斷面紅棕色及類白色土茯苓藥材中總鞣質(zhì)的含量分析

　　[摘要] 土茯苓在藥材斷面有類白色及淡紅棕色2種。在前期的實驗發(fā)現(xiàn)，2種斷面顏色的土茯苓在抗炎效果和化學成分方面有較大差異。該文首次以紫外-可見分光光度法對28個不同采集地斷面紅棕色及類白色土茯苓中的總鞣質(zhì)含量進行比較分析，旨在為該藥材資源的合理開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供一定的實驗及理論依據(jù)。在實驗中對2010年版《中國藥典》鞣質(zhì)含量測定方法中加樣回收進行了改進，以鞣酸代替沒食子酸進行加樣回收試驗。
　　[關(guān)鍵詞] 斷面紅棕色及類白色土茯苓；總鞣質(zhì)；加樣回收；鞣酸；紫外-分光光度法
　　土茯苓為百合科植物光葉菝葜Smilax glabra的干燥根莖。具除濕，解毒，通利關(guān)節(jié)之功能[1]。歷版《中國藥典》均記載土茯苓在藥材斷面有類白色及淡紅棕色2種，本課題組長期調(diào)查的結(jié)果表明，全國藥材市場上根據(jù)其產(chǎn)地不同，將斷面紅色或白色分為2類來分別使用，如四川、廣東、廣西、浙江產(chǎn)者為斷面類白色，貴州、湖南產(chǎn)者為斷面紅棕色，從而使該藥材在應用上多樣化、復雜化。在前期的實驗中作者發(fā)現(xiàn)，土茯苓有較好的抗炎作用，2種斷面顏色的土茯苓在化學成分方面也存在較大差異。而鞣質(zhì)是植物界中普遍存在的一類次生代謝產(chǎn)物，具有抗菌、抗病毒和抗腫瘤的作用，近年來越來越多的研究表明鞣質(zhì)具有清除生物體內(nèi)過剩的自由基，維護細胞膜的流動和蛋白質(zhì)的構(gòu)象，從而在抑制脂質(zhì)過氧化及心血管病、抗腫瘤、抗突變、抗衰老、抗白內(nèi)障等方面有獨到功效[2]。故鞣質(zhì)是天然的抗氧化劑，在土茯苓中有收斂、止血、抗炎及抗菌的作用。而有關(guān)斷面紅棕色及類白色土茯苓藥材鞣質(zhì)的含量未見報道，故本文首次對28個不同采集地斷面紅棕色及類白色土茯苓中的總鞣質(zhì)含量進行比較分析，旨在為該藥材資源的合理開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供一定的實驗及理論依據(jù)。
　　1材料
　　紫外-可見分光光度計（GBC-20，澳大利亞照生公司）、超聲提取儀（SK8210LHC，上海科導超聲儀器有限公司）、1/1萬分析天平（AB104-N，梅特勒上海有限公司）、沒食子酸對照品（批號110831-200302，中國食品藥品檢定研究院）、鞣酸、無水碳酸鈉、鎢酸鈉、鉬酸鈉、鹽酸、磷酸、硫酸鋰、溴、干酪素等均為分析純，蒸餾水為實驗室自制。磷鉬鎢酸試液按2010年版《中國藥典》附錄中的方法配制。
　　所有采集樣品、購買飲片均由貴陽中醫(yī)學院生藥教研室董立莎教授鑒定為百合科植物光葉菝葜S. glabra的根莖，憑證標本保存于貴陽中醫(yī)學院藥學院生藥教研室。樣品均采用自然陰干的方法干燥。
　　2方法與結(jié)果
　　2.1對照品溶液的配制
　　精密稱取沒食子酸對照品45.68 mg于100 mL棕色量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取10 mL，置100 mL棕色量瓶中，用水稀釋置刻度，搖勻，即得（每1 mL中含沒食子酸0.045 68 mg）。
　　2.2供試品溶液的配制
　　精密平行稱取土茯苓藥材粉末1.5 g，各3份，分別置250 mL棕色量瓶中，加150 mL 60%乙醇，放置過夜，超聲處理20 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置（使固體物沉淀），濾過，棄去初濾液50 mL，精密量取續(xù)濾液20 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
　　2.3標準曲線的制備
　　精密量取沒食子酸對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 mL分別置25 mL棕色量瓶中，各加入磷鉬酸試液1 mL，再分別加水11.5，11，10，9，7 mL，用29%碳酸鈉溶液稀釋置刻度，搖勻，放置30 min以相應的試劑為空白對照，在760 nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標，對照品質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制坐標曲線。得回歸方程Y=0.008 4X-0.000 3，r=0.999 0。結(jié)果表明沒食子酸在0.914～7.309 mg·L^-1成良好的線性關(guān)系。
　　2.4測定用溶液的配制
　　2.4.1土茯苓（斷面紅棕色）總酚測定用溶液的配制 精密量取2.2項下制備的溶液10 mL，置25 mL棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取所配溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按2.3項下的方法，自“加入磷鉬酸試液1 mL”起，加水10 mL即得。
　　2.4.2土茯苓（斷面類白色）總酚測定用溶液的配制 精密量取2.2項下制備的溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按2.3項下的方法，自“加入磷鉬酸試液1 mL”起，加水10 mL即得。
　　2.4.3不被吸附的多酚測定溶液的配制 精密量取供試品溶液25 mL加至已盛有0.8 g干酪素的100 mL具塞錐形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保溫1 h，時時振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，加入磷鉬酸試液1 mL，加水10 mL即得。
　　2.5測定條件的選擇
　　2.5.1檢測波長的選擇 取沒食子酸對照品和總酚比色液，按照2.3項下方法顯色，分別在600～900， 400～900 nm進行全波長掃描，得出最大吸收波長為760 nm，與2010年版《中國藥典》記載一致。
　　2.5.2干酪素用量的選擇 為了評價干酪素吸附鞣質(zhì)的效率，對干酪素的用量進行了考察。分別精密量取5份都勻楊梅山樣品溶液各25 mL于分別裝有0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 g干酪素的100 mL錐形瓶中，分別密塞，置30 ℃水浴中保溫1 h，時時振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按2.3項下的方法，自“加入磷鉬酸試液1 mL”起，加水10 mL，即得。結(jié)果表明隨著干酪素用量的增加游離多酚的含量逐漸減少，當達到0.8 g時，溶液中游離多酚的含量不再減少，說明鞣質(zhì)已經(jīng)被干酪素吸附完全，因此確定干酪素用量為0.8 g。

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