ｃ)三個(gè)因素對(duì)博落回提取工藝的影響。結(jié)果：優(yōu)化的博落回提取工藝為A2B1C2，即取博落回藥材以80%乙醇、調(diào)節(jié)pH=5.0、60℃溫浸提取。結(jié)論：本研究確定的最佳工藝可行。
　　[關(guān)鍵詞] 博落回；提取工藝；正交試驗(yàn)；白屈菜紅堿
　　[中圖分類號(hào)] R284[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1673-7210（2008）07（a）-011-03
　　
　　Study on the extraction process of Macleaya cordata(Willd.)R.Br.
　　LI Hui1，XIAO Jia-shang2
　�。�1.The Sixth Branch Institute for Drug Control of Guangzhou, Guangzhou 510800, China; 2.The Third Branch Institute for Drug Control of Guangzhou, Guangzhou 510700, China)
　　[Abstract] Objective: To optimize the extraction process of Macleaya cordata(Willd.)R.Br..Methods: The study was carried out through orthogonal experimental designed with chelerythrine as the guide,3 influence factors including alcohol concentration, extraction temperature and pH. Results: The optimal conditions for the extraction were A2B1C2,extracted with 80% alcohol (pH=5.0) at 60℃.Conclusion:The optimal process is proved to be feasible.
　　[Key words] Macleaya cordata(Willd.)R.Br.; Extraction process; Orthogonal experimental design; Chelerythrine
　　
　　博落回為罌粟科博落回屬植物博落回Macleaya cordata (Willd.)R.Br.的果實(shí)。現(xiàn)代研究表明，博落回果實(shí)中主要含生物堿成分，目前分得多種生物堿[1,2]：白屈菜紅堿（chelerythrine）、血根堿（sanguinarine）、原阿片堿（protopine）等。實(shí)驗(yàn)證明，博落回中生物堿對(duì)KB、P388、W256型腫瘤細(xì)胞有抑制作用，白屈菜紅堿有止咳、平喘、鎮(zhèn)痛作用，血根堿能抑制膽堿酯酶活性，還能加強(qiáng)心臟活動(dòng)、刺激唾液分泌，并具有利尿、外周抗腎上腺素解交感作用。
　　提取博落回生物堿的方法較多，有乙醇提取法[3]，大孔樹脂分離法[4]，酸水提取法等，但這些方法提取物中生物堿含量較低，純化操作過程煩瑣。本實(shí)驗(yàn)以酸性乙醇（pH=5.0）提取，以白屈菜紅堿的轉(zhuǎn)移率及固形物為考察指標(biāo)，考察乙醇濃度(Ａ)、提取溫度(Ｂ)、pH值(Ｃ)三個(gè)因素對(duì)博落回提取工藝的影響，為中藥博落回藥材的提取提供科學(xué)依據(jù)。
　　1實(shí)驗(yàn)部分
　　1.1 儀器與試藥
　　高效液相色譜儀(Waters 600E泵，717自動(dòng)進(jìn)樣器，Waters M32色譜工作站)；Shimadzu Libror AEL 40SM天平(日本島津)；SYZ-A石英亞沸高純水蒸餾器(江蘇信達(dá)儀器廠)。磷酸(分析純，南京化學(xué)試劑廠)； 乙腈(色譜純，Tedia Company, Inc., Fairfield, OH,USA)。白屈菜紅堿(C21H18NO4)對(duì)照品(Sigma公司)。博落回藥材為市售。
　　1.2 白屈菜紅堿含量測(cè)定方法
　　1.2.1 色譜條件Diamonsil C18色譜柱(迪馬公司)( 4.6 mm×250 mm，5 μm)，乙腈-0.2%磷酸（20∶80）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm，流速1.0 ml/min，柱溫30℃。理論塔板數(shù)以白屈菜紅堿峰計(jì)算不低于3 000。
　　1.2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取白屈菜紅堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。
　　1.2.3 供試品溶液的制備取博落回粗顆粒100 g，共9份，分別按表3中正交試驗(yàn)條件提取，收集各次醇提液，回收乙醇，殘?jiān)�加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
　　1.2.4 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，計(jì)算白屈菜紅堿得率。
　　1.3 提取溶劑的選擇
　　博落回主要活性成分白屈菜紅堿醇溶性較好，可以用一定濃度的乙醇提取，酸化有利于生物堿的浸出，故實(shí)驗(yàn)計(jì)劃選用酸化的80%乙醇提取。又因?yàn)榘浊�菜紅堿是季銨堿，有強(qiáng)的堿性，能溶于酸水中，因此也可以用酸水提取。下面通過實(shí)驗(yàn)比較兩種方法的優(yōu)劣。
　　1.3.1 操作方法準(zhǔn)確稱取干燥博落回果實(shí)(白屈菜紅堿含量為0.57%)2份，每份100 g，樣品號(hào)分別為1和2。樣品1用酸性80%乙醇（pH=5.0）提取3次。第1次用12倍量于攪拌下溫浸（60℃）3 h，傾出上層清液。藥渣第2次加入10倍量于攪拌下溫浸（60℃）2 h，傾出上層清液。藥渣第3次加入8倍量于攪拌下溫浸（60℃）2 h，傾出上層清液。合并3次酸醇提取液，以HPLC測(cè)定白屈菜紅堿的濃度。
　　樣品2用酸水（pH=5.0）溫浸提取3次，與上述酸乙醇提取以每次同樣的體積，同樣的條件，同樣的操作作平行對(duì)比。合并3次提取液，HPLC法測(cè)定白屈菜紅堿的濃度。
　　1.3.2 結(jié)果與討論測(cè)定兩組實(shí)驗(yàn)提取液體積和白屈菜紅堿的濃度，計(jì)算白屈菜紅堿的量，并計(jì)算提取率。取提取液20 ml置蒸發(fā)皿中蒸干，真空干燥稱重。計(jì)算每種提取方法總的所得固形物的量。結(jié)果見表1。
　　
　　由表1可知，酸性乙醇的提取率（91.9%）高于酸水提取率（83.5%），并且酸性乙醇提取所得固形物量低于酸水提取。因此我們綜合考慮提取率、所得固形物的量，優(yōu)選酸性乙醇提取的方法。下面進(jìn)一步優(yōu)化酸性乙醇提取的條件。
　　1.4 提取工藝的選擇
　　1.4.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，影響提取效果的的主要因素有乙醇濃度、提取溫度、溶劑的pH值�，F(xiàn)就此三方面因素，各設(shè)立3個(gè)水平，以白屈菜紅堿的轉(zhuǎn)移率和所得固形物為考察指標(biāo)，每個(gè)因素各取3個(gè)水平以正交表L9(34)進(jìn)行三因素三水平的正交試驗(yàn)（表2）。
　　
　　1.4.2 樣品的制備精密稱取干燥博落回果實(shí)9份，每份100 g。按表2中正交試驗(yàn)條件分別提取3次。第1次12倍量3 h，第2次10倍量2 h，第3次8倍量2 h。合并3次酸醇提取液，以HPLC測(cè)定白屈菜紅堿的濃度。每個(gè)試驗(yàn)提取液精密量取20 ml，蒸干，真空干燥，稱重，計(jì)算所得固形物量。

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